多種腫瘤裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)具體步驟及說明誘發(fā)，性J中瘤動(dòng)物模型是指研究者用化學(xué)致癌劑、放射線、致癌病毒誘發(fā)動(dòng)物的腫瘤等。一、肝癌1.二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)大白鼠肝癌(1)取體重250g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘；(2)按性別分籠飼養(yǎng)。除給普通食物外，飼以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃,劑量為10mg/kg,每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用；(3)共約4個(gè)月可誘發(fā)成肝癌；(4)也可以單用0.005%摻入飲水中口吸服8個(gè)月誘發(fā)肝癌。2.4-2甲基氨基氮苯(DBA)誘發(fā)大鼠肝癌(1)用含0.06%DBA的飼料喂養(yǎng)大鼠，飼料中維生素B2不應(yīng)超過1.5~2mg/kg;(2)4~6月就有大量的肝癌誘發(fā)成功。.2-乙酰氨基酸(2AAF)誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌(1)給成年大鼠含0.03%2AAF標(biāo)準(zhǔn)飼料；(2)每日每平均2~3mg2AAF(也可將2AAF混于油中灌喂)，3~4月后有80~90%動(dòng)物產(chǎn)生肝腫瘤。.二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌：(1)用劑量為每日03~14mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予;(2)6~9個(gè)月后255/300大鼠發(fā)生了肝癌。.亞胺基偶氮甲苯(OAAT)誘發(fā)小鼠肝癌(1)用1%OAAF苯溶液(約0.1ml含1mg)涂在動(dòng)物的兩肩胛間皮膚上,隔日一次，每次2~3滴，一般涂100次。(2)實(shí)驗(yàn)后7~8周即而出現(xiàn)第一個(gè)肝腫瘤,7個(gè)月以上可誘發(fā)小鼠肝腫瘤約55%。(3)或用2.5mgOAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天,也可誘發(fā)成肝癌。.黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌(1)每日飼料中含0.001~0.015ppm,混入飼料中喂6個(gè)月后,肝癌誘發(fā)率達(dá)80%。二、胃癌.甲基膽意誘發(fā)小鼠胃癌(1)取20g左右的小鼠,無菌手術(shù)下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽慈(MC)線結(jié)。(2)含MC的線結(jié)是用普通細(xì)線,在一端打結(jié)后，將線結(jié)置于盛有MC小玻璃試管內(nèi)，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結(jié)。MC濃度為0.05~0.1g20-甲基膽慈內(nèi)浸入10~20根線。(3)手術(shù)埋線后4~8個(gè)月可誘發(fā)成功胃癌。.不對(duì)稱亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌劑量為0.25ml/kg體重,3個(gè)月后全部動(dòng)物發(fā)生前胃乳頭狀癌，7~8個(gè)月后有85~100%發(fā)生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。.甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)小鼠胃癌給BD大鼠飲水中加甲基亞硝基醋酸尿素，劑量為2mg/kg體重，每周飲用5次，520天后全部大鼠均發(fā)生了腺胃癌。三、食管癌.甲基芳基亞硝胺(MBNA)誘發(fā)大鼠食管癌(1)取體重100g以上的Wistar大鼠;(2)任其食用含甲基茉基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達(dá)0.75~1.5mg/kg體重；(3)80~100天可誘發(fā)成食管癌。.二煌黃樟素(Dihydrosafrole)誘發(fā)大鼠食管癌(1)二煌黃樟素是一種制備啤酒的調(diào)味品，在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬(2500~10000ppm)黃樟素，就能引起20~75%的食管癌。.甲基茉基亞硝胺誘發(fā)大鼠食管癌(1)用0.2%或0.005%的甲基茉基亞硝胺水溶液，給動(dòng)物經(jīng)口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1mg/kg體重；(2)至第27天即發(fā)現(xiàn)一例食管乳頭狀瘤，154天發(fā)現(xiàn)第一例食管癌，11個(gè)月食管癌的發(fā)生率為53%。四、肺癌.二乙基亞硝胺(DEN)誘發(fā)小鼠肺癌(1)小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56mg/kg,DEN總劑量達(dá)到868mg;(2)觀察時(shí)間為100天左右時(shí),發(fā)癌率可達(dá)40%。(3)DEN總劑量達(dá)到1176mg,觀察時(shí)間為半年左右時(shí);發(fā)癌率可達(dá)94%O.烏拉坦誘發(fā)肺腺癌(1)小鼠(A系，1~11/2月齡)較大鼠敏感,每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1~0.3ml,間隔3~5日再注，共注2~3個(gè)月，每只小鼠用量約為100mg;(2)注后3個(gè)月肺腺癌發(fā)生率為100%,而且多數(shù)為多發(fā)性,這種誘發(fā)瘤為良性。.苯并茂誘發(fā)肺腺癌(1)猴氣管內(nèi)注入3,4-苯并茂(苯并花為3~15mg與等量之Fe2O3混合液)，每周一次，共10次；(2)6只猴中有2只誘發(fā)肺的鱗狀上皮癌。.硫酸鏤氣溶膠誘發(fā)肺腺癌(1)用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入；(2)13個(gè)月后所有大鼠都發(fā)生了肺腺癌。.甲基膽慈誘發(fā)肺腺癌(1)用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽慈混合后給金地鼠氣管內(nèi)注入，每次0.1ml(含甲基膽慈5mg)每周一次，共6次；(2)53周后有62.5%動(dòng)物發(fā)生了肺癌。五、鼻咽癌1.二甲基膽慈(MC)誘發(fā)大鼠鼻咽癌(1)取直徑2~3mm的硬質(zhì)塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長(zhǎng)約3.5cm,管內(nèi)填以結(jié)晶體MCO(2)小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數(shù)孔，使MC能從小妃溢出。(3)取體重120g左右的大白鼠,雌雄均可，乙醛麻醉后，由前鼻孑LW上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點(diǎn)，稍加用力，迫使小管全部進(jìn)入鼻腔內(nèi)，其尖部可達(dá)鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長(zhǎng)期留于鼻腔內(nèi)。(4)待到預(yù)定時(shí)間(半年以上)，或動(dòng)物自行死亡時(shí)，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定,脫鈣后，石蠟包埋,進(jìn)行連續(xù)切片。發(fā)癌率可達(dá)60%以上。2.二乙基亞硝胺滴鼻法誘發(fā)鼻咽癌(1)取120g左右大白鼠,雌雄均可，乙醛麻醉后,用磨平針尖的8號(hào)針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達(dá)鼻咽腔；(2)經(jīng)注射器灌注用1%吐溫-80新配的333%DEN混懸液0.02ml(含DEN6.7mg)每周1次，共15~20次，可誘發(fā)成鼻咽癌。六、宮頸癌1.二甲基膽慈(MC)誘發(fā)宮頸取雌性小白鼠，以附有0.1mgMC的棉紗線結(jié)在動(dòng)物不麻醉的狀態(tài)下，借助于陰道擴(kuò)張器及磨純的彎針，將線穿入宮頸。經(jīng)右宮角背部穿出，使線結(jié)固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線以后，同日開始連續(xù)注射青霉素2~3天。以防術(shù)后感染。至一定時(shí)間(半年左右)處死動(dòng)物,宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。七、結(jié)腸癌1.二甲基茉脫(Dimethlhydrazine,DMH)誘發(fā)鼻咽癌(1)給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基茉脫(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次，連續(xù)21周，每次DMH21mg/kg;(2)最后一次給藥后1~4周，處死動(dòng)物；(3)降結(jié)腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋,切片。所用之DMH先配成每100ml含400mg的母液，并加EDTA37mg,用氫氧化納(0.1N)液將pH調(diào)至6.5備用。注意事項(xiàng).要設(shè)計(jì)不同的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組動(dòng)物數(shù)一般為5-10只；.一般接種腫瘤6-8周后，小鼠的腫瘤可生長(zhǎng)至直徑為15-20mm(即小鼠會(huì)瀕臨死亡)時(shí)，可眼球取血，分離血清并保存血清,處死小鼠,取腫瘤組織照相，取部分腫瘤組織作冰凍組織切片(或-80℃保存)，作相應(yīng)的免疫組織化學(xué)染色,取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定，石臘包埋，作常規(guī)HE染色。.芳香胺及偶氮染料類致癌物的特點(diǎn)(1)通常需要長(zhǎng)期、大量給藥才能致癌；(2)腫瘤多發(fā)生于遠(yuǎn)隔作用部位的器官如膀胱、肝等；(3)有明顯的種屬差異；(4)其本身不是直接致癌物，致癌是由于其某種代謝產(chǎn)物的作用；(5)其致癌作用往往受營(yíng)養(yǎng)或激素的影響，例如，奶黃僅在以缺少蛋白質(zhì)和核黃素的飼料喂飼大鼠時(shí)才引起肝癌，而且雄性大鼠較敏感，鄰位氨基偶氮甲苯則易起雌性大鼠的肝癌。.亞硝胺類的致癌特點(diǎn)(1)致癌性強(qiáng)，小劑量一次給藥即可致癌；(2)對(duì)多種動(dòng)物(包括猴、豚鼠等不易誘發(fā)腫瘤的動(dòng)物)的許多器官(包括食管、腦、鼻竇等不易引起癌的器官)能致癌，甚至可以通過胎盤致癌，如給懷孕大鼠以二乙基亞硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)可比較快地引起仔鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤；(3)具有不同結(jié)構(gòu)的亞硝胺有明顯的器官親和性，例如二甲基亞硝胺等對(duì)稱的衍生物常引起肝癌，不對(duì)稱的亞硝胺如甲基茉基亞硝胺常誘發(fā)食管癌；在大鼠，二丁基亞硝胺能引起膀胱癌，二戊基亞硝胺能誘發(fā)肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亞硝基服則能引起胃腸癌。.黃曲霉毒素的致癌特點(diǎn)(1)黃曲霉毒素的毒性很強(qiáng)，很小劑量(lmg/kg體重)即可使狗、幼齡大鼠、火雞或小鴨致死；(2)其致癌性也極強(qiáng),最小致癌劑量比亞硝胺還要小數(shù)十倍，是已知化學(xué)致癌物中作用最強(qiáng)者