最新：PCR實驗室污染的應急處理方法（全文）PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應用，不過正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導致檢測結(jié)果的假陽性，因此所有的預防措施都會稍稍有所不同。「易查不易察」，污染來的悄無聲息，我們該如何應對。那么，如何避免以及處理實驗室污染，對PCR人來說是一門必修課。一、PCR實驗室污染分類1、樣本間交叉污染主要是在采（?。拥倪^程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。2、PCR試劑污染主要是在PCR組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。3、PCR擴增產(chǎn)物污染這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。還有一種容易被忽視的污染，是能造成PCR產(chǎn)物污染形式的氣溶膠污染，而氣溶膠造成的污染是一個值得特別重視的問題。4、克隆質(zhì)粒污染在實驗操作中會經(jīng)常用到陽性參考品，這些參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成的，質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。二、實驗室污染處理方法1.物料準備(1)購買噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；(2)購買市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配置不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；(3)購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNAAWAYO?原液/MediClean⑧稀釋倍)；(4)無紡布/無塵紙等。2.應急處理方法(1)清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；(2)用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；(3)將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后，用清水沖洗干凈晾干后使用；(4)對污染區(qū)域內(nèi)的設備如擴增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復處理；對生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設備，需更換過濾網(wǎng)；(5)用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室（地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方）進行清潔，并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒（重點部位為操作區(qū)），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染；同時加大通風量（內(nèi)循環(huán)無用，盡可能外循環(huán)）；(6)待污染區(qū)域及設備器件清理完成后，常用設備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時；實驗室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。以上措施每日進行，直至污染消除；步驟(1)-(6)必須堅持每天進行，確保消除實驗室污染；3.消除污染判定標準設計陰性對照組，根據(jù)陰性對照確認污染情況?？墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進行實驗（在單獨的實驗室驗證)，若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復正常實驗。污染，是PCR實驗室出現(xiàn)實驗假陽性、結(jié)果不可信、研發(fā)不可靠的重要推手。在最初開展PCR實驗室的時候，應最大程度的降低可能出現(xiàn)的PCR