1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)自然界中的微生物已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬(wàn)5千種，被認(rèn)為非常危險(xiǎn)的有600種，在人間傳染的病原微生物380種。這些微生物存在于地球的各個(gè)角落，從寒冷的極地到炎熱的赤道，從4.2千米地層深處到85千米高空（芽孢）,均有它們的蹤跡 。空氣、水、土壤、人體的體表以及與外界相通的腔道，均有不同種類和數(shù)量的微生物存在。存在于人體消化道的細(xì)菌超過(guò)800種，數(shù)量可達(dá)100萬(wàn)億（1014），菌體重量11.5公斤。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)2自然界中的微生物已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的微生物大約13萬(wàn)5千種，被認(rèn)為非常醫(yī)學(xué)微

2、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三 (P38)空氣與人體體表細(xì)菌學(xué)檢查空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P41醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)3醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三 (P38)空氣與人體體表細(xì)菌空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38 空氣是人類賴以生存的環(huán)境之一，也是重要的疾病傳播媒介。空氣中的病原菌主要來(lái)自病人的排泄物和分泌物。這些污物，因風(fēng)吹，以及人類日?；顒?dòng)，以氣溶膠的形式懸浮于空中，使空氣受到污染。環(huán)境：不利于微生物生長(zhǎng)。種類：主要是病毒、真菌和細(xì)菌。在醫(yī)院，公共場(chǎng)所致病菌的數(shù)量比較多。作用：可迅速全球傳播。危害：引起培養(yǎng)基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道傳染病。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝?/p>

3、和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)4空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38 空氣是人類賴以生實(shí)驗(yàn)方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培養(yǎng)基表面；培養(yǎng)以后，計(jì)數(shù)菌落形成單位（ colony forming unit ，CFU），了解空氣的污染情況。實(shí)驗(yàn)步驟：每組1塊平板，選擇采樣地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室、宿舍、衛(wèi)生間、飯?zhí)没蛉芜x地點(diǎn)），將平板蓋打開，蓋朝下放置在平板旁，平板暴露于空氣中15分鐘，然后蓋上蓋子，作標(biāo)記。37溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。 CFU/m3 50000NAT86N(直徑7cm平板）。 N：平板上的菌落數(shù)。 A：平板面積(平方厘米)。 T：采樣時(shí)間(分鐘)。醫(yī)學(xué)微

4、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)5實(shí)驗(yàn)方法：自然沉降法是根據(jù)空氣中細(xì)菌氣溶膠粒子，在地心引力的空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號(hào)地點(diǎn)時(shí)間(min)菌落形成單位(CFU)1衛(wèi)生間152食堂153門診大廳154呼吸科病房155呼吸科ICU156外科病房157外科ICU158外科治療室159嬰兒室1510實(shí)驗(yàn)室15醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)6空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號(hào)地點(diǎn)時(shí)間(min)菌落形成單位(CFU)手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P41 在日常生活中，手的接觸范圍廣，使用頻率高，受到污染的機(jī)會(huì)也最多。一只外觀比較“干凈 ”的手，可攜帶10萬(wàn)個(gè)細(xì)菌、200多種病毒。因此，經(jīng)手傳播的疾病很多，范圍很廣，

5、包括腸道傳染病、部分呼吸道傳染病、皮膚傳染病，以及一切可經(jīng)手間接傳播的疾病。常住菌：存在于皮膚表面、毛囊和皮脂腺。種類和數(shù)量比較恒定。附著在皮膚上比較牢固，用一般洗手方法，常不易去除。暫住菌：存在于皮膚表面經(jīng)常暴露的部位。暫住菌是外來(lái)的非正常菌群，種類和數(shù)量不定。引起人類致病的通常是暫住菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)7手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P41 在日常生活中，醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都有傳播病菌的可能。雖然病菌的直接來(lái)源是患者, 但是造成病菌擴(kuò)散的主要途徑則是氣溶膠和醫(yī)務(wù)人員的手。因此，經(jīng)常洗手和消毒是控制醫(yī)院內(nèi)交叉感染的主要方法。實(shí)際上，預(yù)

6、防感染措施中，最簡(jiǎn)單又十分有效的方法就是洗手。據(jù)測(cè)定，只用自來(lái)水洗手可使暫住菌總數(shù)減少40%，用肥皂洗手可減少80%以上。洗手？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)8醫(yī)務(wù)人員，經(jīng)常要與病人接觸，不管是直接接觸，還是間接接觸，都常規(guī)的洗手方法（甲和丙操作）將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液。反復(fù)搓揉雙手，搓揉時(shí)間不應(yīng)少于 30秒。用流水沖洗干凈，整個(gè)洗手過(guò)程不少于1分鐘。能有效地去除大多數(shù)手上的暫住菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)9常規(guī)的洗手方法（甲和丙操作）將手充分浸濕，涂抹肥皂或洗滌液。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)洗手方法（乙和丁操作）用流動(dòng)的水沖洗，將手充分浸濕，涂抹肥皂、洗

7、滌液。分別搓擦1015次。保持雙手低于肘部，流水沖洗一分鐘以上。1.掌心對(duì)掌心搓擦 2.手指交錯(cuò)掌心對(duì)手背搓擦 3.手指交錯(cuò)掌心對(duì)掌心搓擦4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動(dòng)搓擦 6.指尖在掌心中搓擦醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)10醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)洗手方法（乙和丁操作）用流動(dòng)的水沖洗，1.掌心對(duì)掌心搓擦 2.手指交錯(cuò)掌心對(duì)手背搓擦 3.手指交錯(cuò)掌心對(duì)掌心搓擦4.兩手互握互搓指背 5.拇指在掌中轉(zhuǎn)動(dòng)搓擦 6.指尖在掌心中搓擦醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)111.掌心對(duì)掌心搓擦 2.手指交錯(cuò)醫(yī)務(wù)人員洗手指征接觸傳染病患者之后。接觸攜帶多耐藥性細(xì)菌的病人之后。

8、接觸病人的血液、體液、分泌物和排泄物之后。接觸高危病室兩個(gè)病人之間、新生兒室兩個(gè)新生兒之間。接觸舊錢幣之后。 上廁所前后。進(jìn)行微生物操作或作血、尿等生化、免疫測(cè)定之后。在施行各種手術(shù)前后。診斷、治療、護(hù)理特別易感染的病人之前。進(jìn)食之前。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)12醫(yī)務(wù)人員洗手指征接觸傳染病患者之后。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對(duì)照。 2人1塊平板上:甲、丙常規(guī)洗手下:乙、丁標(biāo)準(zhǔn)洗手甲（丙）乙（?。┍♂t(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)131 3 2 4 1 3

9、 2 4 手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一(P2)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)（二）臨床標(biāo)本的檢查程序 細(xì)菌的分離與培養(yǎng)P7目的要求：掌握分離、純化微生物的基本操作技術(shù)。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)14醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一(P2)膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌常見病原性球菌的檢查程序P47： 直接涂片、革蘭染色、鏡檢膿汁、痰、咽部分泌物 觀察菌落性狀、溶血性、色素 血瓊脂平板培養(yǎng) 涂片染色鏡檢 挑取可疑菌落 生化反應(yīng) 純培養(yǎng) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 藥敏實(shí)驗(yàn)血液、穿刺液 肉湯增菌培養(yǎng) 培養(yǎng)液涂片染色境檢 常見腸道致病菌的檢查程序P48：糞便 SS瓊脂、伊紅美藍(lán)平板培養(yǎng) 挑取

10、可疑菌落 血清學(xué)鑒定 血、骨髓 增菌培養(yǎng) 雙糖鐵培養(yǎng)基 染色鏡檢 生化反應(yīng) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)15常見病原性球菌的檢查程序P47：醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)平板劃線分離法： 借助于劃線，將混雜的多種細(xì)菌，在固體培養(yǎng)基表面分散成單個(gè)細(xì)菌，并固定在某一點(diǎn)上。培養(yǎng)以后細(xì)菌各自分裂繁殖，形成肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。 在固體培養(yǎng)基表面或基內(nèi)，由單個(gè)細(xì)菌在局部位置不斷增值的稠密群體稱為單菌落。在固體培養(yǎng)基表面，由多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物,稱為菌苔。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)16平板劃線分離法：醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)平板分區(qū)劃線分離法

11、步驟（5區(qū)）接種環(huán)燒灼滅菌，以免污染標(biāo)本。取標(biāo)本在平板表面上方密集涂布510mm2。燒掉接種環(huán)上多余的標(biāo)本（火焰背面烤干燒灼）?；蝿?dòng)平板，當(dāng)看到平板表面象鏡面有反光的時(shí)候，保持這個(gè)角度，劃線時(shí)就能看清劃線痕跡，以便控制劃線。接種環(huán)與平板呈3040度角，通過(guò)密集涂布部分13次，使接種環(huán)重新沾上少量標(biāo)本(細(xì)菌)，然后在平板表面，以曲線的形式，作大幅度來(lái)回連續(xù)劃線，邊劃邊退，線段要?jiǎng)澋瞄L(zhǎng)而密集，每區(qū)劃線不少于30條。轉(zhuǎn)動(dòng)平板，接種環(huán)通過(guò)第一區(qū)1次，同樣的方法劃第二區(qū)。如此依次劃完35區(qū)。接種環(huán)燒灼滅菌（火焰背面烤干燒灼），以免污染環(huán)境。將平板倒置（蓋在下，底朝上），37培養(yǎng)1824h 。要充分利用平

12、板面積，5區(qū)間隔盡量小，不能劃破瓊脂。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)17平板分區(qū)劃線分離法步驟（5區(qū)）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本510mm2 30條線平板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)18510mm2 30條線平板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生平板劃線分離法P8甲膿汁標(biāo)本普通平板（黃色）乙膿汁標(biāo)本普通平板丙糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)（紫色）丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)19平板劃線分離法P8醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢實(shí)驗(yàn)分組倆倆相對(duì)4人為一組,組號(hào)編在電源插座上。每組按從前到后,從左到右的順序，分別編號(hào)為甲

13、、乙、丙、丁。 甲 乙 4丙 丁甲 乙 3丙 丁甲 乙 2丙 丁甲 乙 1丙 丁甲 乙 5丙 丁甲 乙 8丙 丁甲 乙 7丙 丁甲 乙 6丙 丁甲 乙 10丙 丁甲 乙 9丙 丁 講 臺(tái)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)20實(shí)驗(yàn)分組倆倆相對(duì)4人為一組,組號(hào)編在電源插座上。甲 接種環(huán)燒灼滅菌使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。使用后，先在火焰背面將把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。金屬桿快速通過(guò)火焰23次，殺滅表面微生物醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)21接種環(huán)燒灼滅菌使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒接種環(huán)直徑3m

14、m環(huán)面垂直離開液面：快速3ul,慢速1ul。環(huán)面水平離開液面：快速6ul,慢速2ul。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)22接種環(huán)直徑3mm環(huán)面垂直離開液面：快速3ul,慢速1ul。環(huán)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)培訓(xùn)課件醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)24醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)24接種環(huán)與平板接觸點(diǎn)和劃線方法？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)25接種環(huán)與平板接觸點(diǎn)和劃線方法？醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)26醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)26510mm2 30條線平

15、板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)27510mm2 30條線平板劃線不少于150條線醫(yī)學(xué)微生37培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)2837培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的37培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)2937培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的37培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)3037培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的37培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)3137培養(yǎng)24小時(shí) 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝?/p>

16、和糞便標(biāo)本中病原菌的安全警告接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑100um沉降很快，50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開，5um通過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說(shuō)話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)32安全警告接種環(huán)接種平板一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。醫(yī)思考題為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?為什么金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見的重要病原菌?為什么接種環(huán)使用前后必須燒灼滅菌？

17、忽略了有什么危害?做細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)，平板為什么要倒置?培養(yǎng)細(xì)菌的常用方法有哪些?從臨床標(biāo)本中分離病原菌，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)? 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)33思考題為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)搶?shí)驗(yàn)內(nèi)容空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38普通平板(1組1塊）手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查P41普通平板(2人1塊 劃分8格）平板劃線分離法P8 甲，乙膿汁標(biāo)本普通平板(黃色，1人1塊） 丙，丁糞便標(biāo)本伊紅美藍(lán)(紫色，1人1塊）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)34實(shí)驗(yàn)內(nèi)容空氣的細(xì)菌學(xué)檢查P38醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)撝图S便標(biāo)本常用器材擺放順序：電源插座試管架酒精燈污物盤。試管架上器材：