1、大孔吸附樹(shù)脂吸附法分離甜菊糖甙實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?了解大孔吸附樹(shù)脂分離生物活性物質(zhì)的基本原理； 掌握大孔吸附樹(shù)脂分離生物活性物質(zhì)裝置的基本流程； 掌握大孔吸附樹(shù)脂分離生物活性物質(zhì)要注意的事項(xiàng)。1大孔性樹(shù)脂的特性大孔吸附樹(shù)脂是一類(lèi)不含交換基團(tuán)且有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附樹(shù)脂，具有良好的大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，可以通過(guò)物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物 。1.大孔吸附樹(shù)脂分離生物活性物質(zhì)的基本原理2吸附性原理吸附力是范德華力或氫鍵作用的結(jié)果篩選性原理樹(shù)脂為多孔性結(jié)構(gòu)，具有分子篩的作用分離原理：有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在樹(shù)脂的吸附機(jī)理和篩分原理作用下實(shí)現(xiàn)分離。32.影響因素：a.一般非

2、極性化合物在水中易被非極性樹(shù)脂吸附，極性化合物在水中易被極性樹(shù)脂吸附。b.物質(zhì)在溶劑中的溶解度大，樹(shù)脂對(duì)此物質(zhì)的吸附力就小，反之就大。c.分子量小、極性小的化合物與非極性大孔吸附樹(shù)脂吸附作用強(qiáng)；反之，與極性大孔吸附作用強(qiáng)。能與大孔吸附樹(shù)脂形成氫鍵的化合物易吸附。43.應(yīng)用：廣泛應(yīng)用于天然化合物如苷、糖類(lèi)、生物堿、多糖、黃酮、三萜類(lèi)化合物的分離和富集工作。4.洗脫液的選擇：最常用的水、乙醇，此外甲醇、丙酮、乙酸乙酯也被應(yīng)用。55.大孔吸附樹(shù)脂分離生物活性物質(zhì)要注意的事項(xiàng)大孔吸附樹(shù)脂的再生 一般用甲醇、乙醇效果比較好。當(dāng)大孔吸附樹(shù)脂用于吸附弱酸性物質(zhì)時(shí)，則用氫氧化鈉再生；用于吸附弱堿性物質(zhì)時(shí)用鹽酸

3、再生，吸附一般離子溶液時(shí)用水再生，吸附揮發(fā)性物質(zhì)時(shí)用熱水或通蒸汽再生。7%VVM流速：上柱液每分鐘以柱內(nèi)樹(shù)脂體積的某一百分比的體積流速流入或流出樹(shù)脂柱； 死體積：樹(shù)脂層上的清液體積，越小越好死角：指流道不連續(xù)導(dǎo)致主體流動(dòng)離開(kāi)流道邊界而形成的區(qū)域，越少越好； 偏流、干柱8b. 水洗利用重力作用加入約2倍柱體積去離子水，流速控制在柱體積的35%（35%vvm），洗至流出液中無(wú)乙醇味，將水位控制至樹(shù)脂面上，加入少量待測(cè)液，保持一段液柱。10c.吸附 取定量（約為樹(shù)脂體積的兩倍）固形物含量為U1的甜菊糖甙溶液緩慢注入樹(shù)脂柱內(nèi)，流速為35%vvm，流出液用量筒收集，并不斷取樣分析，直到流出液含顯著甜味為止，停止上柱。記錄上柱總量V1（柱出口上柱流出液量）；降液面至樹(shù)脂界面。用2倍樹(shù)脂體積的純水按35%vvm流速洗柱，降液面至樹(shù)脂界面。11d. 洗脫用兩倍樹(shù)脂體積的60%乙醇溶液洗脫甜菊糖甙，流速為35%vvm，收集洗脫液，測(cè)量體積V并測(cè)定甜菊糖甙含量。e. 測(cè)定洗脫液中甜菊糖甙含量取一定量（1 ml）洗脫液于表面皿中，105 烘箱內(nèi)干燥至恒重，計(jì)算洗脫液中甜菊糖甙濃度U。12思考題1.樹(shù)脂的飽和吸附量與哪些因素有關(guān)？2.裝柱時(shí)應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？如何確保樹(shù)脂柱不會(huì)干柱？3.樹(shù)脂柱短