丙二醛含量的測定_第1頁
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丙二醛含量的測定第一頁，共9頁。植物在逆境下遭受傷害（或衰老）與活性氧積累誘發(fā)的膜脂過氧化作用密切相關(guān)，膜脂過氧化的產(chǎn)物有二烯軛合物、脂類過氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂過氧化最重要的產(chǎn)物之一，因此可通過測定MDA了解膜脂過氧化的程度，以間接測定膜系統(tǒng)受損程度以及植物的抗逆性。原理第二頁，共9頁。丙二醛在高溫及酸性環(huán)境下可與2-硫代巴比妥酸（TBA）反應產(chǎn)生紅棕色的產(chǎn)物3,5,5′-三甲基惡唑2,4-二酮（三甲川），該物質(zhì)在532nm處有一吸收高峰，并且在660nm處有較小光吸收。根據(jù)其532nm的消光值可計算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖對此反應有干擾，在450nm處有一吸收峰，可用雙組分分光光度法加以排除。原理硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5′-三甲基惡唑2,4-二酮（三甲川）第三頁，共9頁。儀器設備分光光度計；研缽；剪刀；恒溫水浴；試管：20mL×4離心機。第四頁，共9頁。試劑1.5%三氯醋酸；2.0.5%硫代巴比妥酸（用5%三氯醋酸溶解定容）；3.0.05mol·L–1磷酸緩沖液，pH7.8。第五頁，共9頁。材料正常生長的以及經(jīng)逆境處理的小麥、玉米或其他植物的葉片。第六頁，共9頁。方法與步驟1．取小麥植株上不同葉位的葉片3~5片，洗凈擦干，剪成0.5cm長的小段，混勻。2．稱取葉片切段0.3g，放入冰浴的研缽中，加入少許石英砂和2mL0.05mol·L-1磷酸緩沖液，研磨成勻漿。將勻漿轉(zhuǎn)移到試管中，再用3mL0.05mol·L-1磷酸緩沖液，分三次沖洗研缽，合并提取液。3．在提取液中加入5mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，搖勻。4．將試管放入沸水浴中煮沸10min，（自試管內(nèi)溶液中出現(xiàn)小氣泡開始計時）。到時間后，立即將試管取出并放入冷水浴中。5．待試管內(nèi)溶液冷卻后，3000×g離心15min，取上清液并量其體積。以0.5%硫代巴比妥酸溶液為空白測532nm、600nm和450nm處的消光值。第七頁，共9頁。計算結(jié)果式中，Vt：提取液總體積（mL）；Vs：測定用提取液體積（ml）；FW：樣品鮮重（g）。第八頁，共9頁。注意事項1．可溶性糖與TBA顯色反應的產(chǎn)物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm），當植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時可溶性糖含量會增高，必要時要排除可溶性糖的干擾。2．低濃度的鐵離子能增強MDA與TBA的顯色反應，當植物組織中鐵離子濃度過低時應補充Fe3+（最終

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