1、HBVX蛋白與原發(fā)性肝癌HBVX蛋白與原發(fā)性肝癌HBVX蛋白與原發(fā)性肝癌一、乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus, HBV）2020/11/42HBVX蛋白與原發(fā)性肝癌HBVX蛋白與原發(fā)性肝癌HBVX蛋白一、乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus, HBV）2020/11/42一、乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus1、形態(tài)結(jié)構(gòu)形態(tài)與結(jié)構(gòu)：病人血清中存在3種形態(tài)的病毒粒： 管形顆粒 小球形顆粒 Dane顆粒電鏡下形態(tài)2020/11/431、形態(tài)結(jié)構(gòu)形態(tài)與結(jié)構(gòu)： 管形顆粒 小球形顆1.大球形顆粒 又稱Dane 顆粒2. 小球形顆粒3.管形顆粒2020/11

2、/441.大球形顆粒 又稱Dane 顆粒2. 小球形顆粒3.管形2、基因組結(jié)構(gòu)嗜肝DNA病毒科，基因組約3.2kb。由長(zhǎng)鏈L(-)和短鏈S(+)組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA，長(zhǎng)鏈載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼。4個(gè)ORF: PreS/S, Polymerase, Core, X。cccDNA是HBV復(fù)制的模版。大部分抗病毒的藥物對(duì)cccDNA基本沒有作用。X蛋白與肝癌的發(fā)生有關(guān)。2020/11/452、基因組結(jié)構(gòu)嗜肝DNA病毒科，基因組約3.2kb。2020 HBV基因組結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpre-cXHBV DNA 3.2 kbpre-S1 pre-S1蛋白pre-S2 pre-S2蛋

3、白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPX HBxAg編碼HBsAgpre-S2pre-S1+-2020/11/46 HBV基因組結(jié)構(gòu)pre-s1pre-s2SPCpre-cX3、HBV的抗原組成 表面抗原HBsAg核心抗原HBcAg e抗原HBeAgHBcAgHBsAgHBeAgDane顆粒-+2020/11/473、HBV的抗原組成HBcAgHBsAgHBeAgDane顆4、病毒的復(fù)制HBV的復(fù)制方式： 吸附、穿入、脫殼，DNA進(jìn)入肝細(xì)胞核 以-DNA為模板，修復(fù)+DNA的裂隙區(qū) -DNA2.1kb RNA外衣殼蛋白 3.5kbRNA內(nèi)衣殼蛋白及HBV- DNA20

4、20/11/484、病毒的復(fù)制HBV的復(fù)制方式：2020/11/48HBV的復(fù)制2020/11/49HBV的復(fù)制2020/11/495、HBV的致病機(jī)制1.免疫低下：HBsAg無(wú)癥狀攜帶者2.病毒變異：逃逸免疫3.細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷：CTL細(xì)胞免疫功能正常：急性肝炎細(xì)胞免疫功能低下：慢性肝炎細(xì)胞免疫反應(yīng)過強(qiáng)：暴發(fā)性肝炎免疫耐受：HBsAg無(wú)癥狀攜帶者4.免疫復(fù)合物性的免疫損傷：肝外及肝臟損傷5.自身免疫反應(yīng)的免疫損傷：肝特異性脂蛋白抗原2020/11/4105、HBV的致病機(jī)制1.免疫低下：HBsAg無(wú)癥狀攜帶者細(xì)二、HBV與原發(fā)性肝癌原發(fā)性肝癌(HCC)是目前世界上十大惡性腫瘤之一, 而慢性

5、乙型肝炎病毒(HBV)感染是其主要原因。由HBV X基因編碼的X蛋白(HBx)是一種重要的調(diào)節(jié)蛋白, 在HBV誘發(fā)HCC過程中扮演重要角色。HBx是一種多功能蛋白, 對(duì)基因轉(zhuǎn)錄、信號(hào)傳遞、細(xì)胞周期和細(xì)胞增生凋亡等均具有調(diào)節(jié)作用, HBx可能通過這些作用直接或間接地導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變。2020/11/411二、HBV與原發(fā)性肝癌原發(fā)性肝癌(HCC)是目前世界上十大惡1、HBx的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 1. HBx由HBV ORF中最小的X基因編碼, 154個(gè)氨基酸組成, 分子量16.5 kDa。 2. 全長(zhǎng)的HBx由N-端1/3負(fù)調(diào)節(jié)區(qū)和C-端2/3反式激活或共激活區(qū)兩個(gè)功能區(qū)構(gòu)成。2020/11/4121、HB

6、x的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 1. HBx由HBV ORF中最小2、HBx的功能 HBx本身不能直接與雙鏈DNA結(jié)合, 但可通過蛋白-蛋白相互作用與TATA結(jié)合蛋白及RNA聚合酶亞單位RPB5等反式作用因子結(jié)合, 增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子NF-B、AP-l和SP-l等的活性, 反式激活啟動(dòng)子如HBV的C啟動(dòng)子, 調(diào)節(jié)N-ras 、c-myc 、c-jun 等癌基因及P53 、P21 和P19等抑癌基因的表達(dá)。HBx還可激活PI3K、JNKs、MAPK等信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)而參與HCC的發(fā)生和發(fā)展。2020/11/4132、HBx的功能 HBx本身不能直接與雙鏈DNA結(jié)合, 3、HBx基因的整合與突變整合：在表達(dá)HBx的HCC和癌

7、旁組織中, 可見多個(gè)癌基因表達(dá)增加的現(xiàn)象。 X基因整合的肝癌細(xì)胞中P16 mRNA和蛋白水平均受影響, X基因可能通過整合使P16 基因序列變異, 引起P16 表達(dá)缺陷, 導(dǎo)致其G1-S期滯留和抗增生效應(yīng)喪失。 X基因可能通過整合直接激活原癌基因、抑制抑癌基因的表達(dá)而參與肝細(xì)胞癌變的發(fā)生。2020/11/4143、HBx基因的整合與突變整合：2020/11/414突變：游離的HBV DNA多含全序列X基因, 而整合的X基因常出現(xiàn)缺失和點(diǎn)突變，其中以X基因3-端核苷酸的缺失最常見。3-端核苷酸的缺失導(dǎo)致HBx出現(xiàn)C-端的缺失。全序列的HBx抑制ras和myc轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力, 而C-端缺失的HBx

8、使ras和myc轉(zhuǎn)化鼠胚胎纖維母細(xì)胞的活性增強(qiáng)。C-端缺失的HBx能加速Huh7細(xì)胞G0/G1-S期的進(jìn)程, 并使生長(zhǎng)抑制效應(yīng)結(jié)構(gòu)域丟失。C-端缺失的HBx失去對(duì)細(xì)胞增生和轉(zhuǎn)化的抑制作用, 并促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，在肝癌形成中起重要作用。2020/11/415突變：2020/11/4154、HBx對(duì)肝細(xì)胞增生的影響HBx可通過受體酪氨酸蛋白激酶途徑等多種信號(hào)傳導(dǎo)通路參與肝細(xì)胞增生的調(diào)節(jié): (1)促胰島素樣生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子受體和表皮生長(zhǎng)因子受體高表達(dá)，激活Src家族激酶，活化Jak1-STAT或與P53結(jié)合使P53下游靶基因PTEN表達(dá)下調(diào)，激活PI3K/Akt/Bad信號(hào)通路。 HBx也

9、可直接與PI3K的催化亞基p110結(jié)合激活PI3K，或使Akt/Bad磷酸化激活PI3K信號(hào)通路。(2)通過促IGF、IGFR的高表達(dá)進(jìn)而活化受體酪氨酸激酶，或通過觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子的釋放激活RAS/RAF/MAPK信號(hào)通路。(3)促進(jìn)Jaks/STATs的酪氨酸磷酸化，活化Jaks-STATs信號(hào)通路，促進(jìn)STAT依賴性基因轉(zhuǎn)錄。 (4)與MEKK1, SEK1, SAPK和14-3-3蛋白形成胞質(zhì)復(fù)合物, 上調(diào)SAPK/JNK通路。HBx通過激活以上各信號(hào)傳導(dǎo)通路參與肝細(xì)胞生長(zhǎng)、增生和轉(zhuǎn)化的調(diào)節(jié)。2020/11/4164、HBx對(duì)肝細(xì)胞增生的影響HBx可通過受體酪氨酸蛋白激酶途HBx調(diào)節(jié)端粒

10、酶活性：端粒酶的激活被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生的重要事件，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)是端粒酶的一個(gè)亞單位，調(diào)節(jié)端粒酶限速的決定因素，hTERT的表達(dá)與端粒酶的活性密切相關(guān)。 HBx陽(yáng)性肝癌細(xì)胞hTERT mRNA水平明顯高于HBx陰性細(xì)胞。其啟動(dòng)子序列上含有AP-2和Sp1結(jié)合位點(diǎn)，HBx有可能通過AP-2和Spl調(diào)節(jié)hTERT的轉(zhuǎn)錄，激活端粒酶的表達(dá)。2020/11/417HBx調(diào)節(jié)端粒酶活性：2020/11/417HBx影響蛋白酶體功能：蛋白酶體是一類與多數(shù)真核細(xì)胞非溶酶體蛋白降解有關(guān)的復(fù)合物。在細(xì)胞分化、細(xì)胞周期調(diào)控、DNA修復(fù)及凋亡等過程中具有重要的作用。蛋白酶體功能上的改變可以導(dǎo)致細(xì)胞的高

11、度增生和惡性轉(zhuǎn)化, 在細(xì)胞的癌變過程中具有不可忽視的作用。HBx可通過與26S蛋白酶體的19S及20S的亞單位相互作用導(dǎo)致蛋白酶體功能改變, 從而逆轉(zhuǎn)蛋白酶體對(duì)一些轉(zhuǎn)錄因子的降解, 使這些因子半衰期延長(zhǎng), 增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄。2020/11/418HBx影響蛋白酶體功能：2020/11/4185、HBx對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的影響HBx通過影響腫瘤細(xì)胞之間的分離、細(xì)胞外基質(zhì)的降解和腫瘤細(xì)胞入侵血管或淋巴管等步驟而參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。2020/11/4195、HBx對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的影響HBx通過影響腫瘤細(xì)胞HBx表達(dá)細(xì)胞中CD44呈極性分布并誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排、偽足的伸出及-整合素亞

12、單位被重新分布到細(xì)胞的偽足尖上, 增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。HBx也可通過降低E-纖連素的表達(dá)或激活Src激酶磷酸化-整合素使細(xì)胞間肌動(dòng)蛋白骨架和鈣黏蛋白復(fù)合物間的連接斷裂, 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分離、擴(kuò)散。多種腫瘤組織中均可檢測(cè)到環(huán)氧化酶-2的表達(dá), COX-2與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。 HBx上調(diào)COX-2的表達(dá),進(jìn)而促其靶基因MMP1的表達(dá), 并激活MMP-2。HBx還可經(jīng)MAPK等信號(hào)傳導(dǎo)通路提高細(xì)胞中MMP-9和MMP-3的水平。MMPs通過降解ECM及血管基底膜, 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。2020/11/420HBx表達(dá)細(xì)胞中CD44呈極性分布并誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排、偽足的6、HBx對(duì)細(xì)胞周期的

13、影響 細(xì)胞周期的控制主要由一種蛋白激酶(CDK)及其抑制劑(CDKI)形成一個(gè)級(jí)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)控制。這一網(wǎng)絡(luò)中某一環(huán)節(jié)失調(diào), 將導(dǎo)致細(xì)胞的生長(zhǎng)失控及腫瘤的形成。 HBx可通過對(duì)CDK和CDKI的活性及細(xì)胞周期校驗(yàn)點(diǎn)的調(diào)節(jié)而影響細(xì)胞周期進(jìn)程, 參與對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，促進(jìn)細(xì)胞分裂增生。 2020/11/4216、HBx對(duì)細(xì)胞周期的影響 細(xì)胞周期的控制主要由一種7、HBx對(duì)肝細(xì)胞凋亡的影響 HBx有可能通過對(duì)肝細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)而起到控制HCC發(fā)生的作用。HBx對(duì)凋亡既有抑制作用又有激活作用, 可能抑制凋亡利于肝細(xì)胞的無(wú)限增生, 而激活凋亡則利于HBV的復(fù)制和擴(kuò)散。 HBx通過抑制線粒體膜上死亡配體Bid表達(dá)而抑制細(xì)胞色素C從線粒體釋放或者直接阻止ctyC從線粒體釋放, 降低caspase-8和caspase-3的活性而抑制凋亡。 相反, HBx也可結(jié)合于線粒體電壓依賴性陰離子通道3降低跨膜電壓, 使ctyC從線粒體釋放, 或結(jié)合于線粒體滲透性轉(zhuǎn)換通道, 而不改變ctyC和凋亡相關(guān)因子的重新分布, 誘導(dǎo)凋亡。2020/11/4227、HBx對(duì)肝細(xì)胞凋亡的影響 HBx有可能通過對(duì)肝細(xì)胞8、HBx對(duì)肝細(xì)胞的其他影響 HBx可影響肝