鑒于TLR4NF-κB信號(hào)通路的蘇木乙酸乙酯提取物抗動(dòng)脈粥樣硬化作用體系研究鑒于TLR4NF-κB信號(hào)通路的蘇木乙酸乙酯提取物抗動(dòng)脈粥樣硬化作用體系研究3/3鑒于TLR4NF-κB信號(hào)通路的蘇木乙酸乙酯提取物抗動(dòng)脈粥樣硬化作用體系研究鑒于TLR4/NF-κB信號(hào)通路的蘇木乙酸乙酯提取物抗動(dòng)脈粥樣硬化作用體系研究目的:經(jīng)過(guò)成立AS動(dòng)物模型及LPS引誘的內(nèi)皮細(xì)胞傷害模型,應(yīng)用蘇木乙酸乙酯提取物進(jìn)行干涉,察看其與TLR4/NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系,商議蘇木乙酸乙酯提取物抗AS的作用機(jī)理。方法:實(shí)驗(yàn)一:將60只體重在200±20g的SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只。分別為空白比較組、模型比較組、蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組和辛伐他汀組?？瞻妆容^組賞賜一般飼料飼養(yǎng),其余5組賞賜腹腔注射維生素D3結(jié)合高脂飼料飼養(yǎng)進(jìn)行模型復(fù)制。12周后空白比較組、模型比較組賞賜等體積羧甲基纖維素鈉懸濁液灌胃,其余4組分別賞賜相應(yīng)劑量的蘇木乙酸乙酯提取物懸濁液和辛伐他汀懸濁液灌胃,每天給藥1次,連續(xù)給藥4周。HE染色法察看AS大鼠腹主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)的變化;全自動(dòng)生化解析儀測(cè)定血清TG、TC、LDL-C、HDL--C水平;ELISA法檢測(cè)血清IL-1β含量;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)主動(dòng)脈TLR4mRNA、NF-κBp65mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:將HUVECs分為7組,分別為空白比較組、模型比較組、蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組和蘇木預(yù)防組。采用LPS溶液(1g/mL)辦理12h引誘內(nèi)皮細(xì)胞傷害進(jìn)行模型復(fù)制?？瞻妆容^組細(xì)胞正常培養(yǎng)24h;模型比較組細(xì)胞進(jìn)行模型復(fù)制后正常培養(yǎng)12h;蘇木低、中、高劑量和辛伐他汀組細(xì)胞進(jìn)行模型復(fù)制后,分別加入蘇木乙酸乙酯提取物低、中、高劑量含藥血清和辛伐他汀含藥血清治療12h;蘇木預(yù)防組細(xì)胞用蘇木中劑量含藥血清預(yù)辦理12h,加入LPS溶液辦理內(nèi)皮細(xì)胞12h。察看各組內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)的改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡;ELISA法察看細(xì)胞上清TNF-α水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞TLR4mRNA、NF-κBp65mRNA的表達(dá);Western-blot法檢測(cè)TLR4、NF-KBp65蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.大鼠腹主動(dòng)脈病理形態(tài)結(jié)果顯示:蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組內(nèi)皮細(xì)胞輕度腫脹,中層圓滑肌細(xì)胞排列輕度紛亂,細(xì)胞核數(shù)量增添,與模型比較組比較,病理傷害減少。2.大鼠血脂結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組大鼠血清TG、TC、LDL-C含量降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P><0.05);蘇木低劑量組大鼠血清LDL-C含量降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大鼠血清ELISA結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木低劑量組、蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組大鼠血清IL-1β含量降低,差別有顯然統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.大鼠腹主動(dòng)脈RealTimePCR結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組TLR4mRNA表達(dá)降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛代他汀組、蘇木預(yù)防組細(xì)胞調(diào)亡比率降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.細(xì)胞上清ELISA結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組、蘇木預(yù)防組TNF-α含量降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。細(xì)胞RealTimePCR結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組、蘇木預(yù)防組TLR4mRNA、NF-κBp65mRNA表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。8.細(xì)胞WesternBlot結(jié)果顯示:與模型比較組比較,蘇木中劑量組、蘇木高劑量組、辛伐他汀組、蘇木預(yù)防組細(xì)胞TLR4、NF-κBp65蛋白表達(dá)降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:1.蘇木乙酸乙酯提取物能改良AS模型大鼠腹主動(dòng)脈病理傷害,降低AS模型大鼠血清TG、TC、LDL-C、IL-1β含量。2.蘇木乙酸乙酯提取物可以改良LPS引誘內(nèi)皮傷害細(xì)胞形態(tài),降低內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率,降低細(xì)胞上清TNF-α含量。