1、大豆論文：大豆轉(zhuǎn)錄因子GmC2H2基因轉(zhuǎn)化擬南芥效果分析【中文摘要】鋅指蛋白(zinc finger pro tein)是一類具有“指 狀”結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子,主要功能是調(diào)控基因的表達,鋅指蛋白種類較 多，但以C2H2型最多。C2H2型鋅指蛋白基因最早在非洲爪蟾中發(fā)現(xiàn) 植物中發(fā)現(xiàn)的第一個C2H2型鋅指蛋白基因是在矮牽牛中分離得到的 ZPT2-1， 之后陸續(xù)在矮牽牛、擬南芥、棉花、大豆、水稻等植物中相 繼分離到了該類型的鋅指蛋白基因并發(fā)現(xiàn)在植物中都含有QALGGH 高度保守序列，而動物鋅指蛋白中不存在。已有的研究發(fā)現(xiàn)C2H2型鋅 指蛋白主要參與植物的生長發(fā)育以及調(diào)控植物的抗逆性。本研究的 GmC2

2、H2轉(zhuǎn)錄因子基因是依據(jù)GenBank中大豆EST數(shù)據(jù)庫的保守序列 設(shè)計特異性的引物，利用PCR、RT-PCR等技術(shù)獲得的一個cDNA開放閱 讀框序列，它是大豆中一個編碼經(jīng)典C2H2型鋅指蛋白的基因并在 Genbank中注冊，其登陸號為:DQ055134。該基因全長765 bp,開放閱 讀框長度為516 bp,其編碼172個氨基酸的鋅指蛋白，分子量約為 19KD。在本實驗室前期研究的基礎(chǔ)上將GmC2H2基因的全長編碼序列 分別構(gòu)建到16318hGFP亞細胞定位載體上，將16318hGFP -Gm.【英文摘要】 Zincfingerproteinisakindoftranscription fac

3、tor that hasa fingerstructuraldomain， and it canregulate the gene expression. There are various types of zinc finger proteins，butmostof them belongtothe C2H2-type. C2H2 type zincfingerproteinwasfirstdiscoveredinXenopustropicalis， and a C2H2 zinc finger protein gene named ZPT2-1 which was isolated fr

4、om the petunia was first found in plants, and the gene of this type zinc finger protein have gradually been isolated from the petunia, Arabidopsi.【關(guān)鍵詞】大豆 鋅指蛋白 GmC2H2 轉(zhuǎn)錄因子 轉(zhuǎn)基因擬南芥【英文關(guān)鍵詞】Soybean Zinc finger proein GmC2H2Transcription factor Transgenic Arabidopsis thalian【索購全文】聯(lián)系 EJQ1： 138113721 EJQ2： 1

5、39938848 同時提供論文寫作一對一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù)保過包發(fā)【目錄】大豆轉(zhuǎn)錄因子GmC2H2基因轉(zhuǎn)化擬南芥效果分析摘要6-7 Abstract 7-8 第一章 緒論 16-251.1 植物轉(zhuǎn)錄因子研究進展 16-171.1.1 轉(zhuǎn)錄因子 16-171.1.2植物抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子 171.2 植物鋅指蛋白的研究進展181.2.1 鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)和分類 171.2.2 植物鋅指蛋白的功能 17-181.3 非生物脅迫下植物的應(yīng)答機制241.3.1 低溫脅迫下植物的應(yīng)答特征 18-191.3.2高鹽脅迫下植物的應(yīng)答特征 19-201.3.3 ABA 處理下植物的應(yīng)答特征20-221.3.4 干

6、旱脅迫下植物的應(yīng)答特征22-241.4 立題目的意義 241.5 技術(shù)路線24-25第二章 GMC2H2 序列分析及植物載體構(gòu)建25-392.1 試驗材料 25-262.1.1 菌種及載體252.1.2 酶及生化試劑 252.1.3 試劑盒25 2.1.4 引物 25 2.1.5 測序 25 2.1.6 培養(yǎng)基的配制 25 2.1.7 主要儀器設(shè)備 25-26 2.1.8 引物設(shè)計和序列分析軟件 26 2.2 超表達載體的構(gòu)建26-292.2.1 PCR 26 2.2.2PCR 產(chǎn)物的回收26-272.2.3 連接反應(yīng) 272.2.4 感受態(tài)的制備272.2.5 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 272.2.6

7、 質(zhì)粒 DNA 的提取27-282.2.7 酶切檢測 282.2.8 DNA 序列測定282.2.9 酶切回收 28 2.2.10 連接轉(zhuǎn)化282.2.11 陽性克隆鑒定及測序28-29 2.3 亞細胞定位表達載體的構(gòu)建 29 2.3.1 PCR 29 2.3.2 亞細胞定位 表達載體的構(gòu)建 29 2.3.3 原生質(zhì)體的瞬時轉(zhuǎn)化 29 2.4 RNA 干擾載體的構(gòu)建 29-31 2.4.1 中間干擾載體的構(gòu)建29-30 2.4.2 最終干擾載體的構(gòu)建 30-31 2.5 突變體 表達載體的構(gòu)建 31 2.6 結(jié)果與分析 31-39 2.6.1 目的 基因分析 31 2.6.2 植物表達載體的構(gòu)

8、建 31-32 2.6.3 亞細胞定位表達載體的構(gòu)建及亞細胞分析 32-34 2.6.4 RNA 干擾載體的構(gòu)建 34-37 2.6.5 突變體表達載體的構(gòu)建37-39 第三章 轉(zhuǎn)基因擬南芥陽性苗的獲得 39-48 3.1 前言 39 3.2 材料 39-40 3.2.1 實驗材料39 3.2.2 菌株 39 3.2.3 生化試劑 39 3.2.4 試 劑盒 39 3.2.5 培養(yǎng)基配制 39 3.2.6 溶液配制40 3.2.7 主要儀器設(shè)備 40 3.3 方法42 3.3.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 40-41 3.3.2 Floral-dip 法 轉(zhuǎn)化擬南芥 41 3.3.3 轉(zhuǎn)基因陽性植株的篩選及

9、鑒定42 3.4 結(jié)果與分析 42-48 3.4.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化42 3.4.2 Floral-dip 法獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥44 3.4.3 轉(zhuǎn)基因陽性株 PCR 檢測 44-46 3.4.4 轉(zhuǎn) 基因植株擬南芥的GUS組織染色分析46-48 第四章轉(zhuǎn)基因擬 南芥逆境生理分析及基因表達分析 48-704.1 前言484.2 材料 484.3 溶液配制、試劑盒及儀器設(shè)備494.3.1 一般溶液配制 484.3.2 試劑盒484.3.3 主要儀器設(shè)備 48-494.4 實驗方法524.4.1 擬南芥材料的處理 494.4.2 逆境脅迫條件下生理指標(biāo)測定 49-514.4.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥目的基因的相關(guān)基因表達 51-524.5 結(jié)果分析 52-704.5.1 低溫、ABA、高鹽處理下擬南芥的表型觀察52-534.5.2低溫、ABA、高鹽處理下擬南芥細胞膜的損傷率變化 53-554.5.3 低溫、ABA、高鹽處理下擬