ANovelRNAInSituHybridizationPlatform Medicine:AnInnovativeDouble-Zprobing化用藥的新型原位雜交平MingLIU,劉明博士CellSignaling

SeniorDrugDiscoveryFieldApplication高級(jí)藥物研發(fā)應(yīng)用專:: ADVANCEDCELL一、我們銷售什么？RNA檢測試劑盒單拷貝RNA檢測方法試陽性探針：PPIB等低拷貝，不像GAPDH隱性探針：DapB等細(xì)菌 探陽性片（促銷中不含RNAscope?ControlSlides-HumanHelaCell

RNAscope?ControlSlides-Mouse3T3Cell 試劑盒及配套試免疫組化只是沒有客戶的目 探針、樣ADVANCEDCELL二、我們一線銷售需要收集什么信息如果是組織，什么物種 ADVANCEDCELL三、我們的客戶在所有想做IHC、但無好抗體的低拷貝表 客非編碼RNA研究、LncRNA客干細(xì)胞 、神經(jīng)科學(xué) 、炎癥 、肥胖所有物種 鼠、小鼠、斑馬魚、豬、猴、狗、兔科研院 制藥，生物技術(shù) CRO公司腫瘤藥物開發(fā)及伴隨診斷試劑開發(fā)的公司（GSK，Lilly，Novartis，AZ，HDB等 能提 化診斷服務(wù)的公司ADVANCEDCELL四、ACDRNAscope技術(shù)為什么好？ 可以檢測任 ★（未 從合成探針到檢測完畢小于三周 ADVANCEDCELL為什么在原位檢測無抗體~15,000non-codingRNAs(e.g.現(xiàn)有的抗體性能不好:~3,000secretedproteins(e.g.抗體缺乏靈敏度:~2,000lowexpressors(e.g.PTEN/GLI-antibodiesgivedifferentstainingpatternsforsomeIHC的結(jié)果需要再次驗(yàn)證IHCresultsneedtobeADVANCEDCELL五、我們有Real-timePCR，熒光實(shí)時(shí)定量PCR，為什么還要用ACDRNAscope方法？答：組織、細(xì)胞定位對(duì)很多BiomarkerRNAscopeISH提供了一種檢測組、病理微環(huán)境中RNA信息的簡單敏的方適合于任何沒有抗體、或者沒有抗體 替代方案：抽提組織RNA做Real-timePCR，但會(huì)失去特定的細(xì)胞信原位RNA檢測對(duì)于多達(dá)25%的人（例如細(xì)胞因子）來說是唯一可選方案ADVANCEDCELL六、如何定數(shù)點(diǎn) Bact.dapB(-)ControlsADVANCEDCELL七、ACDRNAscope就沒有局限性嗎檢測長度最好在0ae以上，如果片段長度在00100ae左右，可以將基因不可以檢測microRNA，即20幾個(gè)base的微ADVANCEDCELL八、ACDRNAscope如果做不出來？真的有那么好嗎使用ACD的雜交 ADVANCEDCELL九、國內(nèi)已經(jīng)有哪些科研客戶 ADVANCEDCELL探針：目標(biāo)探針與對(duì)照探ANYgeneforany>3000inventoryprobes(immediatedelivery,nosetupNon-inventoryprobesinlessthan3weeks(setupStandarddesign(human,rat,mouse)vs.special試劑RNAscope2.0FFPE–RNAscopeDuplexRNAscopeVS(VentanaRNAscopeMultiplexControl免疫組化雜交爐HybEZhybridizationOven,tray,rackandhumidityThermoBriteis ADVANCEDCELL優(yōu)寧維銷售同事優(yōu)寧維技術(shù)同事ADVANCEDCELL目前市場活動(dòng)--ACD該促銷適于庫存探針，請(qǐng)大家在查看探針時(shí)，注意該探針是適于C1通道還是C2通道的（的探針只有C1，方法平臺(tái)：單個(gè)RNA檢測法；兩個(gè)RNA同時(shí)檢測法；3~4各位銷售“大蝦”在使用該單頁的過程中收集自己及ADVANCEDCELLADVANCEDCELLADVANCEDCELLADVANCEDCELLADVANCEDCELL位于在加經(jīng)過市場驗(yàn)證的、突破性的檢測技2010年9月推RUO快速增長的客戶主要客戶包括幾乎全球范圍內(nèi)所有大型制藥、頂級(jí)研究機(jī)與Ventana（羅氏）和Definiens公司建立合作伙伴關(guān)2012年融資1200在臨床開研發(fā)方面具有專利 診斷測試產(chǎn)品ADVANCEDCELLRNAscope?ADVANCEDCELL原位雜交技術(shù)(Insituhybridization,核酸即探針與組織、細(xì)胞或上待測NARNA定的檢測將待測核酸在組織、細(xì)胞或上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備個(gè)重要條件：組織、細(xì)胞或的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運(yùn)用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理：在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件用記的已知的RNA核苷酸片段，按核酸雜交中堿基配對(duì)原，與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的 片段相合雜交)，所形成的雜交體)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。尤其在 分析和診斷方面能作定性、定位和定分已為有效的分子病理學(xué)，同時(shí)在分析低豐度和罕見的mRN表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)是在已有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)多彩色熒光原位交(Muticolorfuorescencenuhbrdzatio，mFIS)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交能同時(shí)檢測多個(gè)靶，各靶位在熒光顯微鏡下和 上顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜。它克服了FISH技術(shù)的局限，能同時(shí)檢測多個(gè) ，在檢測遺傳物質(zhì)的突變和 定位等方面得到了廣泛的應(yīng)ADVANCEDCELLRNAscope?介紹fixed,paraffin-embedded(FFPE)tissues，福爾 ADVANCEDCELLADVANCEDCELL ADVANCEDCELL ADVANCEDCELLRNAscope?DNADNA水蛋白質(zhì)水

mRNAmicroarray；Real-timePCR

ADVANCEDCELL優(yōu)點(diǎn)：1）與FISH和普通PCR相比較，能提 如HIV等檢測RNA 更直接，更有效而RNAScope是檢測單鏈的RNA，又采用類似IHC的步驟，相對(duì) ADVANCEDCELL優(yōu)點(diǎn)：1）與普通RNAISH相比，RNAscope?與mRNAmicroarray和Real-timePCR相比，能提 的 ADVANCEDCELL優(yōu)點(diǎn)：1）與IHC相比，檢測的時(shí)間更短，更快篩選 化服務(wù)，RNAscope?更易分析藥物的ADVANCEDCELLRNAscope?的相關(guān)競GeneViewRNATissueADVANCEDCELL未滿足的需求–原位RNA分IHC（免疫組化）和FISH-熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)（原位雜交）是主流的位Biomarker生物標(biāo)志物分析方目前還沒有檢測RNA生物標(biāo)志物的靈敏、強(qiáng)大的

ADVANCEDCELL組織定位對(duì)很多Biomarker非常RNAscopeISH提供了一種檢測組、病理微環(huán)境中RNA信息的簡單敏的方適合于任何沒有抗體、或者沒有抗體 替代方案：抽提組織RNA做原位RNA檢測對(duì)于多達(dá)25%的人（例如細(xì)胞因子）來說是唯一可選ADVANCEDCELLTranslatingGenomicDiscoveriesTissuebasedandClinical

缺乏細(xì)FFPE樣本PCR有復(fù)雜的操作流

ClinicalPCR類似的靈敏度和特異性IHC類似的操作流程和細(xì)胞定很難找到好的抗缺乏靈敏度、特異性ADVANCEDCELL為什么在原位檢測無抗體~15,000non-codingRNAs(e.g.現(xiàn)有的抗體性能不好:~3,000secretedproteins(e.g.抗體缺乏靈敏度:~2,000lowexpressors(e.g.PTEN/GLI-antibodiesgivedifferentstainingpatternsforsomeIHC的結(jié)果需要再次驗(yàn)證IHCresultsneedtobeADVANCEDCELL為什么選擇最靈敏、強(qiáng)大的原位RNA分析技幾乎可以檢測任何表 表達(dá)低于50個(gè)拷貝/每個(gè)胞 只有RNAscope可以檢測到轉(zhuǎn)錄組頂端顯露下面的部

ADVANCEDCELLRNAscope?:TheZLabelZPreamlifDoubleZ

TargetmRNAADVANCEDCELLRNAscope?:The

ZXNon-specificXADVANCEDCELLRNAscopePOLR2A SingleRNAdetectionwithstandard20Z-oligopairs=1,000ZZZZZZZZ … Bact.dapB(-)ADVANCEDCELLBuiltinAssayZZZZOneZ-probepair(50

TwoZ-probepairs(100

ThreeZ-probepairs(150ADVANCEDCELLASimpleKitAssayforSingleRNADetectioninFixedorFrozen

DetectionofvirtuallyanyChromogenic1-or2-Fluorescence1-to4-FFPEorfresh

AnyAnyUniversalassayWeeksfromsequencetoGuaranteedto…it’sADVANCEDCELLRNAscope?Workflow:SimilartoH2O2Epitope

(40°C2hr)Amp1(40°C30

LabelProbe(40°C15DABHematoxylin

Amp6(40°C15ADVANCEDCELL

Target(e.g.

-controlADVANCEDCELLRNAscopedetectioninarchivalFFPEADVANCEDCELLRNAscope?Workflow:SimilartoH2O2Epitope

(40°C2hr)Amp1(40°C30

LabelProbe(40°C15DABHematoxylin

Amp6(40°C15ADVANCEDCELLRNAscopedetectionoftumormarkerin2.0 2.0ADVANCEDCELLSingleRNAMoleculeDetectionMALANinMLANA-ADVANCEDCELL探針：目標(biāo)探針與對(duì)照探ANYgeneforany>3000inventoryprobes(immediatedelivery,nosetupNon-inventoryprobesinlessthan3weeks(setupStandarddesign(human,rat,mouse)vs.special試劑RNAscope2.0FFPE–RNAscopeDuplexRNAscopeVS(VentanaRNAscopeMultiplexControlSlides(Hela/Mouse3T3Cell雜交爐HybEZhybridizationOven,tray,rackandhumidityThermoBriteis ADVANCEDCELLADVANCEDCELLRNAscope?i