高效液相色譜的基礎(chǔ)知識(shí)

1高效液相色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法儀器工作原理3高效液相色譜儀的維護(hù)4高效液相色譜法儀的注意事項(xiàng)5高效液相色譜法的特點(diǎn)

高效液相色譜法（HPLC）是20世紀(jì)60年代末70年代初發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)。它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的特點(diǎn)。為了更好地了解高效液相色譜法優(yōu)越性，現(xiàn)從兩方面進(jìn)行比較：高效液相色譜法的特點(diǎn)

高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法如對(duì)氨基酸分離，用經(jīng)典色譜法，需用20多小時(shí)才能分離出20種氨基酸；而用高效液相色譜法，只需lh之內(nèi)即可完成。

高效液相色譜法經(jīng)典液相色譜法

速度高速極慢靈敏度高靈敏度低自動(dòng)化高自動(dòng)化低進(jìn)料方式高壓輸液設(shè)備重力加料效率高效低高效液相色譜儀工作原理

?

高壓輸液系統(tǒng)?

進(jìn)樣系統(tǒng)?

分離系統(tǒng)?

檢測(cè)系統(tǒng)高效液相色譜儀工作原理

其工作過(guò)程如下：高效液相色譜儀的維護(hù)

泵的使用和維護(hù)1.防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。2.流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)。泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。3.泵的工作壓力決不要超過(guò)規(guī)定的最高壓力，否則會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。4.流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量氣泡，泵就無(wú)法正常工作高效液相色譜儀的注意事項(xiàng)柱的使用和維護(hù)1、使用前注意適用范圍，如pH值范圍、不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。2、使用符合要求的流動(dòng)相；

3、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。4、注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，因?yàn)榧兯组L(zhǎng)霉。5、不要高壓沖洗柱子；高效液相色譜儀的維護(hù)

流動(dòng)相的脫氣

HPLC所用流動(dòng)相必須預(yù)先脫氣，否則容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵的工作。紫外燈的保養(yǎng)在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器。高效液相色譜儀的注意事項(xiàng)一、流動(dòng)相流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用。二、樣品采用過(guò)濾或離心方法處理樣品，確保中不含固體顆粒。高效液相色譜儀的注意事項(xiàng)三、操作過(guò)程1、先以所用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)一定時(shí)間。正式進(jìn)樣分析前30min左右開啟D燈或W燈，以延長(zhǎng)燈的使用壽命；2、溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個(gè)管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過(guò)程中關(guān)閉D燈、W燈；

粘度計(jì)使用說(shuō)明書

CAP2000+粘度計(jì)使用說(shuō)明書（上）1.打開電源開關(guān)，若儀器已關(guān)閉電源有一段時(shí)間(如一個(gè)晚上)，應(yīng)先預(yù)熱30分鐘2.裝上錐轉(zhuǎn)子。3.設(shè)置轉(zhuǎn)子編號(hào)。4.設(shè)置溫度5.設(shè)置轉(zhuǎn)速6.壓下手柄，使錐轉(zhuǎn)子接近加熱板，并且使手柄位于最低位置。等待約10分鐘，使錐轉(zhuǎn)子與加樣板溫度接近。7.提起手柄，把樣品加至加熱板上，樣品量請(qǐng)參考附錄A。輕輕地壓下手柄，樣品CAP2000+粘度計(jì)使用說(shuō)明書（下）樣品應(yīng)完全覆蓋錐轉(zhuǎn)子底部表面，并且溢出其邊沿1.0mm。8.等待約1至3分鐘，使錐轉(zhuǎn)子、加熱板及樣品的溫度到達(dá)設(shè)置溫度。9.設(shè)置運(yùn)行時(shí)間及保持時(shí)間。10.若使用打印機(jī)，使儀器與打印機(jī)連機(jī)。11.按下RUN鍵開始測(cè)量。12.讀取及打印測(cè)量結(jié)果。13.提起手柄，取下錐轉(zhuǎn)子，并且清潔干凈。14.清潔加熱板。粘度計(jì)使用圖解

1未接通電之前2接通電源3打開電源開關(guān)4系統(tǒng)初始化8設(shè)置運(yùn)行參數(shù)7加熱完成5初始化完成6壓下轉(zhuǎn)子加熱粘度計(jì)使用圖解9放置樣品10壓下轉(zhuǎn)子11放下護(hù)罩12點(diǎn)擊開始（RUN）鍵16清潔加熱板15提起手柄14讀取數(shù)據(jù)13運(yùn)行中粘度計(jì)使用圖解

17斷開電源18關(guān)機(jī)完成19拔下插銷PH值的測(cè)定

PH的測(cè)定方法

測(cè)定溶液PH值的方法：（1）酸堿指示劑用于粗測(cè)溶液PH值范圍；（2）PH試紙用以精略地測(cè)定溶液酸堿性的強(qiáng)弱；（3）PH計(jì)用以精確地測(cè)定溶液的PH值。PH的測(cè)定

酸堿指示劑一般是弱的有機(jī)酸或弱的有機(jī)堿，它們的顏色變化是在一定的pH值范圍內(nèi)。我們把指示劑發(fā)生顏色變化的pH值范圍叫做指示劑的變色范圍。指示劑酸堿指示劑變色范圍甲基橙<3.1紅色3.1—4.4橙色>4.4黃色石蕊<5.0紅色5.0—8.0紫色>8藍(lán)色酚酞<8.0無(wú)色8.0—10.0淺紅色>10紅色PH試紙的使用

用PH試紙測(cè)定溶液的PH值,一般先把一小塊放在表面皿或玻璃片上，用沾有待測(cè)液的玻璃棒點(diǎn)試紙的中部，不能把試紙放在待測(cè)液中，也不能用水濕潤(rùn)再測(cè)定PH值。PH計(jì)------電位法方法原理

用pH計(jì)測(cè)定溶液pH時(shí)，常用玻璃電極為指示電極，甘汞電極為參比電極。當(dāng)pH玻璃電極和甘汞電極插入溶液時(shí)，構(gòu)成一電池反應(yīng)，兩者之間產(chǎn)生一個(gè)電位差，由于參比電極的電位是固定的，因而該電位差的大小決定于試液中的氫離子活度，氫離子活度的負(fù)對(duì)數(shù)即為pH，可在pH計(jì)上直接讀出pH值。儀器及設(shè)備

pHSJ-3F計(jì)操作步驟1.待測(cè)液的制備

2.測(cè)量前校正：把電極插入緩沖溶液中，使標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值與儀器標(biāo)度上的pH值相一致。然后移出電極，用水沖洗、濾紙吸干后插入另一標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，檢查儀器的讀數(shù)。最后移出電極、用水沖洗、濾紙吸干后待用。操作步驟3.測(cè)定：把玻璃電極的球泡浸入待測(cè)樣品的下部懸濁液中，并輕微搖動(dòng)，然后將飽和甘汞電極插在上部清液中，待讀數(shù)穩(wěn)定后，記錄待測(cè)液pH值。4.測(cè)量中校正：每個(gè)樣品測(cè)完后，立即用水沖洗電極，并用干濾紙將水吸干再測(cè)定下一個(gè)樣品。在精確的測(cè)定中，每測(cè)定5～6個(gè)樣品后，需要將飽和甘汞電極的頂端在飽和氯化鉀溶液中浸泡一下，然后用pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液重新校正儀器。結(jié)果計(jì)算一般的pH計(jì)可直接讀出pH值，不需要換算。

溶液表面張力的測(cè)定

最大泡壓法的測(cè)定原理儀器試劑

儀器:最大泡壓法表面張力儀1套；移液管(50mL，1支、1mL，1支)；燒杯(500mL，1個(gè))；吸耳球1個(gè)；U型壓力試劑：正丁醇(A.R.)蒸餾水試劑：正丁醇(A.R.)蒸餾水.注意事項(xiàng)１.儀器系統(tǒng)不能漏氣。２.所用毛細(xì)管必須干凈、干燥，應(yīng)保持垂直，其管口剛好與液面相切。３.讀取壓力計(jì)的壓差時(shí)，應(yīng)取氣泡單個(gè)逸出時(shí)的最大壓差。數(shù)據(jù)處理1.計(jì)算儀器常數(shù)K和溶液表面張力σ，繪制σ—C等溫線。2.作切線求Z，并求出Г，C/Г。3.繪制Г—C，C/Г—C等溫線，求Г∞并計(jì)算So。

激光粒度儀激光粒度儀

動(dòng)態(tài)光散射原理

由于任何懸浮于液體的顆粒都會(huì)不停的作布朗運(yùn)動(dòng)，其運(yùn)動(dòng)的強(qiáng)度與環(huán)境有關(guān)，同時(shí)也與顆粒本身的大小有關(guān)。

并且相同條件下，大顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)緩慢，小顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)劇烈。

Pecora

證明了實(shí)時(shí)波動(dòng)的散射光可以在頻域中產(chǎn)生一個(gè)分布，這個(gè)帶寬就包含著顆粒運(yùn)動(dòng)的信息。

儀器特點(diǎn)因?yàn)橄嚓P(guān)曲線的準(zhǔn)確度是決定儀器是否準(zhǔn)確的根本因素。而相關(guān)曲線是由儀器的相關(guān)器得出的。光散射粒度儀的性能是由相關(guān)器決定的。

美國(guó)布魯克海文公司FOQELS（高濃度激光粒度分析儀）采用BI-9000數(shù)字相關(guān)器，該相關(guān)器是目前世界上公認(rèn)的、功能最強(qiáng)大的相關(guān)器。

自動(dòng)粒度分析儀，使用于小粒子的濃縮懸浮液體或者大分子溶液。一般情況下講,尺寸在2納米到3微米的均可測(cè)量,

參數(shù)設(shè)置Start,Clear和Runs開始，清除，運(yùn)行按鈕特定為你的采樣收集數(shù)據(jù)。Batch# 序列號(hào)：鍵入樣品的序列號(hào)

Runs運(yùn)行：鍵入希望本樣品成功運(yùn)行的次數(shù)

RunDuration運(yùn)行時(shí)期

以上參數(shù)可以隨意設(shè)置。使用于計(jì)算的參數(shù)在輸入時(shí)應(yīng)該注意：Temp. 溫度：鍵入控制樣品的溫度Suspension 懸浮液：鍵入懸浮樣品的介質(zhì)Viscosity粘性：介質(zhì)的粘度CopytoClipboard拷貝到剪貼板數(shù)據(jù)處理

III.4圖形這個(gè)按鈕允許你轉(zhuǎn)換到帶有數(shù)據(jù)顯示的圖形的界面或者沒(méi)有圖形只有數(shù)據(jù)的界面。一旦圖形被激活，可以選擇瀏覽圖形。最簡(jiǎn)單的可用的表示法是對(duì)數(shù)正態(tài)分布，EffectiveDiameter和Polydispersity（有效直徑和多分散性）用來(lái)生成粒度分散的對(duì)數(shù)正態(tài)分布

水分的測(cè)定

幾種常見的測(cè)定方法紅外線干燥法直接測(cè)定法干燥法直接干燥法減壓干燥法蒸餾法間接測(cè)定法：比重、折射率、電導(dǎo)、介電常數(shù)化學(xué)法：卡爾?費(fèi)休法重量法常壓測(cè)定步驟①洗滌稱量瓶，烘干、冷卻至室溫。②

稱瓶重W0③（稱瓶重＋樣品重）W1④

95-105℃下烘干，約2-4小時(shí)。⑤

取出，置于干燥器中冷卻至室溫。⑥

稱量干燥后的重量，W2。⑦

再烘干，冷卻，稱量，檢查是否烘至恒重。⑧

計(jì)算（失重/樣品重）W0：稱量瓶重，g；

W1：干燥前試樣與稱量瓶重，g；

W2：干燥后試樣與稱量瓶重，g。蒸餾式水分測(cè)定儀

甲苯或二甲苯:取甲苯或二甲苯先以水飽和后,分去水層,進(jìn)行蒸餾,收集餾出液備用.有機(jī)溶劑的選擇：甲苯（沸點(diǎn)111oC）二甲苯（沸點(diǎn)140oC）正戊醇（沸點(diǎn)137.8oC）對(duì)熱不穩(wěn)定的食品，一般不采用二甲苯，因?yàn)樗姆悬c(diǎn)高，常選用低沸點(diǎn)的苯、甲苯或甲苯－二甲苯的混合液。對(duì)含糖分可分解放出水分的樣品，如脫水洋蔥、脫水大蒜，宜選用苯。說(shuō)明及注意事項(xiàng)

1、有機(jī)溶劑一般用甲苯，其沸點(diǎn)微110.7℃。對(duì)于在高溫易分解樣品則用苯作蒸餾溶劑(苯沸點(diǎn)80.2℃，水苯其沸點(diǎn)則為69.25℃)，但蒸餾的時(shí)間需延長(zhǎng)。2、蒸餾溫度不宜太高,易使冷凝管上端的水氣難以回收.3、儀器必須干凈,避免接收管和冷凝管壁附著水滴.卡爾?費(fèi)休法

費(fèi)休法或K-F法，是在1935年由卡爾?費(fèi)休提出的測(cè)定水分的容量方法，屬于碘量法，對(duì)于測(cè)定水分最為專一，也是測(cè)定水分最為