不同品種猴頭菌子實(shí)體粗多糖含量及體外免疫活性比較對(duì)10株猴頭菌（Hericiumerinaceus）菌株栽培獲得的子實(shí)體多糖含量和體外免疫活性進(jìn)行比較。結(jié)果表明：不同的猴頭菌菌株在同樣條件下栽培所獲子實(shí)體在粗多糖含量和體外刺激RAW264.7產(chǎn)生NO的能力上有明顯差異，其中H5粗多糖含量最高且體外刺激RAW264.7的活性也最強(qiáng)。猴頭菌菌株；子實(shí)體多糖；巨噬細(xì)胞；NO猴頭菌（Hericiumerinaceus）是一種食藥兼用菌，不僅營養(yǎng)美味，且具有多種藥用活性作用。國內(nèi)外研究報(bào)道猴頭菌的活性物質(zhì)主要有多糖、萜類、脂肪酸、甾醇類、酚類等，其中最主要的活性成分是猴頭菌多糖，具有保肝護(hù)胃、降血糖、增強(qiáng)人體免疫力、抗癌、抗氧化等功效[14]。猴頭菌多糖可從栽培子實(shí)體和發(fā)酵菌絲體中提取得到，李巧珍等[5]發(fā)現(xiàn)不同菌株的發(fā)酵菌絲體多糖的產(chǎn)量及其體外免疫活性有較大差異，筆者對(duì)收集到的10個(gè)猴頭菌菌株栽培得到的子實(shí)體多糖含量和體外免疫活性進(jìn)行了比較，為篩選多糖產(chǎn)量高、體外免疫活性好的菌株提供幫助，也為猴頭菌栽培菌株篩選提供了一定的依據(jù)。1材料與方法1.1供試菌株及來源供試菌株0627、0608、0617、0611、0605分別編號(hào)為H1～H5，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所提供；長(zhǎng)刺猴頭、911、920、猴頭王、華中猴頭分別編號(hào)為H6～H10，其中長(zhǎng)刺猴頭和華中猴頭由華中食用菌栽培研究所提供，911和920由江蘇高郵食用菌研究所提供，猴頭王由牡丹江海豐食用菌研究所提供。1.2子實(shí)體培養(yǎng)按照85%木屑、14%麩皮、1%石灰攪拌培養(yǎng)料并調(diào)整其含水量為64%，裝入聚丙烯塑料袋（17cm×33cm×0.05cm），每袋裝濕料1kg，121℃滅菌120min，接種后25℃避光培養(yǎng)；菌絲滿袋后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)房，在18～23℃、85%～95%相對(duì)濕度、自然散射光條件下培養(yǎng)子實(shí)體；當(dāng)子實(shí)體菌刺長(zhǎng)約0.5cm時(shí)采收，分別將10個(gè)菌株子實(shí)體樣本烘干備用。1.3子實(shí)體多糖含量的測(cè)定分別將1.2中的子實(shí)體充分磨碎，取粉末樣品2g，加90mL蒸餾水，沸水浴提取2h，提取液過濾后加蒸餾水定容至100mL，量取10mL，加無水乙醇150mL搖勻，4℃放置12h后4000g離心20min，棄上清，沉淀用10mL95%的乙醇洗滌2次，用蒸餾水將沉淀定容至50mL，用苯酚硫酸法測(cè)定總糖含量[3]。子實(shí)體多糖含量=總糖含量×0.91.4子實(shí)體粗多糖的制備取1.2中烘干的子實(shí)體研磨成粉末，取10g子實(shí)體粉末，按1∶18料水比加入蒸餾水，沸水浴提取2h，過濾，濾渣重復(fù)提取一次（條件同前），濾液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮至30mL，15000g離心30min，取上清加入無水乙醇使乙醇終濃度達(dá)到70%，搖勻，4℃放置12h后4000g離心20min，棄上清，沉淀用95%的乙醇洗滌2次，揮干乙醇，蒸餾水將沉淀溶解，用截留分子量為3500Da透析袋4℃透析3d，將透析后的袋內(nèi)溶液冷凍干燥，得子實(shí)體粗多糖樣品，分別命名為HFP1～HFP10。1.5子實(shí)體粗多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞釋放NO產(chǎn)量的影響分別取1.4中凍干的HFP1～HFP10各5mg，加1mLPBS將其配成5mg/mL的母液，15000g離心30min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，然后取一定量稀釋成0.5mg/mL和2mg/mL樣品（作用終濃度分別為50、200、500SymbolmA@g/mL），按文獻(xiàn)[5]的方法測(cè)定各多糖樣品對(duì)巨噬細(xì)胞釋放NO產(chǎn)量的影響。2結(jié)果與分析2.1不同菌株猴頭菌子實(shí)體多糖含量分析采收不同猴頭菌菌株栽培得到的成熟子實(shí)體，子實(shí)體的形態(tài)見封三圖1。不同菌株子實(shí)體中的多糖含量見表1，10個(gè)菌株中子實(shí)體多糖含量最高的是H5菌株，其次為H10菌株，與其余菌株之間存在顯著性差異，H2菌株子實(shí)體多糖含量最低，其余菌株子實(shí)體多糖含量不存在顯著性差異。李玉，等：不同品種猴頭菌子實(shí)體粗多糖含量及體外免疫活性比較圖110株猴頭菌栽培得到的子實(shí)體Fig.1FruitbodiesofH.erinaceusstrains表110個(gè)猴頭菌菌株的子實(shí)體多糖含量Table1Polysaccharide（PS）contentofH.erinaceusfruitbodies菌株Strain多糖含量PScontent（%）H11.41±0.05BH21.17±0.03CH31.46±0.09BH41.37±0.04BCH51.74±0.10AH61.49±0.08BH71.46±0.10BH81.40±0.07BH91.46±0.06BH101.70±0.05A大寫字母表示P＜0.01的差異顯著性DifferenthighercaselettersindicatesignificantdifferencesatP＜0.012.2子實(shí)體粗多糖對(duì)RAW264.7釋放NO產(chǎn)量的影響不同樣品對(duì)RAW264.7釋放NO的結(jié)果見圖2。樣品刺激RAW264.7產(chǎn)生NO量與樣品濃度呈正相關(guān)，其中H5和H6活性較強(qiáng)，H9和H10活性相對(duì)較弱。*與PBS比在0.01水平上有顯著差異*Significantdifference（P<0.01）comparedwithPBS圖210株猴頭菌株子實(shí)體粗多糖對(duì)RAW264.7細(xì)胞NO釋放量的影響Fig.2EffectofH.erinaceuspolysaccharidepreparationsonnitricoxideproductionbyRAW264.7cells請(qǐng)亭亭將圖例的數(shù)字和單位之間空格，謝謝！SymbolmA@g/mLL要大寫。3討論從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出猴頭菌不同菌株在同樣條件下栽培所獲子實(shí)體在粗多糖含量及其體外刺激巨噬細(xì)胞RAW264.7產(chǎn)生NO的能力上存在明顯差異，且與李巧珍[5]之前報(bào)道的這10株猴頭菌發(fā)酵產(chǎn)生的菌絲體粗多糖量和體外免疫活性有較大差別，發(fā)酵菌絲體中H8和H10多糖產(chǎn)量較高、H1和H10菌株多糖體外免疫活性較好；而子實(shí)體中H5和H10多糖的含量明顯高于其它菌株，H5、H6和H7體外免疫活性較高。這些結(jié)果說明菌絲體和子實(shí)體階段形成的多糖含量與體外刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的能力沒有完全的對(duì)應(yīng)關(guān)系。多糖的活性與其初級(jí)、高級(jí)結(jié)構(gòu)特別是三維空間構(gòu)象密切相關(guān)，而且還和分子量、溶解度、粘度等物理化學(xué)性質(zhì)有關(guān)[6]。從不同的菌株所獲多糖，雖然分子量可能相同，但是由于其溶解度、粘度等物理化學(xué)性質(zhì)和單糖組成、種類、比例等特征差異可導(dǎo)致其體外免疫活性上的差異。因此，對(duì)猴頭菌進(jìn)行深度開發(fā)利用時(shí)，需根據(jù)所用子實(shí)體或菌絲體的原料及目標(biāo)活性成分對(duì)菌株進(jìn)行篩選，以明確不同菌株最適宜的利用方向。USUIT，YOSHIOI，KATSUYUKIH，etal.AntitumoractivityofwatersolubleβDGlucanelaboratedbyGanodermaapplanatum[J].AgricBiolChem，1981，45（l）：323332.[2]JONGSL，JAEYC，EOCKKH.StudyonmacrophageactivationandstructuralcharacteristicsofpurifiedpolysaccharidesfromtheliquidculturebrothofHericiumerinaceus[J].CarbohydPolym，2009，78（1）：162168.[3]張維杰.糖復(fù)合物生化研究技術(shù)[M].杭州：浙江大學(xué)出版社，1994.