1、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合單克隆抗體(kngt)制備細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)第一頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)(piyng)和核移植技術(shù)一、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)第二頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件（一）、概念(ginin) 是指從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些(zhxi)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。（二）、原理(yunl)細(xì)胞分裂增殖第三頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件（三）過(guò)程(guchng) 幼齡動(dòng)物取動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)第四頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件動(dòng)物胚胎或幼齡(yu ln)動(dòng)物的組織、

2、器官胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎單個(gè)細(xì)胞(xbo)加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液接觸抑制部分細(xì)胞“癌變”，無(wú)限傳代10代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：50代細(xì)胞（大多死少不死）（大多死少不死）第五頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞(xbo)貼壁過(guò)程細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)(piyng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面(biomin)光滑、無(wú)毒、易于帖附。第六頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面(biomin)相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)(qing dio)二：

3、接觸抑制第七頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件有關(guān)(yugun)概念:原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞(xbo)為原代細(xì)胞(xbo)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。第八頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件有關(guān)(yugun)概念細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分(b fen)細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改

4、變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第九頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織(zzh)、器官胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎單個(gè)細(xì)胞(xbo)加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液接觸抑制部分細(xì)胞“癌變”，無(wú)限傳代10代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：50代細(xì)胞（大多死少不死）（大多死少不死）第十頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件思考題：1、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡(yu ln)個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為什么培養(yǎng)(piyng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力(nngl)旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一

5、起限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。第十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3、胰蛋白酶的作用是什么(shn me)呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么(shn me)成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)(wzh)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。4、細(xì)胞膜的主要成份(chng fn)是什么？蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能第十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件6、既然胰蛋白酶(y dn bi mi)能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問(wèn)題呢？7、能夠用胃蛋白酶代替(dit)胰蛋白酶嗎？為什么？注意(zh y)時(shí)間的控制 不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞

6、的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近第十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3.總結(jié)：動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織(zzh)、器官細(xì)胞(xbo)懸浮液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無(wú)限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長(zhǎng)緩慢以至于完全停止，部分細(xì)胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質(zhì)可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。原代培養(yǎng)第十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件歸納(gun)過(guò)程取 的組織(zzh

7、)、器官細(xì)胞(xbo)懸浮液 酶 細(xì)胞貼壁、接觸抑制 培養(yǎng) 10代細(xì)胞 培養(yǎng)細(xì)胞株無(wú)限傳代細(xì)胞系單個(gè)細(xì)胞加 液遺傳物質(zhì) 改變遺傳物質(zhì) 改變動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物胰蛋白培養(yǎng)原代傳代未已50代細(xì)胞第十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件討論(toln)對(duì)于多細(xì)胞生物來(lái)說(shuō)，細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境(hunjng)中，根據(jù)你所學(xué)的知識(shí)，認(rèn)為體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該需要什么樣的條件？第十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件4.動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)的條件:1）無(wú)菌無(wú)毒 的環(huán)境(hunjng)： 適宜的溫度：人和哺乳動(dòng)物(brdngw)細(xì)胞最適溫度為36.50.5。適宜的酸堿度：PH：液體合成培養(yǎng)基：（糖、氨基酸）、促生長(zhǎng)因子、（無(wú)機(jī)鹽、微

8、量元素）等；通常還需加入血漿、血清等天然成分。4）氣體環(huán)境：2）營(yíng)養(yǎng)：3）溫度和pH：“95空氣+5CO2”的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝必須的； CO2維持培養(yǎng)液的PH。對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無(wú)菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過(guò)程中污染；定期更換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。第十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件5.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(jsh)的應(yīng)用病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體、基因工程技術(shù)、檢測(cè)有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)(yxu)應(yīng)用等。第十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的 細(xì)胞培養(yǎng)基特有成分 、植物激素葡萄糖、

9、 培養(yǎng)結(jié)果植物體培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得全能性增殖(zngzh)蔗糖(zhtng)動(dòng)物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞第十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件 2、在動(dòng)物細(xì)胞(xbo)培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞(xbo)是 （ ） A獲得不死性的細(xì)胞 B10代以內(nèi)細(xì)胞 C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 （ ） A.動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)AD課堂(ktng)反饋練習(xí)第二十頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中正確的是：（ ）A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞 分泌蛋白B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分

10、散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生(fshng)在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過(guò)渡 過(guò)程中D、培養(yǎng)至50代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變B第二十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件4、一般說(shuō)來(lái)，動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要(xyo)滿足以下條件（ ）無(wú)毒的環(huán)境(hunjng) 無(wú)菌的環(huán)境(hunjng) 培養(yǎng)基需要加入血清 溫度與動(dòng)物體溫相似 需要O2，不需要CO2 CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PHA、 B、 C、 D、 D第二十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn) （ ）細(xì)胞貼壁 有絲分裂 細(xì)胞分化 接觸抑制 減數(shù)分裂 原代培養(yǎng)(piyng)一般傳110代A、 B、C、 D、A第二十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件6、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培

11、養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)此回答(hud)：（1）容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自_。（2）容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是 ，然后用 酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這樣做的目的是 。動(dòng)物胚胎(piti)或幼齡動(dòng)物剪碎胰蛋白(dnbi)使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)第二十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件（3）培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有 _等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，有許多細(xì)胞衰老(shuilo)死亡，這是培養(yǎng)到第 代。（4）為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用 處理，然后配置成 ，再分裝。動(dòng)物(dngw)血清10胰蛋白酶(y dn bi mi)細(xì)胞懸浮液第二十五頁(yè)，

12、共四十二頁(yè)。編輯課件 概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體(gt)。 用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植（難度(nd)高）受體細(xì)胞減數(shù)第二次分裂(fnli)中期的卵母細(xì)胞二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易第二十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件卵細(xì)胞C母綿羊子宮母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎多利羊分娩卵裂融合后的卵細(xì)胞細(xì)胞拆合技術(shù)妊娠多莉羊的培育(piy)過(guò)程無(wú)性生殖(wxng shngzh)第二十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。

13、編輯課件克隆羊培育(piy)過(guò)程黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期胚胎胚胎移植另一頭綿羊(minyng)的子宮妊娠、出生克隆羊多利第二十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件、動(dòng)物的克隆(k ln)與植物克隆(k ln)一樣嗎？、用動(dòng)物體細(xì)胞進(jìn)行克隆的過(guò)程(guchng),其實(shí)際操作過(guò)程是什么？動(dòng)物克隆(k ln)過(guò)程的實(shí)際是細(xì)胞核移植不一樣思考題第二十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件1.體細(xì)胞核移植的過(guò)程(guchng)（以高產(chǎn)奶牛為例）體細(xì)胞培養(yǎng)(piyng)甲牛乙牛M卵母細(xì)胞去除(q ch)核去核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞卵裂重組胚胎代孕母牛丙移植體細(xì)胞群克隆牛細(xì)胞核移植胚胎移植物

14、理或化學(xué)方法激活體細(xì)胞 注入細(xì)胞融合第三十頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢(luncho)卵母細(xì)胞（M中期：供質(zhì)）去核無(wú)核卵母細(xì)胞注入(zh r)細(xì)胞(xbo)融合重組細(xì)胞重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作3.嚴(yán)格來(lái)說(shuō)新個(gè)體有卵巢母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀核移植過(guò)程細(xì)胞培養(yǎng)第三十一頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須(bx)先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自(li z)有利用價(jià)值的動(dòng)

15、物提供的細(xì)胞。、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)(y ni)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變思考題第三十二頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)(shngchn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動(dòng)物(dngw)絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞思考題第三十三頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件4、對(duì)比(dub)多莉羊和課本高產(chǎn)奶牛的克隆過(guò)程，找出操作過(guò)程的不同點(diǎn)？多莉克隆(k ln)過(guò)程的受體細(xì)胞是去核卵細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過(guò)程的受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞；多莉

16、克隆過(guò)程是將供體細(xì)胞核注入受體細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過(guò)程是將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞。5、討論(toln)分析上述哪一種措施更科學(xué)？并說(shuō)明理由？ 卵母細(xì)胞當(dāng)中的細(xì)胞周期蛋白含量、活性比卵細(xì)胞高，用它作受體更容易成功，將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞，使克隆動(dòng)物更像供體動(dòng)物，操作也方便。思考題第三十四頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件胚胎(piti)移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒(yng r)）培養(yǎng)過(guò)程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵胚胎新個(gè)體母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出第三十五頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件2. 體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用(yngyng)前景 1、加速(ji s)家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加(zngji)存

17、活數(shù)量3、克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植第三十六頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3. 體細(xì)胞核移植技術(shù)存在(cnzi)的問(wèn)題：（1） 成功率仍然(rngrn)非常低。（2） 絕大多數(shù)克隆動(dòng)物還存在健康問(wèn)題。許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)大，異常(ychng)肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。（3）對(duì)克隆動(dòng)物食品的安全性問(wèn)題存有爭(zhēng)議。第三十七頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程(guchng)中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是 -（ ） A細(xì)胞系 B細(xì)胞株 C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 -（ ） A.動(dòng)物細(xì)胞

18、融合 B.單克隆抗體 C.胚胎(piti)移植 D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)AD課堂(ktng)反饋：第三十八頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件3、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ） A. 容易(rngy)產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性 C. 取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng)D第三十九頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于-（ ） A.培養(yǎng)基不同； B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要(xyo)在無(wú)菌條件下進(jìn)行； C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能； D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培 養(yǎng)成植株。A第四十頁(yè)，共四十二頁(yè)。編輯課件5.下列關(guān)于細(xì)胞工程的敘述中，錯(cuò)誤的是-（ )A植物細(xì)胞融合必須先制備原生質(zhì)體B試管嬰兒技術(shù)包括人工授精和胚胎移植兩方面 C經(jīng)細(xì)胞核移植培育出的新