尿液檢驗(jiǎnyàn)標準化、質(zhì)控進展曾真現(xiàn)狀

解決方案第一頁，共三十九頁。第一章

干化學(xué)(huàxué)檢測尿液

有形成分質(zhì)控

第二頁，共三十九頁。檢測化學(xué)項目(xiàngmù)多、速度快；檢測是紅細胞、中性粒細胞的化學(xué)成分；質(zhì)控物為化學(xué)物質(zhì)，不是真實形態(tài)學(xué)成分；現(xiàn)狀第三頁，共三十九頁。干化學(xué)(huàxué)的問題特異性不夠好；干擾物質(zhì)的影響不能質(zhì)控；許多有形成分不能檢測；本底干擾檢測結(jié)果：本底+尿液顏色干擾；尿液漏滴造成漏檢；干化學(xué)方法自身不能證實檢測的真實性；不符合ISO15189；只能(zhīnénɡ)是過篩檢測；問題第四頁，共三十九頁。例：干化學(xué)(huàxué)對白細胞檢測的局限性檢測粒細胞的酯酶淋巴細胞不能檢測干擾物質(zhì)(wùzhì)：慶大、先鋒、甲醛、膽紅質(zhì)等第五頁，共三十九頁。對策鏡檢證實和檢測(jiǎncè)不能檢測(jiǎncè)的有形成分；使用特異性檢測方法檢測化學(xué)成分；改進方法，減少本底干擾和漏檢；第六頁，共三十九頁。第二章

有形成分檢測(jiǎncè)儀器的質(zhì)控

第七頁，共三十九頁。有形成分檢測儀器技術(shù)(jìshù)不同質(zhì)控不同流式：質(zhì)控物為特制顆粒物；機器視覺(shìjué)技術(shù)：紅細胞沒有質(zhì)控物的儀器現(xiàn)狀第八頁，共三十九頁。

第一節(jié)

流式技術(shù)(jìshù)儀器

第九頁，共三十九頁。質(zhì)控依據(jù)是血液分析質(zhì)控物為特制(tèzhì)顆粒，不是尿液有形成分，為替代品，與實際檢測無系統(tǒng)屬性；干擾物影響無法質(zhì)控和檢測；檢測錯誤時檢測者無法獲悉；分類計數(shù)無意義；實際意義是質(zhì)控計數(shù)準確性；質(zhì)控依據(jù)(yījù)和問題流式第十頁，共三十九頁。特制顆粒質(zhì)控物，實際(shíjì)檢測無系統(tǒng)屬性流式第十一頁，共三十九頁。無法質(zhì)控干擾(gānrǎo)錯誤結(jié)晶(jiéjīng)、酵母菌誤識別為紅細胞流式標記(biāojì)物紅細胞儀器不能審核真菌結(jié)晶第十二頁，共三十九頁。檢測錯誤時儀器無法(wúfǎ)知道流式第十三頁，共三十九頁。優(yōu)勢(yōushì)和不足優(yōu)勢：

1、流式+圖像：實現(xiàn)儀器檢測驗證功能；2、圖像更直觀、可信；不足1、因為拍不到清晰圖片，所有圖像按相似性處理獲得，由儀器內(nèi)圖庫提供單一成分的圖片；2、拍不到清晰圖片，識別(shíbié)極易出錯，驗證功能打折扣；3、驗證錯誤導(dǎo)致提供圖片錯誤，結(jié)果不正確；結(jié)論仍然不能代替鏡檢數(shù)字圖像流式第十四頁，共三十九頁。（CLSI原NCCLS)尿液分析操作(cāozuò)指南（第三版）GP16-A3(2009)第十五頁，共三十九頁。Number4GP16-A3

24?ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute.Allrightsreserved.

10.1.2UrineParticleAnalyzers64-68Automatedurineanalyzersusevarioustechnologiestoclassifyandenumerateparticlesinurine.Dependingontheinstrument,thetechnologiesincorporatedcanincludeimpedance,

digitalimagingflowcytometry,

flowcytometry,

lightscatter,dyes,fluorescence,orsomecombinationthereof.Particleswithlikecharacteristicsarethengroupedandclassified.TheelementsthataretypicallyidentifiedincludeRBC,WBC,epithelialcells(squamousandnonsquamous),casts(benignandpathologic),bacteria,sperm,mucus,crystals,andsmallroundcells.Samplesshowingabnormalities,eitherlaboratory-definedorasindicatedbytheanalyzer,arethenreviewedmicroscopicallybyatechnologist.Negativesamplesmayobviatetheneedformanualmicroscopy.第十六頁，共三十九頁。國際標準（GP16-A32009年）給出的解決(jiějué)對策1、數(shù)字圖像流式細胞儀、流式細胞儀等標本不論是實驗室認為或儀器檢測異常時（Samplesshowingabnormalities,eitherlaboratory-definedorasindicatedbytheanalyzer,）必須(bìxū)用人工鏡檢方法重新檢測確認。2、陰性結(jié)果可以免除鏡檢確認。第十七頁，共三十九頁。國際標準(ɡuójìbiāozhǔn)的參考文獻64DelangheJ.Newscreeningdiagnostictechniquesinurinalysis.ActaClinBelg.2007;62:155-161.65OttigerC,HuberAR.Quantitativeurineparticleanalysis:integrativeapproachfortheoptimalcombinationofautomationwithUF-100andmicroscopicreviewwithKOVAcellchamber.ClinChem.2003;49:617-623.66DelangheJR,KouriTT,HuberAR,etal.Theroleofautomatedurineparticleflowcytometryinclinicalpractice.ClinChimActa.2000;301:1-18.67RoggemanS,ZamanZ.Safelyreducingmanualurinemicroscopyanalysesbycombiningurineflowcytometerandstripresults.AmJClinPathol.2001;116:872-878.68ShayanfarN,ToblerU,vonEckardsteinA,BestmannL.Automatedurinalysis:firstexperiencesandacomparisonbetweentheIrisiQ200urinemicroscopysystem,theSysmexUF-100flowcytometerandmanualmicroscopicparticlecounting.ClinChemLabMed.2007;45:1251-1256.第十八頁，共三十九頁。

第二節(jié)

機器視覺(shìjué)技術(shù)儀器

第十九頁，共三十九頁。質(zhì)控依據(jù)機器(jīqì)視覺方法學(xué)：顯微鏡鏡檢與人工顯微鏡鏡檢區(qū)別：操作自動化前期(qiánqī)儀器能智能識別計數(shù)尿液有形成分國際標準：ISLH

RecommendedReferenceProcedurefortheEnumerationofParticlesinUrine(2003)第二十頁，共三十九頁。ISLH主要(zhǔyào)內(nèi)容1、不離心尿液直接檢測，計數(shù)池體積達到6.4ul2、低倍鏡

觀察計數(shù)大型有形成分（上皮細胞、管型）；高倍鏡

觀察計數(shù)小型有形成分（細胞(xìbāo)、真菌、結(jié)晶等）3、結(jié)果以“個/ul”報告。4、統(tǒng)計學(xué)精度

低倍：（管型和上皮）至少計數(shù)50個

CV<14%；

高倍：（紅、白細胞等）至少計數(shù)200個，

CV<7%；第二十一頁，共三十九頁。一、標準(biāozhǔn)鏡檢參考方法的檢測特點不離心尿液直接鏡檢改變離心尿液沉渣鏡檢檢測體積：最大體積6.4ul(不是1ul)

目的：提高靈敏度，確保(quèbǎo)檢測準確性

原因：不離心尿液直接鏡檢極易漏檢報告：個/ul第二十二頁，共三十九頁。機器視覺(shìjué)技術(shù)采取的方法檢測：不離心尿液直接(zhíjiē)檢測檢測體積：大于6.4ul（通過低倍鏡大面積掃描定位。高倍鏡跟蹤識別而實現(xiàn)）實現(xiàn)：低濃度不漏檢靈敏度達到：1個細胞/ul檢測報告：個/ul第二十三頁，共三十九頁。必須有兩個鏡頭：高倍鏡和低倍鏡兩個鏡頭觀察的內(nèi)容(nèiróng)不同（大小不同）兩個鏡頭觀察的范圍不同（體積范圍不同）兩個鏡頭觀察的細節(jié)不同（分辨率不同）二、標準鏡檢參考(cānkǎo)方法的基本要求：第二十四頁，共三十九頁。采用兩個鏡頭(jìngtóu)：高倍鏡和低倍鏡檢測方式完全按照顯微鏡鏡檢方法機器(jīqì)視覺技術(shù)采取的方法第二十五頁，共三十九頁。儀器工作流程

完全參照人工鏡檢標準(biāozhǔn)參考方法進樣充池低倍過篩(ɡuòshāi)（視野數(shù)可設(shè)置）低倍定位(dìngwèi)分類計數(shù)（管型、上皮）高倍識別分類計數(shù)報告清洗陰性陽性人工輔判第二十六頁，共三十九頁。統(tǒng)計學(xué)精度低倍：（管型和上皮）至少計數(shù)(jìshù)50個CV<14%；高倍：（紅、白細胞等）至少計數(shù)200個，

CV<7%；這是在有形成分濃度不低時候的理想統(tǒng)計學(xué)精度三、標準鏡檢參考方法(fāngfǎ)的理想精密度第二十七頁，共三十九頁。通過低倍鏡：大面積掃描定位。高倍鏡：跟蹤識別而實現(xiàn)

上海檢驗中心檢測認證(rènzhèng)：CV為4%臨界濃度：分布不均勻，檢測體積過大；機器視覺技術(shù)(jìshù)采取的方法第二十八頁，共三十九頁。機器視覺目前(mùqián)質(zhì)控的不足：質(zhì)控物只有單一紅細胞；其他有形成分暫時沒有質(zhì)控商品，期待；所有的有形成分智能分類計數(shù)水平有提升空間(kōngjiān)，在此期間人工審核不能少；標準圖庫建立和指導(dǎo)意義大，需要增加和加強；實際意義：質(zhì)控計數(shù)準確性；分類計數(shù)在人工審核后才具有意義；第二十九頁，共三十九頁。第三節(jié)

數(shù)字圖像自動化儀器

如何達到(dádào)人工鏡檢標準

第三十頁，共三十九頁。自動化數(shù)字圖像儀器(yíqì)=人工鏡檢條件是否符合ISLH（2003年）的國際標準條件；是否是使用的具有高、低倍鏡的顯微鏡;拍攝圖像是否是真實顯微鏡下的實景？圖像經(jīng)過處理(chǔlǐ)否？檢測靈敏度能否達到:3-10個細胞/ul;結(jié)果有人工審核；審核人員專業(yè)知識、經(jīng)驗、能力、責(zé)任心；第三十一頁，共三十九頁。儀器技術(shù)原因：主要是檢測靈敏度達不到要求，不能質(zhì)控；識別能力不理想，無法(wúfǎ)質(zhì)控；單鏡頭的局限性，雖有圖像，小的看不清，全局面不夠；檢測體積達不到國際標準要求，精確度較差；問題無質(zhì)控品的儀器(yíqì)第三十二頁，共三十九頁。第四節(jié)

如何能是尿液檢測(jiǎncè)標準和正確

第三十三頁，共三十九頁。如何(rúhé)能是尿液檢測標準和正確按國際標準文件ISLH（2003）和GP16-A3執(zhí)行，不折扣；尿液檢驗必須包括：理想、化學(xué)和鏡檢；任何儀器檢測(jiǎncè)結(jié)果必須與人工鏡檢相符合；總原則(yuánzé)第三十四頁，共三十九頁。非形態(tài)學(xué)自動化儀器檢測的陽性結(jié)果必須鏡檢復(fù)檢（按GP16-A3）；非形態(tài)學(xué)自動化儀器