1、淮山藥多糖的免疫調(diào)節(jié)作用研究【摘要】目的討論淮山藥粗多糖對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法小鼠灌胃給予不同劑量200，400和800g/kg的淮山藥多糖，1次/d，連續(xù)8d，進(jìn)展nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)TT法、測(cè)定血清溶血素測(cè)定半數(shù)溶血值法、小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)。結(jié)果山藥多糖具有增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖才能的作用，促進(jìn)小鼠抗體生成的作用和增強(qiáng)小鼠碳廓清才能的作用。結(jié)論淮山藥多糖具有一定的免疫功能增強(qiáng)作用?！娟P(guān)鍵詞】淮山藥；多糖；免疫調(diào)節(jié)Abstrat：bjetiveTinvestigatetheiunlgienhaneentfDisreappsitaThunb.plysaharide.ethdsDisr

2、eappsitaThunb.plysaharideindifferentdsages(200,400,800g/kg)eregivenbyIGfr8d.Aseriesftestserearriedut,suhasthespleenlyphellstransfratinfnAinduingethd(TTethd),helytitestfbldseruandhehreandusearbntest.ResultsTheresultsshedthatDisreappsitaThunb.plysaharideassignifianttnAinduedieLyphytetransfratintest；H5

3、0raisedinallthreenentratins;ratifnyte-arphagearbngraineliinatinhassignifianthangestthentrl.nlusinDisredppsitaThunb.plysaharidepssessesaptentialeffetfiuneregulatin.Keyrds：DisreappsitaThunb.;Plysaharide;Iunityderatin山藥屬常用中藥，味甘、性平，具有補(bǔ)脾養(yǎng)胃、生津益肺、補(bǔ)腎澀精等作用。山藥多糖DisreappsitaThunb.plysaharide是從山藥中別離提純的水溶性多糖成分，具

4、有免疫調(diào)節(jié)作用。以往有關(guān)山藥的藥理研究多針對(duì)河南省出產(chǎn)的鐵棍山藥和太谷山藥等懷山藥品種。而山藥在全國(guó)大局部地區(qū)均有栽培，淮山藥為其在淮河中下游地區(qū)江蘇、安徽兩省北部傳統(tǒng)栽培品種。以食用為主，兼作藥用。對(duì)淮山藥等山藥地方品種的藥理作用至今仍缺乏研究。為了充分利用淮山藥資源，本實(shí)驗(yàn)研究了江蘇產(chǎn)淮山藥粗多糖對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。1材料將淮山藥削皮切片，曬干后粉碎，枯燥后稱取粗粉60目900.0g，參加適量蒸餾水在水浴中浸提，其間不斷攪拌，靜置冷卻后離心3000r/in，5in除去不溶物，搜集上清液，減壓濃縮。在冷卻后的上清液中參加95%乙醇至醇含量在80%以上，不斷攪拌，有大量沉淀生成，離心，搜集沉

5、淀，分別用無(wú)水甲醇和乙醚洗滌，以除去水分和雜質(zhì)，得到灰白色粉末狀粗多糖38.88g(1g粉末相當(dāng)于生藥23.14g)。粗多糖得率可以到達(dá)4.32%，該粗多糖中含有18.43%的山藥多糖。1.3綿羊紅細(xì)胞SRB與補(bǔ)體制備安康綿羊頸脈取血，將羊血放入有玻璃珠的滅菌錐形瓶中朝一個(gè)方向搖動(dòng)，以脫纖維，用阿氏液保存于4冰箱保存?zhèn)溆?。用時(shí)生理鹽水2000r/in離心10in洗滌3遍。采集豚鼠血，別離出血清至少5只豚鼠的混合血清，前將1l壓積SRB參加到5l豚鼠血清中，放4冰箱30in，經(jīng)常振蕩，離心取上清，分裝小瓶，-70保存。用時(shí)以生理鹽水按110稀釋。2方法小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組給予蒸餾水及山藥多糖200

6、，400，800g/kg13個(gè)劑量組，每組10只。灌胃體積0.1l/10g體重，1次/d，連續(xù)8d。2.1nA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)1640培養(yǎng)液用微孔濾膜過(guò)濾除菌，參加10%小牛血清、1%谷氨酰胺200g/l、青霉素100g/l、鏈霉素100g/l及2-巰基乙醇5l/l，用無(wú)菌H11l/L或無(wú)菌NaH1l/L調(diào)pH至7.07.2，制成完全培養(yǎng)液；用7.27.4的PBS緩沖液作溶劑，現(xiàn)用現(xiàn)配TT溶液5g/l；以3.5%的無(wú)菌NaH3將無(wú)菌Hansks液pH調(diào)至7.27.4；用雙蒸水配制成100g/l的nA液，過(guò)濾除菌后，-20保存；在96l異丙醇中參加4lHl1l/L制成酸性異丙醇溶液。各

7、組動(dòng)物連續(xù)灌胃至第8天，每鼠頸椎脫臼處死，無(wú)菌取脾，于盛有適量無(wú)菌Hanks液的小平皿中，用攝子輕輕將脾撕碎，制成單個(gè)細(xì)胞懸液，200目過(guò)濾，用Hanks液屢次洗滌、離心后懸浮于2l完全培養(yǎng)液中，用臺(tái)酚染色計(jì)活細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2106個(gè)/l，分兩孔放入培養(yǎng)孔中，每孔1l，一孔加50lnA液，另一孔作為對(duì)照，置5%2，37培養(yǎng)72h，培養(yǎng)完畢前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7l，參加0.7l不含小牛血清的1640培養(yǎng)液，同時(shí)參加50lTT液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)完畢，每孔參加1l酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解，移入1l比色杯中，于分光光度計(jì)，570n處測(cè)定光密度2。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll

8、.2.2血清溶血素測(cè)定半數(shù)溶血值H50的測(cè)定各組動(dòng)物連續(xù)灌胃至3d時(shí)，每鼠腹腔注射2%v/v綿羊紅細(xì)胞懸液0.2l。5d期間不停頓灌胃后，小鼠經(jīng)眼眶取血于離心管中，放置1h，3500r/in離心15in，搜集血清，血清用生理鹽水緩沖液稀釋320倍。將稀釋后血清1l置試管內(nèi)，依次參加10%v/vSRB0.5l，補(bǔ)體1l用生理鹽水按110稀釋，另設(shè)不加血清的對(duì)照管以生理鹽水代替。置37恒溫水浴中保溫30in后，冰浴終止反響。2000r/in離心10in。取上清液1l，都氏試劑3l于試管內(nèi)，同時(shí)取10%v/vSRB0.25l加都氏試劑至4l，于另一支試管內(nèi)，作為SRB的半數(shù)溶血值。充分混勻，放置10

9、in后，于540n處以對(duì)照管作空白，分別測(cè)定各管光密度值2。溶血素的量以半數(shù)溶血值H50表示，按以下公式計(jì)算：各小鼠的半數(shù)溶血值H50=樣品管光密度SRB半數(shù)溶血時(shí)的光密度稀釋倍數(shù)2.3小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)將印度墨汁用生理鹽水稀釋4倍制成用墨汁，稱取1.0gNa23加蒸餾水至1000l配置成0.1%Na23溶液。各組動(dòng)物連續(xù)灌胃至8d時(shí)，每鼠尾靜脈注入注射用墨汁0.1l/10gb，注入后立即計(jì)時(shí)，于注入后0.5，6in分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20l，加到2lNa23溶液中，用分光光度儀計(jì)在600n波長(zhǎng)處測(cè)光密度值，以Na23溶液作為空白對(duì)照。頸椎脫臼處死小鼠，取肝臟、脾臟，用濾紙吸干臟器外表血污，稱重3

10、。按以下公式計(jì)算廓清指數(shù)K：廓清指數(shù)K=lgD50-lgD6/(t6-t0.5)2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)計(jì)量資料用s)表示，各組間實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的比擬采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，P0.05有顯著差異。3結(jié)果3.1nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)TT法用加nA孔的光密度值減去不加nA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖才能。結(jié)果如下。表1淮山藥多糖對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖才能的影響(略)以上結(jié)果說(shuō)明山藥多糖400，800g/kg劑量時(shí)，具有增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的才能的作用。3.2血清溶血素的測(cè)定實(shí)驗(yàn)H50法結(jié)果見表3。表3淮山藥多糖對(duì)小鼠血清溶血素的影響(略)以上結(jié)果說(shuō)明淮山藥多糖各劑量都具有促進(jìn)小鼠抗體生成的作用。3.3小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4淮山藥多糖對(duì)小鼠碳廓才能的影響(略)以上結(jié)果說(shuō)明淮山藥多糖800g/kg劑量時(shí)，具有增強(qiáng)小鼠碳廓清才能的作用。4討論本研究測(cè)定了淮山藥粗多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果顯示淮山藥粗多糖對(duì)能增強(qiáng)小鼠淋巴細(xì)胞增殖才能、促進(jìn)小鼠抗體生成、增強(qiáng)小鼠碳廓清才能等作用。結(jié)果說(shuō)明淮山藥多糖對(duì)小鼠體液免疫、細(xì)胞免疫功能、非特異性