基因工程的基本操作程序習(xí)題【實(shí)用文檔】doc文檔可直接使用可編輯，歡迎下載

基因工程的基本操作程序習(xí)題基因工程的基本操作程序習(xí)題【實(shí)用文檔】doc文檔可直接使用可編輯，歡迎下載一、選擇題(每小題3分，共39分）1。下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是（)A.目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)物、植物或微生物B．限制性核酸內(nèi)切酶和DＮA連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶C。人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組ＤNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)２．下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是(）.A．一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列B。限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響C.限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RNAD。限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提?。场Ｈ鐖D是利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植物,生產(chǎn)可食用疫苗的部分過(guò)程示意圖，其中PｓtⅠ、SmaⅠ、EｃoRⅠ、ＡpaⅠ為四種限制性核酸內(nèi)切酶.下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）。A。圖示過(guò)程是基因工程的核心步驟Ｂ．表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要用到限制酶SmaⅠC．抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來(lái)D.除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動(dòng)子和終止子等結(jié)構(gòu)4.下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是（)A．過(guò)程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚(yú)基因組測(cè)序B．將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白Ｃ。過(guò)程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因，需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D.應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)５．下圖為DＮA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制酶、ＤNA聚合酶、ＤNＡ連接酶、解旋酶作用的正確順序是（）A。①②③④ Ｂ．①②④③ Ｃ。①④②③ Ｄ．①④③②6．下列關(guān)于基因工程的敘述，不正確的是(多選)()A?；蚬こ探?jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)槟康幕颍?細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體C.通常用一種限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的DＮA,用另一種處理運(yùn)載體DNAD.為培育成抗除草劑的作物新品種,導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7．天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B,而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰,下列操作正確的是（）A．提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DＮA，再擴(kuò)增基因BB。利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D．將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌,然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞8.北極比目魚(yú)中有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有11個(gè)氨基酸的重復(fù)序列,該序列重復(fù)次數(shù)越多,抗凍能力越強(qiáng)。下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是(）。A．過(guò)程①獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚(yú)基因組測(cè)序B．將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因,不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白Ｃ.過(guò)程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因,需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選Ｄ。應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)９.將ada(腺苷酸脫氨酶基因）通過(guò)質(zhì)粒pＥT2８b導(dǎo)人大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶.下列敘述錯(cuò)誤的是（)A.每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒Ｂ。每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)C.每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaD．每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子１0.下列敘述符合基因工程概念的是（）。Ａ。Ｂ淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有Ｂ淋巴細(xì)胞中的抗體基因Ｂ．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C．用紫外線照射青霉菌，使其DNA發(fā)生改變，通過(guò)篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D.自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DＮA上11．在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過(guò)程中,下列操作錯(cuò)誤的是（).Ａ．用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B.用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C．將重組DＮA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D.用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞12。下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物的敘述，正確的是()。A。轉(zhuǎn)入到油菜的抗除草劑基因,可能通過(guò)花粉傳入環(huán)境中B.轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因的植物，不會(huì)導(dǎo)致昆蟲(chóng)群體抗性基因頻率增加C．動(dòng)物的生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)入植物后不能表達(dá)D。如轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來(lái)源于自然界，則不存在安全性問(wèn)題13．下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是（)。A．目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物B.限制性核酸內(nèi)切酶和DNＡ連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶C。人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)二、填空題（共5１分)1。科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組,并且在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)成功。請(qǐng)根據(jù)圖回答問(wèn)題:(1)此圖表示的是采取合成基因的方法獲取基因的過(guò)程。(2）圖中①DＮA是以為模板，形成單鏈ＤNＡ，在酶的作用下合成雙鏈DNＡ，從而獲得了所需要的基因.（3)圖中③代表ＤNA，含基因。(4)圖中④表示.２.下圖表示利用基因工程培育抗蟲(chóng)棉的過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列有關(guān)問(wèn)題。（1)若限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC-，限制酶Ⅱ識(shí)別序列和切點(diǎn)是—Ｇ↓GATCC—,那么在①過(guò)程中,應(yīng)用限制酶_______＿切割質(zhì)粒,用限制酶___＿＿＿_(dá)_切割抗蟲(chóng)基因.(２）將通過(guò)②過(guò)程得到的大腸桿菌涂布在含有＿_(dá)_＿_(dá)_＿＿的培養(yǎng)基上,若能夠生長(zhǎng)說(shuō)明已導(dǎo)入了普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒，反之則說(shuō)明沒(méi)有導(dǎo)入。（3）要確定抗蟲(chóng)基因?qū)牒?，是否能穩(wěn)定遺傳并表達(dá),需進(jìn)行檢測(cè)和鑒定工作,則在個(gè)體水平上的鑒定過(guò)程可簡(jiǎn)述為:_____＿_(dá)_。經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個(gè)攜帶抗蟲(chóng)基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子.理論上,該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F１代中，仍具有抗蟲(chóng)特性的植株占總數(shù)的______＿_(dá)。(4)⑤過(guò)程所用的現(xiàn)代生物技術(shù)稱為_(kāi)＿＿_(dá)_＿＿_(dá),從遺傳學(xué)角度來(lái)看，據(jù)細(xì)胞通過(guò)⑤過(guò)程,能形成棉植株的根本原因是細(xì)胞具有__＿＿＿＿_(dá)__＿_(dá)＿_(dá)______＿.3．干擾素是病毒侵入人體后由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì),它具有廣譜抗病毒的作用。利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)干擾素的流程如下：(1)過(guò)程①產(chǎn)生的物質(zhì)A是____＿＿，cDNA文庫(kù)______(大于／小于)人的基因組文庫(kù)。(2）過(guò)程④用到的工具酶是___________＿_(dá)_，過(guò)程⑤需先用＿_(dá)＿＿_(dá)___________＿_(dá)＿_(dá)處理受體細(xì)胞,過(guò)程⑥通常采用__＿_(dá)＿_(dá)＿＿技術(shù).（３）過(guò)程⑧和⑨的關(guān)鍵技術(shù)分別是________、＿＿＿_(dá)＿_(dá)_＿。(４）基因工程的核心步驟是圖中的__＿_(dá)______＿＿＿_(dá)__（填標(biāo)號(hào)）。４。(2０１1·安徽理綜３1）家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng),可提取干擾素用于制藥.（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用＿_(dá)＿＿_(dá)＿_(dá)_酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá),需要把來(lái)自cＤNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的________和_＿＿＿_(dá)＿_(dá)_之間。(3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mｇ2＋）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、_＿_(dá)_____和__＿_(dá)＿＿_(dá)_。（4)利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí)，貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以___＿_(dá)＿_(dá)_，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量,也有利于空氣交換.5.（20１0·天津理綜，7Ⅰ）下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tｅtＲ表示四環(huán)素抗性基因，ampＲ表示氨芐青霉素抗性基因,BaｍHⅠ、HinｄⅢ、SｍaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答問(wèn)題。（1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用______＿＿＿_(dá)______限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含＿_(dá)____＿_(dá)的培養(yǎng)基上進(jìn)行。（2)能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是＿＿＿_(dá)＿_(dá)_＿(填字母代號(hào))。Ａ．啟動(dòng)子B．tｅｔRC.復(fù)制原點(diǎn)Ｄ．a(chǎn)mpR（3)過(guò)程①可采用的操作方法是_＿＿＿_(dá)__＿(填字母代號(hào)).A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化B。大腸桿菌轉(zhuǎn)化C。顯微注射Ｄ．細(xì)胞融合(4）過(guò)程②采用的生物技術(shù)是＿＿＿_(dá)___＿＿＿_(dá)__＿_(dá)_。（5）對(duì)早期胚胎進(jìn)行切割,經(jīng)過(guò)程②可獲得多個(gè)新個(gè)體.這利用了細(xì)胞的______＿_(dá)性。（6)為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá),可采用__＿_(dá)＿_(dá)＿_(dá)(填字母代號(hào)）技術(shù)。Ａ.核酸分子雜交B．基因序列分析C?？乖贵w雜交Ｄ．ＰCR6．(２0０９·上海卷)人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的P53基因，生物技術(shù)可對(duì)此類(lèi)基因的變化進(jìn)行檢測(cè)。(1)目的基因的獲取方法通常包括____＿_(dá)__和___＿_(dá)___。（２）上圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的P5３基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會(huì)發(fā)生改變,在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基對(duì),這種變異被稱為＿_(dá)＿＿_(dá)__＿。(３)已知限制酶Ｅ識(shí)別序列為ＣCGG，若用限制酶E分別完全切割正常人和患者的P53基因部分區(qū)域（見(jiàn)上圖）,那么正常人的會(huì)被切成_＿_(dá)__＿_(dá)_個(gè)片段，而患者的則被切割成長(zhǎng)度為_(kāi)＿＿＿_(dá)__＿對(duì)堿基和__＿_(dá)___＿對(duì)堿基的兩種片段.(4)如果某人的Ｐ5３基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后,共出現(xiàn)１7０、２20、290和460個(gè)堿基對(duì)的四種片段,那么該人的基因型是＿_(dá)___＿＿＿(以P+表示正?；?P－表示異?；颍?．(2009·福建卷）轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有ＰstⅠ、ＳmaⅠ、EcoRⅠ、AｐaⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1）構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體Ａ?xí)r，應(yīng)選用限制酶＿＿_(dá)＿_(dá)___，對(duì)_____＿＿_(dá)進(jìn)行切割.（2）培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng),欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有_______＿，作為標(biāo)記基因。(3）香蕉組織細(xì)胞具有_＿_(dá)_＿_(dá)_＿，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株.圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的________.8(２01２高考全國(guó)新課標(biāo)卷４０)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題:（１)限制性內(nèi)切酶切割DＮＡ分子后產(chǎn)生的片段，其末端類(lèi)型有和。（2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EｃoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DＮA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是。(３）按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的ＤNＡ連接酶有兩類(lèi),即ＤNＡ連接酶和DNＡ連接酶。(4）反轉(zhuǎn)錄作用的模板是，產(chǎn)物是.若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用技術(shù)。（5）基因工程中除質(zhì)粒外,和也可作為運(yùn)載體。(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,原因是。9．（2012福建高考3２)現(xiàn)代生物科技專題.肺細(xì)胞中的let－7基因表達(dá)減弱，癌基因ＲAＳ表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌.研究人員利用基因工程技術(shù)將ｌｅｔ—７基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)驗(yàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。請(qǐng)回答:（１)進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用酶切開(kāi)載體以插入ｌeｔ-7基因。載體應(yīng)用RNＡ聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,以驅(qū)動(dòng)ｌeｔ-7基因轉(zhuǎn)錄,該部位稱為。（2）進(jìn)行過(guò)程②時(shí),需用酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。（３）研究發(fā)現(xiàn)，let-７基因能影響RAS的表達(dá),其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析,可從細(xì)胞提取進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let－7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中（RAＳmRNA/RAＳ蛋白）含量減少引起的.１０。（2012天津高考7）生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)—DNＡ復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過(guò)程圖。據(jù)圖回答：(1）過(guò)程①酶作用的部位是鍵，此過(guò)程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNＡ，過(guò)程②酶作用的部位是鍵。（2）①、②兩過(guò)程利用了酶的特性。（３）若將得到的DNＡ片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過(guò)程③的測(cè)序結(jié)果與酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比，以確定選用何種酶。（4)如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNＡ酶聚合，則其識(shí)別、結(jié)合DNA序列位基因的.（5）以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有（多選）Ａ.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rＲＮＡＢ。用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C．通過(guò)分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位D．將抑制成熟基因?qū)敕?，其mRNA與催化成熟酶基因的ｍRＮＡ互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。11。（２0１２江蘇高考３2）圖1表示含有目的基因D的ＤNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列.現(xiàn)有MspI、BamHＩ、ＭｂoI、ＳmaＩ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、Ｇ↓ＧATCC、↓GＡＴC、CCC↓GGＧ。請(qǐng)回答下列問(wèn)題（1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由連接。(2）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段,產(chǎn)生的末端是末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為。（3）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DＮA片段，用限制酶SmaI完全切割，產(chǎn)物中共有種不同長(zhǎng)度的DNA片段.(4）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒,那么應(yīng)選用的限制酶是。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè),部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因Ｄ不能正確表達(dá),其最可能的原因是.答案１?！窘馕觥竣倩蚬こ讨杏校撤N工具，但工具酶只有2種.②工具酶本質(zhì)為蛋白質(zhì),載體本質(zhì)為小型DNA分子,但不一定是環(huán)狀。③標(biāo)記基因的作用--篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞,常見(jiàn)的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因，表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色物質(zhì)等.④受體細(xì)胞中常用植物受精卵或體細(xì)胞（經(jīng)組織培養(yǎng))、動(dòng)物受精卵(一般不用體細(xì)胞）、微生物-—大腸桿菌、酵母菌等。一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活;一定能用哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞,原因是它無(wú)細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)?！敬鸢浮浚?。解析考查基因工程中工具酶的有關(guān)知識(shí)。限制性核酸內(nèi)切酶的化學(xué)成分是蛋白質(zhì)，它的活性受到溫度和pH的影響；限制性核酸內(nèi)切酶的特點(diǎn)是能識(shí)別雙鏈DNA中特定的核苷酸序列，可在特定的位點(diǎn)進(jìn)行切割，但不能識(shí)別和切割RNA;限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物體內(nèi)分離出來(lái)的。答案C解析圖示過(guò)程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程,是基因工程中的核心步驟.構(gòu)建過(guò)程中需要將目的基因完整切割下來(lái)，此時(shí)要用到限制酶ＰsｔⅠ、ＥcoRⅠ。抗卡那霉素基因是標(biāo)記基因,目的是便于鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞.基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等.答案Ｂ4?！窘馕觥窟^(guò)程①中通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄法獲得的目的基因,可用于基因工程,但該目的基因中不存在內(nèi)含子和非編碼序列,因此不能用于比目魚(yú)的基因組測(cè)序;將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成的能表達(dá)的新基因可能不再是抗凍基因;利用農(nóng)桿菌的目的是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞,而不是篩選重組質(zhì)粒；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)受體細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入了目的基因,但不能檢測(cè)目的基因是否完全表達(dá)?！敬鸢浮緽５．C［限制酶可在特定位點(diǎn)對(duì)DNA分子進(jìn)行切割；DNＡ聚合酶在ＤNA分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈；DＮA連接酶可將限制酶切開(kāi)的磷酸二酯鍵連接在一起；解旋酶的作用是將DNA雙鏈解開(kāi)螺旋，為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。］6．ＡCD[基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因；質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體；通常用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體,以獲得相同的黏性末端；受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。D．為培育成抗除草劑的作物新品種,導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7?！敬鸢浮緼【解析】提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴(kuò)增,可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫(kù)中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫(kù)中的信息進(jìn)行篩選對(duì)比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割，B錯(cuò)誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DＮA連接酶，而不是DNＡ聚合酶，C錯(cuò)誤;目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入,而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進(jìn)行感染,而不是大腸桿菌,Ｄ錯(cuò)誤。８。解析將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連成能表達(dá)的新基因，合成的蛋白質(zhì)為新的蛋白質(zhì),不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白，故選項(xiàng)B正確;過(guò)程①是利用反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，由于沒(méi)有非編碼區(qū)和編碼區(qū)中的內(nèi)含子,不能用于比目魚(yú)基因組測(cè)序;用作載體的質(zhì)粒,必須具有標(biāo)記基因才能便于檢測(cè)和篩選;應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄中目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄,但不能檢測(cè)是否成功表達(dá),故選項(xiàng)A、C、D錯(cuò)誤。答案B9.【解析】受體大腸桿菌成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶，說(shuō)明每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含有一個(gè)重組質(zhì)粒，且每個(gè)ada至少指導(dǎo)合成一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子。重組質(zhì)粒的形成需先用限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒形成相同的黏性末端,再在ＤNＡ連接酶的作用下連接起來(lái)，連接起來(lái)的序列中會(huì)含有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。不同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)不同,不是每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)都能插入ａｄa,C項(xiàng)錯(cuò)誤?！敬鸢浮緾10．解析基因工程是在生物體外，通過(guò)對(duì)DNＡ分子進(jìn)行人工“剪切"和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖,使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的基因產(chǎn)物。所以Ｂ為基因工程,而Ａ為動(dòng)物細(xì)胞工程，C為誘變育種,D無(wú)人為因素不屬于基因工程。答案B1１．解析限制性核酸內(nèi)切酶用于提取目的基因和切割載體，煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，不能用限制性核酸內(nèi)切酶切割,A項(xiàng)錯(cuò)誤；DＮA連接酶可以連接具有相同黏性末端的目的基因和載體，B項(xiàng)正確;受體細(xì)胞可以是受精卵和體細(xì)胞,也可以是去除細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，C項(xiàng)正確；目的基因?yàn)榭钩輨┗?所以未成功導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力,篩選時(shí)應(yīng)該用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,Ｄ項(xiàng)正確。答案A12。解析抗除草劑基因?qū)氲接筒说娜旧w后則可以通過(guò)花粉傳入環(huán)境中;轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因的植物可殺死無(wú)抗性昆蟲(chóng),對(duì)昆蟲(chóng)的抗性具有選擇作用,所以會(huì)導(dǎo)致昆蟲(chóng)群體抗性基因頻率增加;轉(zhuǎn)基因技術(shù)打破了生殖隔離,動(dòng)物的生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)入植物后可以表達(dá);來(lái)源于自然界的目的基因?qū)胫参矬w后,可能破壞原有的基因結(jié)構(gòu)，具有不確定性,外源基因也可能通過(guò)花粉傳播，使其他植物成為“超級(jí)植物”等，所以轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在著安全性問(wèn)題。答案A13.解析載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNＡ的細(xì)胞，但由于它和目的基因是相互獨(dú)立的,并不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。答案D二、填空題1。答案：（1）人工胰島素原目的（2）胰島素原信使ＲＮA逆轉(zhuǎn)錄（３)重組胰島素原（４）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞解析：本題是對(duì)基因工程操作程序的考查。操作時(shí)，首先要獲取目的基因,然后讓目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建成重組DＮA分子，再通過(guò)一定方法把重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞使其擴(kuò)增和表達(dá)２.解析本題極易出錯(cuò)的部分有:在第（1）小題中沒(méi)有看清目的基因插入的位置,從而不能確定用限制酶Ⅰ還是Ⅱ來(lái)切割質(zhì)粒還是切割抗蟲(chóng)基因.第（３）小題檢測(cè)抗蟲(chóng)性狀在個(gè)體水平上是否表達(dá)，應(yīng)該讓害蟲(chóng)吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片，觀察害蟲(chóng)的存活情況，這個(gè)地方也有出錯(cuò)的,主要沒(méi)有看清是在哪個(gè)水平上進(jìn)行檢測(cè)的。在切割質(zhì)粒時(shí)應(yīng)遵循一個(gè)原則:不能同時(shí)將兩個(gè)標(biāo)記基因切開(kāi)，至少保留一個(gè),所以只能用酶Ⅱ切割，而從目的基因兩側(cè)堿基序列可知,只能用酶Ⅰ才得到含目的基因的DNA片段.如果導(dǎo)入了重組質(zhì)粒,此時(shí)重組質(zhì)粒中四環(huán)素抗性基因能正常表達(dá)，而氨芐青霉素抗性基因已被破壞，所以涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能夠生長(zhǎng)的話,說(shuō)明導(dǎo)入了重組質(zhì)粒（普通質(zhì)粒)。如果把攜帶一個(gè)抗蟲(chóng)基因的ＤＮA片段看作雜合子,可以認(rèn)為是Aa，自交產(chǎn)生的F1中仍具有抗蟲(chóng)特性的植株占總數(shù)的比例為eq\f(3，4）。把一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成一個(gè)植株的技術(shù)稱為植物組織培養(yǎng).答案(1）ⅡⅠ（2）四環(huán)素(3)讓害蟲(chóng)吞食轉(zhuǎn)基因棉花的葉片,觀察害蟲(chóng)的存活情況，以確定其是否具有抗蟲(chóng)性狀eｑ\f(３,4）（4）植物組織培養(yǎng)發(fā)育成完整個(gè)體的全部遺傳物質(zhì)解析(１)cＤNA來(lái)自mＲNA的逆轉(zhuǎn)錄或根據(jù)mRNＡ的堿基序列人工合成,cDNＡ文庫(kù)小于基因組文庫(kù)。（2)構(gòu)建基因表達(dá)載體用到限制酶和ＤNA連接酶。將目的基因?qū)氪竽c桿菌須用Ca2＋處理受體細(xì)胞;導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞用顯微注射法.(3）過(guò)程⑧的關(guān)鍵技術(shù)是胚胎移植,過(guò)程⑨的關(guān)鍵技術(shù)是細(xì)胞核移植。(4)基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即④。3．解析本題綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和PCＲ技術(shù),意在考查考生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解。胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理可以將動(dòng)物組織分解成單個(gè)細(xì)胞；基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因等，其中啟動(dòng)子和終止子有利于目的基因的表達(dá)，標(biāo)記基因有利于目的基因的檢測(cè);PＣR技術(shù)中需要原料(4種脫氧核苷酸)、緩沖液、模板DNＡ、引物和耐熱DＮA聚合酶等；在生物反應(yīng)器中放入多孔的中空薄壁小玻璃珠的目的：一方面有利于細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng),避免接觸抑制;另一方面有利于氣體交換.答案(１)胰蛋白（或膠原蛋白)（2)啟動(dòng)子終止子(3)對(duì)干擾素基因特異的DNA引物對(duì)ＴaqDＮＡ聚合酶（4）擴(kuò)大細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的附著面積４.解析(1)由圖示可知：需用HｉndⅢ和BamＨⅠ限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因，因酶切后ｔetR四環(huán)素抗性基因結(jié)構(gòu)被破壞而amｐR氨芐青霉素抗性基因結(jié)構(gòu)完好,故用含氨芐青霉素的選擇培養(yǎng)基可篩選含有重組載體的大腸桿菌。（2)啟動(dòng)子是一段特殊的ＤNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn),可調(diào)控基因的特異性表達(dá).（3）過(guò)程①表示把重組載體導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，當(dāng)受體細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，常采用顯微注射法.(４)過(guò)程②表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宮的過(guò)程,屬于胚胎移植技術(shù)。（5)經(jīng)過(guò)程②得到新個(gè)體是細(xì)胞全能性的體現(xiàn)。（６)人乳鐵蛋白基因是否成功表達(dá)，關(guān)鍵看是否有其表達(dá)產(chǎn)物即人乳鐵蛋白，可用抗原-抗體雜交法檢測(cè)該蛋白是否存在.答案(1)HindⅢ和BamHⅠ氨芐青霉素(2）A(3）C（4)胚胎移植技術(shù)（5)全能（6）C5。解析本題主要考查基因工程相關(guān)知識(shí).（1）目的基因的獲取方法有直接分離和化學(xué)方法人工合成兩種；（２）仔細(xì)對(duì)比正常人與患者的基因序列可知是CＧ堿基對(duì)變?yōu)榱薚A堿基對(duì)，這種變化屬于基因突變；(3)正常人Ｐ53基因有兩個(gè)限制酶Ｅ的識(shí)別序列，完全切割后可產(chǎn)生三個(gè)片段,患者Ｐ53基因中有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列發(fā)生突變,且突變點(diǎn)位于識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)，這樣患者就只有一個(gè)限制酶E的識(shí)別序列，切割后產(chǎn)生兩個(gè)片段，分別為290＋1７0＝46０對(duì)堿基，2２0對(duì)堿基;(４）正常人的P53基因經(jīng)限制酶E完全切割后產(chǎn)生三個(gè)片段,２９０對(duì)堿基、170對(duì)堿基和2２0對(duì)堿基，患者產(chǎn)生兩個(gè)片段４6０對(duì)堿基和220對(duì)堿基,則該人的基因型應(yīng)為P+P－。答案（1)從細(xì)胞中分離通過(guò)化學(xué)方法人工合成(2）見(jiàn)下圖基因堿基對(duì)的替換（基因突變）（3)346０220（4)P＋P－解析本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)。（１）從圖可看出，只有PstⅠ、EcoRⅠ兩種酶能保持抗病基因結(jié)構(gòu)的完整性,所以構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí),應(yīng)選用限制酶PsｔⅠ、EｃoRⅠ兩種酶，對(duì)抗病基因的DNＡ和質(zhì)粒進(jìn)行切割.（2)卡那霉素能抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng),欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞,應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有抗卡那霉素基因,以此作為標(biāo)記基因。（3)香蕉組織細(xì)胞具有全能性，因此,可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株.圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的脫分化和再分化。答案（１)PstⅠ、EcoＲⅠ含抗病基因的DNA、質(zhì)粒(2）抗卡那霉素基因(3）全能性脫分化、再分化6。【答案】（1)黏性末端平末端（2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EｃoRⅠ切割產(chǎn)生的相同（3）E·coｌｉT(mén)4（４)ｍRNA(RNA)cDＮA(DNA)ＰCR（５）噬菌體動(dòng)植物病毒等（６)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源ＤNA)的能力極弱【解析】（１)當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DＮA的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí),產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí),產(chǎn)生的則是平末端.（２)為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端,它們必須要能識(shí)別相同的核苷酸序列，并且使每條鏈中相同的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi).（3）DNA連接酶，根據(jù)酶的來(lái)源不同,可以將這些酶分為兩類(lèi):一類(lèi)是從大腸桿菌中分離得到的，稱為E·ｃolｉDNA連接酶；另一類(lèi)是從Ｔ４噬菌體中分離出來(lái)的，稱為T(mén)4ＤNＡ連接酶。(４）反轉(zhuǎn)錄是以RＮA為模版來(lái)合成ＤNＡ的過(guò)程。可以在體外短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DＮA的技術(shù)叫PCＲ(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）(5)基因工程中除質(zhì)粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等。（6）大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，只能通過(guò)Ca２+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。７．【答案】(１０分)（1)限制性核酸內(nèi)切酶（或限制）啟動(dòng)子(2)胰蛋白（3）RＮAＲAS蛋白【解析】(1）過(guò)程=1\＊ＧB3①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建,在該過(guò)程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入（限制性核酸內(nèi)切酶,簡(jiǎn)稱限制酶，寫(xiě)其他的不得分)；啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNＡ聚合酶結(jié)合和識(shí)別的位點(diǎn)，ＲNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn),可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。(2）過(guò)程=2\＊GB3②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(3)判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄,可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行，從細(xì)胞中提取mRNＡ和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈ＤNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的lｅt－7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng),引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后,肺癌細(xì)胞受到抑制，說(shuō)明RAS基因表達(dá)減弱,導(dǎo)致細(xì)胞中的ＲAS蛋白質(zhì)含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制.8【答案】(１）磷酸二酯鍵,肽鍵（２）專一（3）限制性核酸內(nèi)切酶(4）啟動(dòng)子（５)ACD【解析】(1）DNA酶作用的部位是DNA的磷酸二酯鍵，蛋白酶作用的部位是肽鍵。(2）①②過(guò)程利用了各種酶催化一種或一類(lèi)化學(xué)反應(yīng)的特性，即專一性。(3）DＮA要構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割，再與質(zhì)粒重組.（4)RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合在基因的啟動(dòng)子上,驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。（5)蛋白酶能特異性的酶解蛋白質(zhì)，分子雜交手段也是利用各物質(zhì)分子結(jié)合的特異性，抑制成熟基因轉(zhuǎn)錄出的mＲＮＡ與催化成熟酶基因的mRＮA堿基互補(bǔ)結(jié)合,也具有特異性，光和色素易溶于有機(jī)溶劑，與酒精并不是特異性的溶解，所以選ＡCD。９.【答案】(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖（2）平537bp、790bp、661bｐ（3）4（4)BamＨ=１＼*RＯMAＮI抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向鏈接【解析】(１）ＤＮA單鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間通過(guò)“脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖”連接。(２)Ｓma=1＼＊ＲOＭANI識(shí)別的序列為GGGＣＣＣ，切割后會(huì)產(chǎn)生平末端；圖1所示的DNA分子中含有兩個(gè)Sma=１\*RＯMAＮI的識(shí)別位點(diǎn),第一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在左端534bｐ序列向右三個(gè)堿基對(duì)的位置;第二個(gè)識(shí)別位點(diǎn)在右端658bｐ序列向左三個(gè)堿基對(duì)的位置,從這兩個(gè)位點(diǎn)切割后產(chǎn)生的DNA片段長(zhǎng)度分別為534+3,７96－3－3,658+3，即得到的DNA片段長(zhǎng)度分別為5３7bｐ、７90bp和661bp。（3)在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因ｄ，基因D的序列中含有兩個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過(guò)Ｓｍa=1\*ROMANＩ完全切割會(huì)產(chǎn)生5３７bp、790ｂp和66１bp三種不同長(zhǎng)度的片段，基因d的序列中含有一個(gè)識(shí)別位點(diǎn),經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生1３27bp和661bp兩種長(zhǎng)度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNＡ片段經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生4種不同長(zhǎng)度的片段。（4)能夠獲取目的基因并切開(kāi)質(zhì)粒的限制酶有識(shí)別序列為ＧＧAＴＣC的BamH=1\＊ROMANＩ和識(shí)別序列為GATＣ的Ｍbo=1\＊ROＭＡＮI,若使用Mbo＝1\*ＲＯMANI會(huì)同時(shí)破壞質(zhì)粒中的抗生素Ａ抗性基因和抗生素B抗性基因,所以要用BａmH=1\＊RＯMANＩ來(lái)切割目的基因和質(zhì)粒,切割后保留了完整的抗生素Ｂ抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌。因?yàn)槟康幕蚝瓦\(yùn)載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個(gè)末端都能進(jìn)行互補(bǔ),可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運(yùn)載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)。基因工程基本過(guò)程基因工程（geneticｅngiｎeering）,也叫基因操作、遺傳工程，或重組體DNA技術(shù)。它是一項(xiàng)將生物的某個(gè)基因通過(guò)基因載體運(yùn)送到另一種生物的活性細(xì)胞中，并使之無(wú)性繁殖(稱之為＂克隆”)和行使正常功能(稱之為＂表達(dá)”）,從而創(chuàng)造生物新品種或新物種的遺傳學(xué)技術(shù)。一般說(shuō)來(lái),基因工程是專指用生物化學(xué)的方法，在體外將各種來(lái)源的遺傳物質(zhì)（同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的ＤNA片段）與載體系統(tǒng)（病毒、細(xì)菌質(zhì)?；蚴删w）的DNA結(jié)合成一個(gè)復(fù)制子。這樣形成的雜合分子可以在復(fù)制子所在的宿主生物或細(xì)胞中復(fù)制,繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、生長(zhǎng)和篩選轉(zhuǎn)化子，無(wú)性繁殖使之成為克隆。然后直接利用轉(zhuǎn)化子,或者將克隆的分子自轉(zhuǎn)化子分離后再導(dǎo)入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)體系，使重組基因在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生特定的基因產(chǎn)物.常用的工具酶限制性內(nèi)切酶—主要用于DＮＡ分子的特異切割ＤNA甲基化酶-用于DNＡ分子的甲基化核酸連接酶-用于DNＡ和RNＡ的連接核酸聚合酶—用于DＮA和RNＡ的合成核酸酶—用于DNA和RNA的非特異性切割核酸末端修飾酶-用于DNA和RNA的末端修飾其它酶類(lèi)——用于生物細(xì)胞的破壁、轉(zhuǎn)化、核酸純化、檢測(cè)等。主要過(guò)程有為四步：獲得目的基因有多種方法可獲得目得基因構(gòu)建cDＮＡ文庫(kù)分離目的基因過(guò)程：從真核細(xì)胞中提取mRNＡ，以其為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cＤNＡ的第一條鏈。以第一條鏈為模板,以反轉(zhuǎn)錄酶或DＮA聚合酶Ｉ作用下合成cDNA的第二條鏈。在甲基化酶作用下使cDNA甲基化。接頭或銜接子連接。凝膠過(guò)濾分離cDNA。通過(guò)核酸探針?lè)ɑ蛎庖叻磻?yīng)法從cＤNA文庫(kù)中分離特異cDNＡ克隆。2.人工化學(xué)合成法適于已知的核苷酸序列且校小的DNＡ片斷合成,常用方法有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亞磷酸三酯法、固相合成法、自動(dòng)化合成法等。過(guò)程：先用以上方法合成基因ＤＮA不同部位的兩條鏈的寡核苷短片段,再退火成為兩端形成粘性末端的DNＡ雙鏈片段。然后將這些DNA片段按正確的次序進(jìn)行退火連接起來(lái)形較長(zhǎng)的DＮA片段,再用連接酶連接成完整的基因.3.利用PCR技術(shù)直接擴(kuò)增目的基因PCＲ（PolｙmerａseＣｈaiｎReaｃtiｏn）法，又稱為聚合酶鏈反應(yīng)或PCR擴(kuò)增技術(shù),已知待擴(kuò)增目的基因或DNＡ片段兩側(cè)的序列，根據(jù)該序列化學(xué)合成聚合反應(yīng)必需的雙引物，類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,用PＣR法進(jìn)行擴(kuò)增，特異地合成目的cDNA鏈，用于重組、克隆。二．載體的選擇與制備1．載體的選擇（以質(zhì)粒為例）⑴載體必須是復(fù)制子。⑵具有合適的篩選標(biāo)記,便于重組子的篩選。⑶具備多克隆位點(diǎn)(MCS），便于外源基因插入。⑷自身分子量較小，拷貝數(shù)高。⑸在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性高。應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，能為大腸桿菌的RNＡ聚合酶所識(shí)別應(yīng)具有阻遏子，使啟動(dòng)子受到控制,只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子,以便使RNＡ聚合酶集中力量轉(zhuǎn)錄克隆的外源基因，而不轉(zhuǎn)錄其他無(wú)關(guān)的基因，且所產(chǎn)生的mRNＡ較為穩(wěn)定。所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號(hào)。制備有多種分離質(zhì)粒的方法，如堿裂解法、煮沸裂解法、層析柱過(guò)濾法等.目前一般使用堿變性法制備質(zhì)粒DNA。這個(gè)方法主要包括培養(yǎng)收集細(xì)菌菌體，裂解細(xì)胞，將質(zhì)粒DNA與染色體DＮＡ分開(kāi)及除去蛋白質(zhì)和RNA。在pH值12．0～1２．5范圍內(nèi)時(shí),線性的ＤNA會(huì)被變性而共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA卻不會(huì)被變性。通過(guò)冷卻或恢復(fù)中性pH值使之復(fù)性,線性染色體形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),而cccDNA可以準(zhǔn)確迅速?gòu)?fù)性，通過(guò)離心去除線性染色體，獲得含有ｃccDNA的上清液，最后用乙醇沉淀，獲得質(zhì)粒ＤNA.三。構(gòu)建基因表達(dá)載體用一定的限制酶切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出粘性末端。用同一種限制酶切斷目的基因，使其產(chǎn)生相同的黏性末端.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處，再加入適量ＤNA連接酶，形成了一個(gè)重組DＮA分子(重組質(zhì)粒）.四．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞－農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞－顯微注射法將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞(以大腸桿菌為例）（1）用Cａ2+處理細(xì)胞,以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性,使細(xì)胞處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞.（2）將重組表達(dá)載體DNＡ分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DＮＡ分子，完成轉(zhuǎn)化過(guò)程.（3)目的基因在受體細(xì)胞內(nèi),隨其繁殖而復(fù)制,由于細(xì)菌繁殖的速度非?？?在很短的時(shí)間內(nèi)就能獲得大量的目的基因.五.目的基因的檢測(cè)與鑒定1.要檢測(cè)目的基因是否插入轉(zhuǎn)基因生物染色體的DＮA上檢測(cè)方法：采用ＤNA分子雜交技術(shù)2．檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄了mRＮＡ檢測(cè)方法：同樣用分子雜交技術(shù)DNA與RNA雜交3.檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測(cè)方法:提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交,若有雜交帶，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品.基因工程制藥實(shí)例及意義抗生素類(lèi)傳統(tǒng)的抗生素生產(chǎn),主要利用化學(xué)合成或微生物發(fā)酵來(lái)獲得，其生產(chǎn)過(guò)程中菌種的表達(dá)水平比較低,生產(chǎn)成本比較高，而且在使用過(guò)程中容易產(chǎn)生耐藥菌群.而利用基因工程技術(shù)可以對(duì)生產(chǎn)菌種進(jìn)行基因改造,得到表達(dá)水平高、產(chǎn)品目的性強(qiáng)的菌株，如大腸桿菌生產(chǎn)青霉素酞胺酶。德國(guó)一個(gè)科研小組對(duì)生產(chǎn)半合成青霉素的材料６AＰA．用基因工程來(lái)增強(qiáng)大腸桿菌的青霉素酰胺酶活性。將大腸桿菌的基因PＢR3２2的質(zhì)粒克隆化所形成的菌株,其酶活力比原株提高５０倍.從而提高6ＡPA生產(chǎn)能力.我國(guó)王以光利用基因重組技術(shù)對(duì)螺旋霉素產(chǎn)生菌進(jìn)行改造，增強(qiáng)了丙?；D(zhuǎn)移酶的基因在螺旋霉素產(chǎn)生菌中的表達(dá)，并提高了丙酰螺旋霉素的產(chǎn)量.１。2基因工程的基本操作程序【課標(biāo)要求】1.簡(jiǎn)述基因工程基本操作程序的四個(gè)步驟2．嘗試設(shè)計(jì)某一轉(zhuǎn)基因生物的研制過(guò)程。【本節(jié)重難點(diǎn)】重點(diǎn)：基因工程基本操作程序的四個(gè)步驟難點(diǎn)：（1）從基因文庫(kù)中獲取目的基因(2)利用PCＲ技術(shù)擴(kuò)增目的基因【學(xué)習(xí)過(guò)程】一、基因工程的基本操作程序簡(jiǎn)述①目的基因的；②的構(gòu)建;③將目的基因；④目的基因的。二、基因工程的基本操作程序(一)目的基因的獲取1．目的基因:主要是指的基因,也可以是一些具有作用的因子。2.原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)（１)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)（2）真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)3．目的基因的獲取目的基因可以從中分離出來(lái)，也可以用合成。常用的方法有以下幾種：（1）從基因文庫(kù)中獲取目的基因①基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)（如ｃDＮＡ文庫(kù)）基因組文庫(kù)cDNA文庫(kù)文庫(kù)類(lèi)型cDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)文庫(kù)大小基因中啟動(dòng)子基因中內(nèi)含子基因多少物種間的基因交流②從基因文庫(kù)中得到目的基因，可以根據(jù)一些信息，如根據(jù)基因的、基因的、基因在染色體上的、基因的,以及基因的等特性。（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因①PCR是＿_(dá)_________＿_(dá)__＿_(dá)_＿_(dá)_______＿_(dá)_＿_(dá)_＿＿＿技術(shù)，是的縮寫(xiě)。②原理：______＿_(dá)_＿＿_(dá)____＿_(dá)_＿。,③前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成__＿_(dá)_＿＿_(dá)_.④條件:DNＡ模板、。⑤擴(kuò)增過(guò)程：a．變性(℃):目的基因DＮA受熱變性后接連為單鏈b.退火（℃）：與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合c．延伸（℃):在的作用下進(jìn)行延伸Taｑ酶的特點(diǎn)是。PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較：PCＲ技術(shù)ＤNＡ復(fù)制相同點(diǎn)原理原料條件不同點(diǎn)解旋方式場(chǎng)所酶結(jié)果（3)化學(xué)法直接合成適用于基因比較,核苷酸序列又。(二）——基因工程的核心１。基因表達(dá)載體的構(gòu)建，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中能，并且可以,同時(shí)，使目的基因能夠.２．基因表達(dá)載體＝+++（1）啟動(dòng)子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的,位于基因的,它是識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。（2)終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的，位于基因的，相當(dāng)于一盞紅色信號(hào)燈，使在所需要的地方停止下來(lái)。(3）標(biāo)記基因：作用是為了，從而將含有目的基因的細(xì)胞出來(lái),如基因。３．構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程:用（同、不同）種限制酶去切目的基因與運(yùn)載體，再用使其連接，形成重組DNA分子。(三）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因受體細(xì)胞，并且在受體細(xì)胞內(nèi)和的過(guò)程，稱為轉(zhuǎn)化.(1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法②法③法（２)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞①技術(shù)是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的最有效方法.②操作程序：將含有目的基因的表達(dá)載體→→獲得→顯微注射→胚胎→胚胎→發(fā)育成具有新性狀的動(dòng)物（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞①原核生物作為基因工程受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：。②大腸桿菌細(xì)胞最常用的方法:a.用處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為細(xì)胞；b．將分子溶于緩沖液與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收ＤNＡ分子.(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定（1）檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的上是否插入了目的基因檢測(cè)方法:技術(shù)，即將轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNＡ提取出來(lái)，在含有目的基因的DNＡ片段上用放射性同位素等作標(biāo)記,以此作為，使探針與基因組ＤNＡ雜交，如果出現(xiàn)，就表明目的基因已插入染色體DNA中。(2）檢測(cè)目的基因是否檢測(cè)方法:技術(shù)（3）檢測(cè)目的基因是否檢測(cè)方法:，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行檢測(cè)，若有出現(xiàn),表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。(４）進(jìn)行水平的鑒定【鞏固練習(xí)】1.下列正確表示基因操作“四部曲”的是()Ａ.提取目的基因→目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→目的基因的檢測(cè)和鑒定B．目的基因的檢測(cè)和鑒定→提取目的基因→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞C．提取目的基因→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)和鑒定D．基因表達(dá)載體的構(gòu)建→提取目的基因→目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)和鑒定２。下列不屬于獲得目的基因的方法的是（）A。利用ＤNＡ連接酶復(fù)制目的基因B．利用DＮＡ聚合酶復(fù)制目的基因C．從基因文庫(kù)中獲取目的基因D。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因3。PCR技術(shù)擴(kuò)增DNＡ，需要的條件是(）①目的基因②ＡTP③四種脫氧核苷酸④ＤNA聚合酶等⑤mRＮA⑥核糖體A。①②③④B．②③④⑤Ｃ。①③④⑤Ｄ．①②③⑥4.根據(jù)ｍＲNA的信息推出獲取目的基因的方法是（）Ａ．用DNA探針測(cè)出目的基因Ｂ．用mＲNA探針測(cè)出目的基因C。用mRＮA反轉(zhuǎn)錄形成目的基因D．用PCR技術(shù)擴(kuò)增mRＮA５。在已知某小片段基因堿基序列的情況下，獲得該基因的最佳方法是(）A．用mRNＡ為模板逆轉(zhuǎn)錄合成ＤＮＡＢ.以4種脫氧核苷酸為原料人工合成Ｃ。由蛋白質(zhì)的氨基酸序列推測(cè)mRNAＤ.將供體DNＡ片段轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中，再進(jìn)一步篩選６。下列不屬于目的基因與運(yùn)載體結(jié)合過(guò)程的是（)A.用一定的限制酶切割質(zhì)粒露出黏性末端B．用同種限制酶切割目的基因露出黏性末端C．將切下的目的基因的片段插入到質(zhì)粒切口處D.將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增7.下列哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成成分（)A．啟動(dòng)子B。終止密碼子C．標(biāo)記基因Ｄ．復(fù)制原點(diǎn)8。在基因表達(dá)載體的構(gòu)建中，所需要的酶是()①限制酶②DNＡ連接酶③解旋酶④DNA聚合酶A.①②B．①②③Ｃ．①②④D．①②③④９.植物學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí),對(duì)目的基因作適當(dāng)修飾，使目的基因在棉花植株的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育期都表達(dá),以防止害蟲(chóng)侵害,這種對(duì)目的基因所作的修飾發(fā)生在(）A.終止子Ｂ.引物C．標(biāo)記基因Ｄ.啟動(dòng)子10．下列哪項(xiàng)不是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（）Ａ?；驑尫˙。顯微注射法Ｃ.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法D．花粉管通道法11．在基因工程操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的是（）A．人工合成目的基因B.目的基因與載體結(jié)合C．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞Ｄ。目的基因的檢測(cè)與鑒定12．將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞之前，要用Cａ2+處理細(xì)胞，處理過(guò)的細(xì)胞叫（）A．感受態(tài)細(xì)胞B。敏感性細(xì)胞C。吸收性細(xì)胞Ｄ．接受細(xì)胞13．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)移目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞,目的基因的最終位置是（）A．Ｔｉ質(zhì)粒上B．受體細(xì)胞染色體上C.裸露細(xì)胞核中D。存在細(xì)胞質(zhì)中14。目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性,只有通過(guò)鑒定和檢測(cè)才能知道。下列屬于目的基因檢測(cè)和鑒定的是(）①檢測(cè)受體細(xì)胞是否有目的基因

②檢測(cè)受體細(xì)胞是否有致病基因

③檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄mRＮA

④檢測(cè)目的基因是否翻譯蛋白質(zhì)

A．①②③

B．②③④

C．①③④

Ｄ．①②④15.要檢測(cè)目的基因是否成功地插入了受體DNA中,需要用基因探針，基因探針是指()A。用于檢測(cè)疾病的醫(yī)療器械B．用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的ＤNA分子C．合成β－球蛋白的DＮAD．合成苯丙羥化酶的DNA片段16．(多選)用基因工程技術(shù)可使大腸桿菌合成人的蛋白質(zhì)。下列敘述正確的是（）A．常用相同的限制性核酸內(nèi)切酶處理目的基因和質(zhì)粒B．ＤＮA連接酶和RNA聚合酶是構(gòu)建重組質(zhì)粒必須的工具酶C?？捎煤股氐呐囵B(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒D.導(dǎo)入大腸桿菌的目的基因不一定能成功表達(dá)17．（多選)我國(guó)科學(xué)家運(yùn)用基因工程技術(shù)將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因?qū)朊藁?xì)胞并成功表達(dá)，培育出了抗蟲(chóng)棉。下列敘述正確的是(）A.基因非編碼區(qū)對(duì)于抗蟲(chóng)基因在棉花細(xì)胞中的表達(dá)不可缺少B.重組DＮA分子中增加一個(gè)堿基對(duì),可能導(dǎo)致毒蛋白的毒性喪失Ｃ．抗蟲(chóng)棉的抗蟲(chóng)基因可通過(guò)花粉傳遞至近緣作物，從而造成基因污染D．轉(zhuǎn)基因棉花是否具有抗蟲(chóng)特性是可以通過(guò)檢測(cè)棉花對(duì)抗生素抗性來(lái)確定的18．（多選）科學(xué)家通過(guò)基因工程的方法，能使馬鈴薯塊莖內(nèi)含有人奶主要蛋白。以下有關(guān)該基因工程的敘述，正確的是(）A。采用反轉(zhuǎn)錄的方法得到目的基因有內(nèi)含子B．基因非編碼區(qū)對(duì)于目的基因在塊莖中表達(dá)是不可缺少的C。馬鈴薯的葉肉細(xì)胞可作為受體細(xì)胞D．用同一種限制性內(nèi)切酶,分別處理質(zhì)粒和含目的基因的DNA,可產(chǎn)生黏性末端而形成重組DNA分子19.資料顯示，近十年來(lái)，ＰＣR技術(shù)（DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù))成為分子生物實(shí)驗(yàn)的一種常規(guī)手段,其原理是利用DNA半保留復(fù)制的特性，在試管中進(jìn)行DＮＡ的人工復(fù)制(如下圖),在很短的時(shí)間內(nèi)，將ＤNA擴(kuò)增幾百萬(wàn)倍甚至幾十億倍,使分子生物實(shí)驗(yàn)所需的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。請(qǐng)據(jù)圖回答：（1）加熱至9４℃的目的是使DNA樣品中的_______鍵斷裂，該過(guò)程在生物體細(xì)胞內(nèi)是通過(guò)＿_(dá)____＿_(dá)__酶的作用完成的。分析可知新合成DNA分子中A=T，C=G，這說(shuō)明ＤＮＡ分子的合成遵循___＿_(dá)_______________＿_(dá)(2)與細(xì)胞內(nèi)DNＡ復(fù)制相比，PCR技術(shù)所需要的ＤNA聚合酶的最適溫度比較_＿＿＿_(dá)_____＿_(dá)(高、低)。（3)通過(guò)ＰCＲ技術(shù)使DNA分子大量復(fù)制時(shí),若將一個(gè)用1５N標(biāo)記的模板DＮA分子(第一代)放入試管中，以14Ｎ標(biāo)記的脫氧核苷酸為原料，連續(xù)復(fù)制到第五代時(shí),含1５N標(biāo)記的DNA分子單鏈數(shù)占全部DNA總單鏈數(shù)的比例為。（4）PCR技術(shù)不僅為遺傳病的診斷帶來(lái)了便利，而且改進(jìn)了檢測(cè)細(xì)菌和病毒的方法.若要檢測(cè)一個(gè)人是否感染了艾滋病病毒，你認(rèn)為可以用PＣR擴(kuò)增血液中的（）A。白細(xì)胞DＮAB.病毒蛋白質(zhì)C．血漿抗體D.病毒核酸20.下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，請(qǐng)回答下列問(wèn)題:（1)一個(gè)圖１所示的質(zhì)粒經(jīng)ＳmaⅠ切割前后，分別含有個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SｍaⅠ酶切位點(diǎn)越多，其熱穩(wěn)定性越.（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SｍaⅠ切割，原因是。（4）與只使用EcoＲI相比較,使用BamＨⅠ和ＨindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止。（５）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入酶。(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了。(7）為了從ｃDNA文庫(kù)中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體,然后在的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。1．2基因工程的基本操作程序答案ＣAAＣBＤBＡDBＣABCBAＣDＡBCＢCＤ19(1）氫解旋堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（2）高(３）1／1６（4）D20（１）0、2（2）高（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源ＤNA中的目的基因（4）質(zhì)粒和含目的基因的外源DＮA片段自身環(huán)化(５）ＤNA連接（6)鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞（7）蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)基因工程的基本操作程序習(xí)題一、選擇題（每小題3分，共３９分）１.下列關(guān)于基因工程的敘述,錯(cuò)誤的是(）A.目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)物、植物或微生物Ｂ.限制性核酸內(nèi)切酶和DNＡ連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶Ｃ．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)2.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述,錯(cuò)誤的是（).A.一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列B．限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度影響Ｃ．限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RＮAＤ．限制性核酸內(nèi)切酶可從原核生物中提取3．如圖是利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植物，生產(chǎn)可食用疫苗的部分過(guò)程示意圖，其中PsｔⅠ、SmａⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ為四種限制性核酸內(nèi)切酶。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(）。A．圖示過(guò)程是基因工程的核心步驟B．表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)需要用到限制酶SmａⅠＣ?？箍敲顾鼗虻拇嬖谟欣趯⒑锌乖虻募?xì)胞篩選出來(lái)D．除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動(dòng)子和終止子等結(jié)構(gòu)４.下圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是（)A．過(guò)程①獲取的目的基因,可用于基因工程和比目魚(yú)基因組測(cè)序B．將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因,不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白C。過(guò)程②構(gòu)成的重組質(zhì)粒缺乏標(biāo)記基因,需要轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌才能進(jìn)行篩選D．應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá)5．下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制酶、ＤNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是（）A。①②③④B.①②④③C．①④②③D。①④③②6．下列關(guān)于基因工程的敘述，不正確的是(多選)（)A．基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)槟康幕颍?。?xì)菌質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體C．通常用一種限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA,用另一種處理運(yùn)載體DNAD。為培育成抗除草劑的作物新品種,導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7．天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花,這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B,而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因Ｂ。現(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰,下列操作正確的是（）A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRＮA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA,再擴(kuò)增基因ＢＢ。利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因BC。利用DNA聚合酶將基因Ｂ與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D.將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞9。將ada(腺苷酸脫氨酶基因）通過(guò)質(zhì)粒pET28ｂ導(dǎo)人大腸桿菌并成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯(cuò)誤的是(）A.每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含一個(gè)重組質(zhì)粒B．每個(gè)重組質(zhì)粒至少含一個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)C。每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)至少插入一個(gè)adaD．每個(gè)插入的ada至少表達(dá)一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子1０．下列敘述符合基因工程概念的是（)。Ａ。B淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，雜交瘤細(xì)胞中含有B淋巴細(xì)胞中的抗體基因B．將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌,獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株C．用紫外線照射青霉菌，使其DNＡ發(fā)生改變，通過(guò)篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株D。自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DＮＡ整合到細(xì)菌DNA上11。在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草過(guò)程中,下列操作錯(cuò)誤的是（）。A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸B．用DＮA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體C．將重組DＮA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體D．用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞13．下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是(）。A．目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物B．限制性核酸內(nèi)切酶和ＤNＡ連接酶是兩類(lèi)常用的工具酶Ｃ．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DＮＡ的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)二、填空題（共５1分)1?？茖W(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的ＤNA分子重組,并且在大腸桿菌體內(nèi)表達(dá)成功。請(qǐng)根據(jù)圖回答問(wèn)題：(１)此圖表示的是采取合成基因的方法獲取基因的過(guò)程。(２）圖中①DNA是以為模板,形成單鏈DNＡ，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的基因。(3）圖中③代表DNＡ，含基因。（4）圖中④表示.2.下圖表示利用基因工程培育抗蟲(chóng)棉的過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答下列有關(guān)問(wèn)題.（１)若限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—,限制酶Ⅱ識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓ＧAＴＣC—，那么在①過(guò)程中,應(yīng)用限制酶_＿_(dá)_＿_(dá)＿_(dá)切割質(zhì)粒，用限制酶__＿_(dá)_＿＿_(dá)切割抗蟲(chóng)基因.（2)將通過(guò)②過(guò)程得到的大腸桿菌涂布在含有＿_(dá)＿_(dá)＿_(dá)＿＿的培養(yǎng)基上,若能夠生長(zhǎng)說(shuō)明已導(dǎo)入了普通質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒，反之則說(shuō)明沒(méi)有導(dǎo)入.（3)要確定抗蟲(chóng)基因?qū)牒?是否能穩(wěn)定遺傳并表達(dá)，需進(jìn)行檢測(cè)和鑒定工作，則在個(gè)體水平上的鑒定過(guò)程可簡(jiǎn)述為：________。經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個(gè)攜帶抗蟲(chóng)基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子.理論上，該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F1代中，仍具有抗蟲(chóng)特性的植株占總數(shù)的____＿_(dá)＿_(dá).（４)⑤過(guò)程所用的現(xiàn)代生物技術(shù)稱為_(kāi)__＿_(dá)_＿＿，從遺傳學(xué)角度來(lái)看，據(jù)細(xì)胞通過(guò)⑤過(guò)程,能形成棉植株的根本原因是細(xì)胞具有___＿_(dá)___＿_(dá)__＿_(dá)_＿_(dá)___。3。干擾素是病毒侵入人體后由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫活性物質(zhì)，它具有廣譜抗病毒的作用。利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)干擾素的流程如下：（1）過(guò)程①產(chǎn)生的物質(zhì)A是_____＿,ｃＤNＡ文庫(kù)_____＿(大于／小于)人的基因組文庫(kù)。（２)過(guò)程④用到的工具酶是______________，過(guò)程⑤需先用＿_(dá)＿_(dá)_＿＿_(dá)___＿_(dá)____＿_(dá)_處理受體細(xì)胞，過(guò)程⑥通常采用_＿＿＿_(dá)___技術(shù)。(3）過(guò)程⑧和⑨的關(guān)鍵技術(shù)分別是___＿_(dá)___、_＿_(dá)____＿。（4)基因工程的核心步驟是圖中的__＿_(dá)__＿_(dá)_＿_(dá)_＿＿＿_(dá)（填標(biāo)號(hào))。4.(2011·安徽理綜31)家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。(1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前,需用___＿_(dá)_＿_(dá)酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞.（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cＤNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的__＿_(dá)__＿_(dá)和_＿_(dá)＿＿＿＿＿之間。(３)采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液(含Mg2＋）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板ＤNA、＿_(dá)_＿＿_(dá)__和＿_(dá)＿_(dá)__＿＿。(4）利用生物反應(yīng)器培養(yǎng)家蠶細(xì)胞時(shí),貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生接觸抑制。通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應(yīng)器中，這樣可以________，增加培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量，也有利于空氣交換。5．（２０10·天津理綜，７Ⅰ)下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tｅtR表示四環(huán)素抗性基因，aｍｐR表示氨芐青霉素抗性基因,BamＨⅠ、HindⅢ、SmａⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答問(wèn)題。（1)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用＿_(dá)_＿＿_(dá)＿_(dá)＿_(dá)＿_(dá)____限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含_____＿_(dá)_的培養(yǎng)基上進(jìn)行。(2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是____＿_(dá)__(填字母代號(hào)）.A．啟動(dòng)子B.tｅｔRC．復(fù)制原點(diǎn)D．a(chǎn)ｍｐR（３)過(guò)程①可采用的操作方法是____＿_(dá)__(填字母代號(hào)）。A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化B。大腸桿菌轉(zhuǎn)化C.顯微注射D．細(xì)胞融合（4)過(guò)程②采用的生物技術(shù)是__________＿＿_(dá)___。(5）對(duì)早期胚胎進(jìn)行切割，經(jīng)過(guò)程②可獲得多個(gè)新個(gè)體.這利用了細(xì)胞的____＿_(dá)＿_(dá)性。(６)為檢測(cè)人乳鐵蛋白是否成功表達(dá)，可采用___＿_(dá)___（填字母代號(hào)）技術(shù)。Ａ．核酸分子雜交Ｂ．基因序列分析C．抗原-抗體雜交Ｄ．PＣR６。(2０0９·上海卷)人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的P５3基因，生物技術(shù)可對(duì)此類(lèi)基因的變化進(jìn)行檢測(cè)。（1)目的基因的獲取方法通常包括_＿_(dá)＿_(dá)___和＿_(dá)＿_(dá)＿＿_(dá)＿。（２)上圖表示從正常人和患者體內(nèi)獲取的P５３基因的部分區(qū)域。與正常人相比，患者在該區(qū)域的堿基會(huì)發(fā)生改變,在上圖中用方框圈出發(fā)生改變的堿基對(duì)，這種變異被稱為＿_(dá)__＿_(dá)__。(３)已知限制酶E識(shí)別序列為ＣCＧG，若用限制酶E分別完全切割正常人和患者的P５3基因部分區(qū)域（見(jiàn)上圖）,那么正常人的會(huì)被切成_＿＿_(dá)_＿_(dá)_個(gè)片段,而患者的則被切割成長(zhǎng)度為＿_(dá)____＿_(dá)對(duì)堿基和__＿_(dá)_＿_(dá)＿對(duì)堿基的兩種片段。（４）如果某人的P53基因部分區(qū)域經(jīng)限制酶E完全切割后，共出現(xiàn)1７0、220、２90和460個(gè)堿基對(duì)的四種片段,那么該人的基因型是__＿_(dá)____（以P+表示正?；?，P-表示異?；颍?。７．(2009·福建卷)轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有ＰstⅠ、ＳｍaⅠ、EcｏＲⅠ、AｐａⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。（1）構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶＿_(dá)__＿_(dá)__，對(duì)_____＿_(dá)_進(jìn)行切割。（2）培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中含有___＿＿_(dá)＿＿，作為標(biāo)記基因.(3）香蕉組織細(xì)胞具有_＿＿_(dá)＿_(dá)＿_(dá)，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的＿_(dá)______。8（2012高考全國(guó)新課標(biāo)卷4０)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí),回答下列問(wèn)題:（1）限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類(lèi)型有和。（2）質(zhì)粒運(yùn)載體用ＥｃｏRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的ＤNＡ除可用ＥcｏRⅠ切割外,還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是.（3）按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的DNＡ連接酶有兩類(lèi)，即DＮＡ連接酶和DNA連接酶。（４)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是,產(chǎn)物是。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,常采用技術(shù)。（5)基因工程中除質(zhì)粒外，和也可作為運(yùn)載體.(６）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下,不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是.９。（2０12福建高考３2)現(xiàn)代生物科技專題。肺細(xì)胞中的let—７基因表達(dá)減弱,癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng),會(huì)引發(fā)肺癌.研究人員利用基因工程技術(shù)將ｌet－7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)驗(yàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制.該基因工程技術(shù)基本流程如圖１。請(qǐng)回答：(１）進(jìn)行過(guò)程①時(shí),需用酶切開(kāi)載體以插入let—7基因。載體應(yīng)用RＮA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)leｔ—7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為。（2)進(jìn)行過(guò)程②時(shí),需用酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。(３)研究發(fā)現(xiàn),let-7基因能影響RＡS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖２.據(jù)圖分析，可從細(xì)胞提取進(jìn)行分子雜交,以直接檢測(cè)leｔ－7基因是否轉(zhuǎn)錄.肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中(RAＳmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的。10。（２012天津高考7)生物分子間的特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合體”獲得ＤNA片段信息的過(guò)程圖。據(jù)圖回答：（1）過(guò)程①酶作用的部位是鍵,此過(guò)程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA,過(guò)程②酶作用的部位是鍵。(２)①、②兩過(guò)程利用了酶的特性。(3)若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要過(guò)程③的測(cè)序結(jié)果與酶的識(shí)別序列進(jìn)行對(duì)比,以確定選用何種酶。（4）如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA酶聚合,則其識(shí)別、結(jié)合ＤＮA序列位基因的.(５)以下研究利用了生物分子間的特異性結(jié)合的有(多選）A.分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNAB。用無(wú)水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C．通過(guò)分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體定位D．將抑制成熟基因?qū)敕?，其mRNＡ與催化成熟酶基因的ｍRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟。11.（2012江蘇高考３２)圖1表示含有目的基因Ｄ的DNＡ片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì))和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MｓｐI、BaｍＨI、MboI、SｍaI4種限制性核酸內(nèi)切酶,它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓ＧＡＴC、CCC↓GＧＧ。請(qǐng)回答下列問(wèn)題(1）圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由連接.（2)若用限制酶SmaＩ完全切割圖1中DＮＡ片段，產(chǎn)生的末端是末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為。（３）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T—A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaI完全切割,產(chǎn)物中共有種不同長(zhǎng)度的ＤNA片段.（４)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是.在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是.答案1?！窘馕觥竣倩蚬こ讨杏?種工具，但工具酶只有2種。②工具酶本質(zhì)為蛋白質(zhì)，載體本質(zhì)為小型DＮA分子，但不一定是環(huán)狀。③標(biāo)記基因的作用—-篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見(jiàn)的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因，表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色物質(zhì)等。④受體細(xì)胞中常用植物受精卵或體細(xì)胞(經(jīng)組織培養(yǎng))、動(dòng)物受精卵（一般不用體細(xì)胞)、微生物——大腸桿菌、酵母菌等。一般不用支原體，原因是它營(yíng)寄生生活；一定能用哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞，原因是它無(wú)細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì).【答案】D2.解析考查基因工程中工具酶的有關(guān)知識(shí).限制性核酸內(nèi)切酶的化學(xué)成分是蛋白質(zhì)，它的活性受到溫度和ｐH的影響；限制性核酸內(nèi)切酶的特點(diǎn)是能識(shí)別雙鏈ＤNA中特定的核苷酸序列，可在特定的位點(diǎn)進(jìn)行切割，但不能識(shí)別和切割RＮＡ；限制性核酸內(nèi)切酶主要是從原核生物體內(nèi)分離出來(lái)的。答案C解析圖示過(guò)程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程,是基因工程中的核心步驟。構(gòu)建過(guò)程中需要將目的基因完整切割下來(lái)，此時(shí)要用到限制酶PstⅠ、EcoRⅠ?？箍敲顾鼗蚴菢?biāo)記基因，目的是便于鑒定和篩選含有目的基因的細(xì)胞。基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子和標(biāo)記基因等。答案B４．【解析】過(guò)程①中通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄法獲得的目的基因,可用于基因工程,但該目的基因中不存在內(nèi)含子和非編碼序列,因此不能用于比目魚(yú)的基因組測(cè)序；將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成的能表達(dá)的新基因可能不再是抗凍基因；利用農(nóng)桿菌的目的是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞,而不是篩選重組質(zhì)粒；應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可以檢測(cè)受體細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入了目的基因，但不能檢測(cè)目的基因是否完全表達(dá).【答案】B５。C［限制酶可在特定位點(diǎn)對(duì)ＤNＡ分子進(jìn)行切割;DNＡ聚合酶在DNA分子復(fù)制時(shí)將脫氧核苷酸連接成脫氧核苷酸鏈;DNＡ連接酶可將限制酶切開(kāi)的磷酸二酯鍵連接在一起;解旋酶的作用是將DNA雙鏈解開(kāi)螺旋，為復(fù)制或轉(zhuǎn)錄提供模板。］6。ＡCD［基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因;質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體;通常用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，以獲得相同的黏性末端;受體細(xì)胞可以是受精卵,也可以是體細(xì)胞。D．為培育成抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時(shí)只能以受精卵為受體7.【答案】A【解析】提取矮牽牛藍(lán)色花的ｍＲNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNＡ,然后擴(kuò)增,可獲得大量的基因B,A正確;從基因文庫(kù)中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫(kù)中的信息進(jìn)行篩選對(duì)比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割,B錯(cuò)誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DＮA連接酶,而不是ＤNＡ聚合酶,Ｃ錯(cuò)誤；目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入,而且應(yīng)該用農(nóng)桿菌進(jìn)行感染,而不是大腸桿菌，D錯(cuò)誤。8．解析將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連成能表達(dá)的新基因,合成的蛋白質(zhì)為新的蛋白質(zhì)，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白,故選項(xiàng)B正確;過(guò)程①是利用反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，由于沒(méi)有非編碼區(qū)和編碼區(qū)中的內(nèi)含子，不能用于比目魚(yú)基因組測(cè)序；用作載體的質(zhì)粒,必須具有標(biāo)記基因才能便于檢測(cè)和篩選；應(yīng)用ＤＮA探針技術(shù),可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄中目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄，但不能檢測(cè)是否成功表達(dá)，故選項(xiàng)A、C、D錯(cuò)誤。答案Ｂ9?！窘馕觥渴荏w大腸桿菌成功表達(dá)腺苷酸脫氨酶,說(shuō)明每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞至少含有一個(gè)重組質(zhì)粒，且每個(gè)ada至少指導(dǎo)合成一個(gè)腺苷酸脫氨酶分子.重組質(zhì)粒的形成需先用限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒形成相同的黏性末端，再在DＮA連接酶的作用下連接起來(lái)，連接起來(lái)的序列中會(huì)含有限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)。不同的限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)不同，不是每個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)都能插入ａda,Ｃ項(xiàng)錯(cuò)誤.【答案】Ｃ10.解析基因工程是在生物體外，通過(guò)對(duì)ＤNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”,對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖,使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá),產(chǎn)生出人類(lèi)所需要的基因產(chǎn)物。所以Ｂ為基因工程,而A為動(dòng)物細(xì)胞工程，C為誘變育種，D無(wú)人為因素不屬于基因工程.答案B11。解析限制性核酸內(nèi)切酶用于提取目的基因和切割載體，煙草花葉病毒的遺傳物質(zhì)是RNＡ,不能用限制性核酸內(nèi)切酶切割,A項(xiàng)錯(cuò)誤；DＮA連接酶可以連接具有相同黏性末端的目的基因和載體,B項(xiàng)正確；受體細(xì)胞可以是受精卵和體細(xì)胞，也可以是去除細(xì)胞壁的原生質(zhì)體，C項(xiàng)正確;目的基因?yàn)榭钩輨┗颍晕闯晒?dǎo)入目的基因的細(xì)胞不具有抗除草劑的能力，篩選時(shí)應(yīng)該用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,Ｄ項(xiàng)正確。答案A12。解析抗除草劑基因?qū)氲接筒说娜旧w后則可以通過(guò)花粉傳入環(huán)境中；轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因的植物可殺死無(wú)抗性昆蟲(chóng)，對(duì)昆蟲(chóng)的抗性具有選擇作用，所以會(huì)導(dǎo)致昆蟲(chóng)群體抗性基因頻率增加；轉(zhuǎn)基因技術(shù)打破了生殖隔離，動(dòng)物的生長(zhǎng)激素基因轉(zhuǎn)入植物后可以表達(dá)；來(lái)源于自然界的目的基因?qū)胫参矬w后，可能破壞原有的基因結(jié)構(gòu)，具有不確定性,外源基因也可能通過(guò)花粉傳播，使其他植物成為“超級(jí)植物”等,所以轉(zhuǎn)