第31講微生物的利用知識(shí)內(nèi)容考試要求知識(shí)內(nèi)容考試要求1.大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)與探究能力2?分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)與探究能力細(xì)菌的培養(yǎng)與分離

微生物：結(jié)構(gòu)簡單、形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物，如酵母、細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌和病毒等。絕大多數(shù)微生物與傳染病無關(guān)，90%以上的微生物對人類有利。2.培養(yǎng)基含義微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)成分水、無機(jī)鹽、碳源和氮源，還需滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求LB培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水、瓊脂（固體培養(yǎng)基）LB培養(yǎng)基的作用蛋白胨、酵母提取物：為細(xì)菌生長提供碳源和氮源；氯化鈉：維持一定的滲透壓：瓊脂：凝固劑，不易分解，一般不作為營養(yǎng)物質(zhì)。其在96°C時(shí)融化成液體，冷卻到45C以下即重新凝固種類按物理狀態(tài)分，包括固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基；按特殊用途分，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基；按培養(yǎng)不同微生物分，包括細(xì)菌培養(yǎng)基（pH呈中性偏堿，添加有機(jī)物如蛋白胨、酵母提取物）、霉菌培養(yǎng)基（pH呈中性偏酸，添加無機(jī)物或者添加蔗糖的豆芽汁）3.細(xì)菌的培養(yǎng)和分離細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌分離劃線分離法涂布分離法細(xì)菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般用接種環(huán)將已有細(xì)菌的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中。在液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)8h,每毫升培養(yǎng)基中有幾億個(gè)細(xì)菌。接種于固體培養(yǎng)基10?20h后，一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。由于劃線過程先將培養(yǎng)的菌液稀釋，通常稀釋105?107倍。取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進(jìn)會(huì)繁殖成許多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，聚集在一起，形成菌落中，接種環(huán)上的菌液逐漸減少，因此劃線最后部分的細(xì)菌間距離加大。培養(yǎng)一段時(shí)間后，每一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生一個(gè)菌落。再將每個(gè)菌落分別接種到試管斜面上，從而除去雜菌行培養(yǎng)，得到相互分開的菌落。通常以每個(gè)培養(yǎng)皿有20個(gè)以內(nèi)的單菌落最為合適方法簡單單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡便方法之4.滅菌操作項(xiàng)目灼燒滅菌咼壓烝汽滅菌過濾滅菌適用材料或用具接種環(huán)、接種針或其他金屬用具培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、試管等玻璃器具等尿素等加熱會(huì)分解的物質(zhì)續(xù)表項(xiàng)目灼燒滅菌咼壓烝汽滅菌過濾滅菌滅菌條件及時(shí)間在酒精燈火焰上充分灼燒，直至燒紅，冷卻后備用LB培養(yǎng)基：121°C（1kg/cm2壓力）、15min含葡萄糖的培養(yǎng)基：90C以上（500g/cm2壓力）、30min玻璃器皿：高壓蒸汽滅菌后放入60?G6玻璃砂漏斗過濾80°C的烘箱中烘干5.超凈工作臺(tái)提前50min左右開啟超凈工作臺(tái)，先打開紫外燈滅菌30min，然后關(guān)閉紫外燈開啟過濾風(fēng)，運(yùn)行20min，之后超凈臺(tái)可以開始使用。［基礎(chǔ)診斷］培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)(V)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(X)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細(xì)胞的傷害(V)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(X)1．選擇培養(yǎng)基的制作方法在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入該物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑制多種細(xì)菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達(dá)到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。利用培養(yǎng)基的特定化學(xué)成分分離特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中

因酶失活而無法生存。2．消毒與滅菌的辨析項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器3．細(xì)菌的兩種分離方法的比較項(xiàng)目劃線分離法涂布分離法工具接種環(huán)玻璃刮刀原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的細(xì)胞群體，即菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落特點(diǎn)方法簡單，但不適宜計(jì)數(shù)單菌落更易分開，但操作復(fù)雜目的使培養(yǎng)基上形成單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體菌洛［題組沖關(guān)］1．做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B?倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放在一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中的菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上解析：選D。高壓滅菌結(jié)束后應(yīng)自然冷卻，等滅菌鍋壓力與大氣壓相同時(shí)打開鍋蓋，A項(xiàng)錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，不能將皿蓋放在一邊，B項(xiàng)錯(cuò)誤；接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌應(yīng)冷卻后挑取菌落,C項(xiàng)錯(cuò)誤；標(biāo)記培養(yǎng)皿中的菌落時(shí)，記號(hào)筆應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D項(xiàng)正確。(2020.寧波模擬)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}：該小組采用涂布分離法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是。該小組采用劃線分離法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是示意圖A和B中，表示的是用涂布分離法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。解析：(1)在涂布接種前，隨機(jī)選取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，不能留有雜菌。(2)用劃線分離法分離水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，從上一次劃線末端開始劃線，目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)涂布分離法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果應(yīng)為圖Bo振蕩可以使細(xì)菌分散，更有利于細(xì)菌利用培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質(zhì)，并且可以使培養(yǎng)液中的溶解氧增多。答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落B(4)溶解氧營養(yǎng)物質(zhì)大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1．大腸桿菌特性：大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧(代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對人無害，但若進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng)，就會(huì)對人體產(chǎn)生危害。用途：是基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具。2．大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:將大腸桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)和劃線分離，即用LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)大腸桿菌,培養(yǎng)后再在LB固體平面培養(yǎng)基上劃線進(jìn)行分離，隨后培養(yǎng)基上就會(huì)形成一個(gè)個(gè)單獨(dú)的菌落。實(shí)驗(yàn)步驟培養(yǎng)基滅菌倒平板50mLLB液體培養(yǎng)基和50mLLB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將培養(yǎng)基分別倒至4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面在裝有液體培養(yǎng)基的一角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12h接種劃線分離培養(yǎng)觀察用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的一角瓶中醮菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12?24h后，可看到劃線的末端岀現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落(3)大腸桿菌分離的用途：單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡便方法之一。［基礎(chǔ)診斷］大腸桿菌是革蘭氏陽性菌，既能進(jìn)行需氧呼吸又能進(jìn)行厭氧呼吸(X)利用LB液體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基分別進(jìn)行分離培養(yǎng)和擴(kuò)大培養(yǎng)微生物(X)單菌落的分離是消除雜菌污染的通用方法，也是篩選高表達(dá)菌株的簡便方法(V)常用的微生物分離方法有劃線分離法和涂布分離法(V)劃線分離法的原理是利用接種環(huán)挑去一個(gè)菌種，接種到固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后得到單菌落(X)劃線分離操作簡便，但涂布分離更容易得到單菌落(V)高壓蒸汽滅菌法是進(jìn)行各種無菌操作都需要進(jìn)行的滅菌方法(X)劃線分離時(shí)，接種環(huán)只蘸取一次菌液，每次劃線前均需灼燒接種環(huán)(V)進(jìn)行菌種擴(kuò)大培養(yǎng)和分離培養(yǎng)需要將培養(yǎng)基倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中(X)1．菌液劃線分離的方法2．劃線分離操作中的相關(guān)問題在劃線操作的第一步以及之后每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束后，還需要灼燒接種環(huán)。項(xiàng)目第一次灼燒之后每次劃線前灼燒劃線結(jié)束后灼燒目的避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上的菌種殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免其污染環(huán)境或感染操作者、，、.-sS*注意事項(xiàng)在灼燒接種環(huán)后，要待其冷卻后才能伸入菌液，以免接種環(huán)溫度太高殺死菌種；第二次及以后的劃線要從上一次劃線的末端開始；劃線時(shí)用力大小要適當(dāng)，防止用力過大劃破培養(yǎng)基3.進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，要將培養(yǎng)皿倒置如果正放培養(yǎng)皿，則皿蓋上形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的細(xì)菌會(huì)隨水?dāng)U散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離的目的。因此恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿必須倒置。4．保存菌種用接種環(huán)取出單個(gè)菌落，用劃線分離法接種在斜面培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)24h后，置于4C冰箱中保存。［題組沖關(guān)］

1．某研究小組從有機(jī)廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線

接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次解析：選B。培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再從上次劃線的末端開始進(jìn)行劃線；接種后的培養(yǎng)皿需放在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，一般每隔12h或24h觀察一次。2.(2020.浙江溫嶺選考模擬)下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請回答下列問題：|a.配制|I培養(yǎng)基I|a.配制|I培養(yǎng)基IfB.滅菌fC.擴(kuò)大培養(yǎng)(液體培養(yǎng)基丿D.劃線分離和培養(yǎng)(固體培養(yǎng)基)E.菌種保存A過程配制培養(yǎng)基時(shí)除了加入特定的營養(yǎng)物質(zhì)以外，還要加入一定量的氯化鈉，以維持。對培養(yǎng)基酸堿度的調(diào)節(jié),應(yīng)該在B過程的傾“前面”或“后面”)。D過程與C過程相比，培養(yǎng)基中另外需添加的物質(zhì)是。E過程所需的溫度是。與微生物培養(yǎng)不同，植物組織培養(yǎng)時(shí)，先配制MS培養(yǎng)基，再加入一定比例的植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是接種環(huán)和鑷子B.三角瓶和廣口瓶C.發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基D.用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽解析：(1)氯化鈉的作用是維持培養(yǎng)基的滲透壓。調(diào)節(jié)好酸堿度后才能進(jìn)行滅菌，若滅菌后再調(diào)節(jié)酸堿度，會(huì)產(chǎn)生新的污染。(2)在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入一定量的瓊脂可形成固體培養(yǎng)基。菌種應(yīng)置于4°C冰箱中保存。(3)植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中需加入一定比例的植物激素。(4)高壓蒸汽滅菌常用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)器材等的滅菌，而用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽只能進(jìn)行消毒，不能進(jìn)行滅菌操作，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。答案：(1)滲透壓前面瓊脂4C植物激素D分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)原理：利用尿素的細(xì)菌含有脲酶，通過降解尿素作為其生長的氮源。其反應(yīng)式為(NH2)2C===O+H￡――^2NH3+CO2,生成的NH3使培養(yǎng)基的pH由原來的中性變?yōu)閴A性,于是培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色。2.實(shí)驗(yàn)步驟預(yù)測本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果：LB全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基上的菌落多而雜；尿素固體培養(yǎng)基上的菌落少而純；一定時(shí)間內(nèi)，菌落周圍出現(xiàn)紅色區(qū)域。用濃度為10-4和10-5土壤稀釋液接種，更容易形成單菌落的是心土壤稀釋液。［基礎(chǔ)診斷］尿素培養(yǎng)基配制時(shí)各種成分均需要過濾滅菌(X)脲酶分解尿素為氨氣，酚紅指示劑遇氨氣(堿性)變紅色(V)涂布分離后不能倒置培養(yǎng)皿，防止涂布的菌液流出(X)分離以尿素為唯一氮源的微生物時(shí)，尿素培養(yǎng)基中加入瓊脂作為凝固劑(X)制備土壤懸液時(shí)，在無菌條件下，將土樣與無菌水混合搖勻后盡量吸取土樣，以增加微生物的數(shù)量(X)涂布分離法分離細(xì)菌，一般采用移液器吸取0.1mL樣液加到含有相應(yīng)培養(yǎng)基中(V)涂布分離法能夠計(jì)數(shù)菌落數(shù)，采用該方法統(tǒng)計(jì)出的細(xì)菌數(shù)通常偏少(V)尿素培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量比全營養(yǎng)培養(yǎng)基上微生物數(shù)量多(X)1．培養(yǎng)基中觀測指標(biāo)的分析培養(yǎng)基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化(變紅)，標(biāo)志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落，這一現(xiàn)象表明能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中只占極少部分。2．微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用對照組作用現(xiàn)象結(jié)論未接種培養(yǎng)基有無雜菌污染的判斷未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染接種的LB全營養(yǎng)培氓甘養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基篩選作用的確認(rèn)LB全呂養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用3.樣品稀釋的原因和標(biāo)準(zhǔn)(1)稀釋原因：樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)。在適當(dāng)?shù)南♂尪认?，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)的關(guān)鍵。稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定范圍的樣品稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板計(jì)數(shù)。［題組沖關(guān)］1．金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下列實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的做法錯(cuò)誤的是()對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)加熱后才能倒掉接種后雙手必須用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭解析：選C。金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，所以在操作時(shí)一定要做到安全防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對接種環(huán)進(jìn)行灼燒也可以殺滅細(xì)菌，防止污染環(huán)境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培養(yǎng)基中的金黃色葡萄球菌；如果只對帶菌培養(yǎng)基進(jìn)行加熱，殺不盡其中的致病菌，因?yàn)榇司哪透邷啬芰軓?qiáng)，會(huì)污染環(huán)境。2.(2020.浙江臺(tái)州高三模擬)下圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的基本流程，請回答下列問題：該實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基不能含有。尿素B.氯化鈉C.葡萄糖D.瓊脂尿素溶液可用使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是。圖中步驟C為。相對于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點(diǎn)是。如果菌落周圍出現(xiàn)色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶。答案：(1)D(2)G6玻璃砂漏斗過濾將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察有無菌落出現(xiàn)(3)倒平板單菌落更易分開(4)紅1．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)和分離的敘述，錯(cuò)誤的是()通過消毒不能殺死物體內(nèi)所有的微生物利用劃線分離法可以統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目劃線分離法和涂布分離法常用于微生物的接種微生物所用的培養(yǎng)基成分和植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基成分不同解析：選B。消毒是指殺死病原微生物，但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法。統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目要用涂布分離法，劃線分離法辦不到。微生物接種最常見的方法是劃線分離法和涂布分離法。不同的培養(yǎng)對象，所需的營養(yǎng)成分不同，培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)也就不同。下圖是利用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)和純化X細(xì)菌的部分操作步驟。有關(guān)敘述正確的是()步驟①中，倒好平板后應(yīng)立即將其倒置，防止水蒸氣落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)物步驟②接種環(huán)和試管口應(yīng)先在火焰上灼燒，接種環(huán)冷卻后再放入試管中蘸取菌液步驟③沿多個(gè)方向劃線，使接種物逐漸稀釋，培養(yǎng)后可根據(jù)出現(xiàn)的單個(gè)菌落計(jì)數(shù)步驟④是將培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一段時(shí)間后所得到的都是X細(xì)菌的菌落答案：B(2016?浙江10月選考)請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題：LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加，滅菌備用。尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h,推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是(A.10-5稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基B.10-5稀釋液+LB固體培養(yǎng)基C.10-4稀釋液+尿素固體培養(yǎng)基D.10-4稀釋液+LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生所致。制備固定化脲酶時(shí)，用石英砂吸附脲酶、裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是。答案：(1)瓊脂糖高壓蒸汽孔徑小，細(xì)菌不能濾過A紅色環(huán)氨(或NH3)除去游離的脲酶請結(jié)合圖示，回答下列有關(guān)大腸桿菌分離與純化的問題：稀釋用1mL無菌吸管吸取1mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入盛有9mL的大試管中，充分混勻，稀釋倍；按照同樣的方法依次進(jìn)行稀釋制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。(2)劃線或涂布①劃線分離法操作：在旁，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線。劃線方法：劃線和劃線。平行劃線時(shí)，第一次劃線及每次劃線之間都要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后也要灼燒接種環(huán)，目的分別是什么？②涂布分離法a.操作：取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進(jìn)行培養(yǎng)。b.圖示：⑶培養(yǎng)：將接種的平板于培養(yǎng)箱或溫室中37°C培養(yǎng)12?24ho答案：(1)無菌水10(2)a.酒精燈火焰b.平行連續(xù)c.第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束時(shí)灼燒目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線后菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(3)倒置(1)依物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于(1)依物理性質(zhì)，該培養(yǎng)基屬于養(yǎng)基。，應(yīng)加入的物成分含量成分含量NaNO33gFeSO。0.01gK2HPO41gC6H12O630g瓊脂15gH2O1000mLMgSO4?7H2O0.5g青霉素0.1萬單位1.(2020?杭州模擬)如表為某微生物培養(yǎng)基的配方，請回答下列問題:培養(yǎng)基。依用途劃分，則屬于TOC\o"1-5"\h\z根據(jù)培養(yǎng)基原料，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是。該培養(yǎng)基中的碳源是。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都融化后分裝前，要進(jìn)行的是。若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去的物質(zhì)是質(zhì)是。細(xì)菌種群進(jìn)化過程中，起主要作用的變異是。(填編號(hào))環(huán)境條件B.基因重組C.基因突變D.染色體畸變解析：(1)該培養(yǎng)基中含有凝固劑瓊脂，屬于固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有抗生素(青霉素)，屬于選擇培養(yǎng)基。(2)該培養(yǎng)基含有有機(jī)碳源一一C6H12O6,可見所培養(yǎng)的微生物是異養(yǎng)型生物。(3)不論何種培養(yǎng)基，在各成分都融化后分裝前，要先進(jìn)行pH調(diào)整。(4)若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去青霉素和C6H12O6，加入纖維素粉。(5)細(xì)菌是原核生物，沒有染色體，不會(huì)發(fā)生染色體畸變；細(xì)菌不能進(jìn)行有性生殖，不會(huì)發(fā)生基因重組，所以細(xì)菌可遺傳的變異只有基因突變。答案：(1)固體選擇(2)異養(yǎng)型(3)C6H12O6調(diào)整pH(4)青霉素和C6H12O6纖維素粉(5)C2．請回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)基的問題：TOC\o"1-5"\h\z微生物的培養(yǎng)都需要培養(yǎng)基，一般培養(yǎng)基都含有的成分有；配制固體培養(yǎng)基還需要加入凝固劑。制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般流程包括：計(jì)算—稱量—融化—A—B上述流程中A代表,實(shí)驗(yàn)室中這個(gè)步驟常用的方法有；流程中B代表，該步驟進(jìn)行的適宜溫度是°C左右。鑒定分解尿素的細(xì)菌的方法是向以為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，如果pH升高，指示劑將變紅，說明該種細(xì)菌能分解尿素。與全營養(yǎng)培養(yǎng)基中的菌落相比，選擇培養(yǎng)基中菌落數(shù)()A.多B.少C?相等D?幾乎為零解析：(1)一般培養(yǎng)基中都應(yīng)含有水、無機(jī)鹽、碳源和氮源四種成分。(2)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的流程包括：計(jì)算—稱量—融化—滅菌—倒平板；灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌是實(shí)驗(yàn)室中常用的滅菌方法。(4)選擇培養(yǎng)基上只能生長特定的微生物，因此該培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)目比全營養(yǎng)培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)少。答案：(1)水、碳源、氮源和無機(jī)鹽瓊脂滅菌灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌倒平板60(3)尿素酚紅(4)B3.(2020.浙江五校高三聯(lián)考)某村莊有一條小溪，近幾年由于上游幾家乳膠廠不斷向其中排放廢水，小溪變得不再清澈。某同學(xué)想測定該溪水中的細(xì)菌含量情況?；卮鹣铝袉栴}：先根據(jù)所學(xué)知識(shí)制備LB培養(yǎng)基。制備該培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算一稱量一融化一滅菌—倒平板。下列關(guān)于制備LB培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的。培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿中融化瓊脂時(shí)不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦D?滅菌時(shí)一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121°C,500g/cm2壓力下滅菌15分鐘該同學(xué)利用上述制備的培養(yǎng)基來檢測水樣中的細(xì)菌數(shù)量，他所選擇的分離方法應(yīng)是；該同學(xué)在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是。接種在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前一段時(shí)間需打開工作臺(tái)上的紫外燈和過濾風(fēng)，實(shí)驗(yàn)中需關(guān)閉的是(A.酒精燈B.照明燈C.紫外燈D?過濾風(fēng))。值得注意的是，他所選擇的這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往比實(shí)際細(xì)菌的數(shù)目要低，這是因?yàn)棰僖驗(yàn)棰?②(不考慮實(shí)驗(yàn)操作原因引起的細(xì)菌數(shù)目的變化)該同學(xué)欲將所分離出的某種細(xì)菌臨時(shí)保藏，應(yīng)接種到試管的培養(yǎng)基上等菌落長成后，放入冰箱低溫保藏。解析：培養(yǎng)基應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌，A正確；培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿中，B正確；融化瓊脂時(shí)不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦，C正確；滅菌時(shí)一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121°C,1000g/cm2壓力下滅菌15分鐘，D錯(cuò)誤。答案：(1)D(2)(稀釋)涂布分離法檢查平板滅菌是否徹底C①該方法只能統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，死菌無法統(tǒng)計(jì)②當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落(4)斜面(2020?杭州模擬)從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)過程如圖所示，請回答下列問題：土樣—*土壤浸出液—*稀釋—*接種—*培養(yǎng)、觀察欲從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌，將土壤用進(jìn)行一系列的梯度稀釋，同一濃度的土壤稀釋液至少涂布個(gè)平板。在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于。選擇培養(yǎng)基B.固體培養(yǎng)基C?液體培養(yǎng)基D.半固體培養(yǎng)基接種后的培養(yǎng)皿放于37°C的恒溫箱中培養(yǎng)。在能利用尿素的細(xì)菌菌落周圍,有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是為了提高尿素肥效，可以將分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。水培某植物時(shí)，為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用技術(shù)。解析：(1)稀釋時(shí)，為減少雜菌干擾，需要用無菌水稀釋。為排除偶然因素，每個(gè)稀釋度需要涂布3個(gè)平板。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基在功能上屬于選擇培養(yǎng)基。(3)培養(yǎng)時(shí)，為防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落沖散細(xì)菌，需要將培養(yǎng)皿倒置。能利用尿素的細(xì)菌可分泌脲酶，脲酶能將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑酚紅呈紅色。(4)固定化酶技術(shù)使酶可以回收，從而提高了酶的利用率。答案：(1)無菌水3(2)A(3)倒置能利用尿素的細(xì)菌可分泌脲酶，脲酶能將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色(4)固定化酶已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。I號(hào)培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5g/L)。II號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L),硝酸銨(3g/L),其他無機(jī)鹽(適量)，X(15g/L)oIII號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L),硝酸銨(3g/L),其他無機(jī)鹽(適量)，X(45g/L)o回答下列問題：在I號(hào)培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是oII、III號(hào)培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機(jī)物是若將土壤懸浮液接種在II號(hào)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，不能降解X的細(xì)菌比例會(huì),其原因是II號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，接種時(shí)，應(yīng)采用的方法是假設(shè)從III號(hào)培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細(xì)菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供和解析：(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，牛肉膏、蛋白胨為微生物提供了氮源，而II號(hào)、III號(hào)培養(yǎng)基中除X外的其他物質(zhì)均不含碳，所以能為微生物提供碳源的有機(jī)物是X。(2)因?yàn)镮I號(hào)培養(yǎng)基中碳源只有X,相當(dāng)于選擇培養(yǎng)基，只有能降解X的細(xì)菌才能增殖，而不能降解X的細(xì)菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要對菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，應(yīng)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。在有氧條件下，丙酮酸參與細(xì)菌的需氧呼吸，可以為該菌的生長提供能量和合成其他物質(zhì)的原料。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨X下降不能降解X的細(xì)菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細(xì)菌能夠增殖稀釋涂布平板法能量合成其他物質(zhì)的原料(2020?寧波一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：⑴培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基?！澳康木鄙L所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是。在上述實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用劃線分離的方法進(jìn)行接種，此過程中所用的接種工具是，操作時(shí)采用滅菌的方法。解析：(1)在選擇培養(yǎng)基中加入特定物質(zhì)，可以篩選出特定的細(xì)菌。(2)根據(jù)題目所給的培養(yǎng)基配方，“目的菌”生長所需的氮源和碳源只能來自培養(yǎng)基中的化合物A。異養(yǎng)需氧型細(xì)菌在培養(yǎng)時(shí)需要振蕩。(3)獲得純凈特定“目的菌”的關(guān)鍵是防止外