LOREMIPSUMDOLOR乙肝病毒DNA的實驗室檢測2020/12/1811、熒光定量PCR技術2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA與臨床2020/12/182熒光定量PCR技術2020/12/183熒光定量PCR技術Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶鏈式反應，是一種DNA的快速擴增技術。PCR技術通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶（TaqDNA聚合酶）的作用，經(jīng)過高溫變性、低溫退火、適溫延伸三個步驟在3個小時內(nèi)反復循環(huán)25-30次，把特定的DNA片段擴增1000萬倍。每個PCR體系含4種主要成分：含有待擴增序列的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脫氧核糖核酸三磷酸（dNTP）2020/12/184

實時熒光定量PCR技術，是指在反應體系中加入熒光標記，利用熒光信號積累實時檢測整個PCR過程，通過標準曲線對PCR終產(chǎn)物的分析，最終實現(xiàn)對未知的起始模版進行定量分析的一種技術，是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法。熒光定量PCR技術2020/12/185PCR反應過程5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反應組分變性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’2020/12/186延伸5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’3’TaqTaq5’5’重復退火2020/12/1875’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’循環(huán)24個拷貝循環(huán)38個拷貝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’2020/12/188熒光定量PCR原理插入染料法

SYBRGreenI雜交探針法(最常用)

TaqMan2020/12/189TaqMan探針5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反應體系變性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’Taql5’3’RQProbe5’3’RQ2020/12/18105’3’5’3’5’3’RQ退火5’3’1.鏈取代Taq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2.水解3.聚合5’3’QTaqR3’5’4.檢測熒光5’3’3’QTaqR5’l2020/12/1811乙肝病毒的感染2020/12/1812乙肝病毒的感染

（一）乙型肝炎病毒結構及特點HBsAg：是HBV感染的主要標志HBsAb：保護性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復制狀態(tài)HBeAg：HBV復制及強感染性的指標HBeAb：有一定的保護作用，預后良好2020/12/1813乙肝病毒的感染（二）HBV-DNA與“兩對半”1.“兩對半”：機體的免疫反應狀態(tài)；2.“攜帶者”、“大三陽”、“小三陽”等免疫學指標不能反應體內(nèi)病毒復制水平與感染程度。FQ-PCR：檢測的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復制的最可靠、最直接的指標。HBsAg(－)

HBV-DNA(＋)

HBeAg(－)HBV-DNA(＋)3.血清學指標(－)不能排除HBV感染。2020/12/1814乙肝病毒的感染5.HBeAg陽性標本HBVDNA檢出率90％左右

HBeAg與HBVDNA有著良好的相關性4.也可能出現(xiàn)HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。2020/12/1815乙肝病毒的感染2020/12/1816乙肝病毒的感染慢性HBV感染分期及相關實驗室檢測指標魯鳳民，莊輝，乙型肝炎實驗室診斷研究進展20092020/12/1817HBV-DNA與臨床2020/12/1818HBVDNA檢測的臨床意義HBVDNA是HBV存在最直接的依據(jù)HBVDNA是HBV復制的標志HBVDNA是患者具有傳染性的標志HBVDNA對乙肝兩對半起補充作用HBVDNA是目前判斷乙肝抗病毒藥物療效最敏感的指標HBVDNA可檢測出隱匿性慢性乙型肝炎2020/12/1819有利于獻血員窗口期病毒核酸的篩查和早期診斷提供直接證據(jù)縮短“窗口期”HBVDNA檢測的臨床意義2020/12/1820

調(diào)查表明并不是所有“大三陽”的病人都處于HBV復制期，具有傳染性；也不是所有“小三陽”的病人HBV都無復制。因此，要準確知道HBV是否處于復制狀態(tài)，最準確的方法還是通過檢測HBVDNA來決定。HBVDNA檢測的臨床意義2020/12/18212020/12/18222020/12/1823HBVDNA檢測的臨床意義HBsAg和HBeAg均陽性而HBVDNA陰性？●干擾素或拉米夫定等治療后病毒復制受抑制?！馪CR所用引物相應的DNA序列發(fā)生突變，此引物與突變DNA不能配對結合?！癫《綝NA整合于宿主肝細胞染色體而血中游離HBVDNA很少或缺乏。2020/12/1824

目前尚無一種能迅速、直接殺死清除乙肝病毒的藥物，最好的抗病毒藥物療效也僅能達到50％左右。目前國際醫(yī)學界公認的治療慢性乙肝有確切療效的抗病毒藥物主要有兩大類：

干擾素：重組人α-1b干擾素、α-2a、