RNA的生物合成轉(zhuǎn)錄后加工和調(diào)節(jié)第1頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院217章RNA的生物合成、轉(zhuǎn)錄后加工和調(diào)節(jié)第2頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院3第一節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的基本性質(zhì)轉(zhuǎn)錄是以DNA單鏈為模板，NTP為原料，在DNA依賴的RNA聚合酶催化下合成RNA鏈的過程。DNA上的轉(zhuǎn)錄區(qū)域稱為轉(zhuǎn)錄單位

轉(zhuǎn)錄是基因表達(dá)的第一階段也是基因調(diào)節(jié)的主要階段。第3頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院4轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的異同相同差異轉(zhuǎn)錄復(fù)制模版DNA一條鏈2條原料核苷三磷酸NTPdNTP堿基配對(duì)遵從堿基配對(duì)A-U,G-C,T-A聚合酶依賴DNA的酶RNA聚合酶DNA聚合酶產(chǎn)物多核苷酸鏈RNA雙鏈DNA特點(diǎn)不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄半保留半不連續(xù)第4頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院5結(jié)構(gòu)基因

DNA分子中編碼RNA的區(qū)段模板鏈

WatsonW鏈負(fù)鏈編碼鏈

CrickC鏈正鏈不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄不同基因的模板鏈核編碼鏈并不是固定在某一條鏈上。第5頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院6RNA聚合酶特點(diǎn)：①以核糖核苷三磷酸（rNTP）為底物；②以DNA為模板；③按5′→3′方向合成；④無需引物的存在能單獨(dú)起始鏈的合成；⑤合成時(shí)，第一個(gè)引入的NTP是以三磷酸形式存在；⑥在體內(nèi)DNA雙鏈中僅一條鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板；⑦RNA的序列和模板是互補(bǔ)的；⑧RNA聚合酶無校正能力。原核生物的RNA聚合酶細(xì)菌中只有一種真核生物的RNA聚合酶真核生物有三類不同的第二節(jié)RNA聚合酶第6頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院7RNA的酶促合成第7頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院8一、原核生物的RNA聚合酶大腸桿菌RNA聚合酶的組成450kd，5個(gè)亞基2個(gè)Alpha亞基參與全酶的組裝及識(shí)別啟動(dòng)子Β亞基與NTP及新生鏈結(jié)合Β’亞基與模板DNA結(jié)合σ亞基辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，延伸階段與核心酶分離，一種轉(zhuǎn)錄輔助因子第8頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院9σ因子原核只有一種RNA聚合酶，但有多種σ因子在不同的條件下被表達(dá)，并與相應(yīng)啟動(dòng)子結(jié)合基因啟動(dòng)子－35和－10區(qū)的保守序列是其識(shí)別位點(diǎn)第9頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院10RNApolymerase

inprok.δβααβ’CoreEnzymeHoloEnzyme

forelongationforinitiation依靠靜電作用力依靠空間結(jié)構(gòu)非專一性與DNA結(jié)合專一性與

DNA結(jié)合結(jié)合常數(shù)；1011/mol結(jié)合常數(shù)；1014/mol半衰期；60’衰期；數(shù)小時(shí)cover60bp

δβα

αβ’第10頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院11基因產(chǎn)物功能E.coliRNAPol的結(jié)構(gòu)和功能 rpoA2α亞基(每個(gè)40kD)酶的連接，裝配啟動(dòng)子的識(shí)別結(jié)合某些活化因子 rpoBβ亞基(160kD)rpoCβ′亞基(160kD)rpoDσ亞基(32～90kD)和底物結(jié)合

催化核心 和模板結(jié)合 和啟動(dòng)子結(jié)合識(shí)別模板鏈 第11頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院12原核生物RNApol(Core)的結(jié)構(gòu)與功能EnzymeMovementDNAcodingstrand(β’)Rewindingpoint(α)Unwindingpoint(α)RNAbindingsiteRNA/DNAhybrid(β)DNAtemplatestrandHoloEnzyme使

DNA形成10-17bp的解鏈區(qū)

第12頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院13RNA聚合酶需執(zhí)行多功能：①識(shí)別DNA雙鏈上的啟動(dòng)子；②使DNA在啟動(dòng)子處解鏈成單鏈；③通過閱讀啟動(dòng)子序列，RNA聚合酶確定它自己的轉(zhuǎn)錄方向和模板鏈；④最后當(dāng)它達(dá)到終止子時(shí)，通過識(shí)別停止轉(zhuǎn)錄

第13頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院14二、真核生物的RNA聚合酶已發(fā)現(xiàn)有3種對(duì)抑制劑鵝膏覃堿的敏感性有差異轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物不同第14頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院15轉(zhuǎn)錄何處開始？？？？啟動(dòng)子DNA模板上被RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的區(qū)段。原核生物啟動(dòng)子真核生物啟動(dòng)子第三節(jié)與轉(zhuǎn)錄有關(guān)的DNA結(jié)構(gòu)第15頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院16一、原核生物啟動(dòng)子研究方法足跡法p340起始點(diǎn)

AorG－10區(qū)一致序列TATAATpribnowbox－35區(qū)一致序列TTGACAσ因子識(shí)別位點(diǎn)，全酶結(jié)合于此，Sextamabox－10～－35區(qū)間隔序列長短比序列重要第16頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院17大腸桿菌啟動(dòng)子的保守序列第17頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院18RNA聚合酶I的啟動(dòng)子rRNA45sRNA，再加工成5.8s,18s,28srRNA，啟動(dòng)子由核心啟動(dòng)子和上游的調(diào)控元件組成二、真核生物啟動(dòng)子第18頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院19RNA聚合酶II的啟動(dòng)子有3處順式作用元件－90的GC盒，－70的CAAT盒，－30處的TATA盒轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)與原核生物相似，大多為A或GmRNA，種類繁雜，啟動(dòng)子多樣性，還發(fā)現(xiàn)其它的相關(guān)元件。各種元件有不同的組合。II是最活躍的聚合酶。第19頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院20真核RNA聚合酶II啟動(dòng)子和增強(qiáng)子通過蛋白質(zhì)的介導(dǎo)互相結(jié)合，形成環(huán)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄第20頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院21真核啟動(dòng)子含有的各種元件和分布第21頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院22RNA聚合酶III的啟動(dòng)子催化snRNA,tRNA,5SRNA的轉(zhuǎn)錄需要其它輔助因子共同作用snRNA啟動(dòng)子與蛋白質(zhì)基因啟動(dòng)子相似tRNA,5SRNA內(nèi)部啟動(dòng)子第22頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院23真核RNA啟動(dòng)子Ⅲ的基因內(nèi)啟動(dòng)子和基因外啟動(dòng)子第23頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院24真核啟動(dòng)子不同于原核的特點(diǎn)①有多種元件；②結(jié)構(gòu)不恒定；③它們的位置、基序、距離和方向都不完全相同；④有的有遠(yuǎn)距離的調(diào)控元件存在，如增強(qiáng)子、沉默子等；⑤這些元件常常起到控制轉(zhuǎn)錄效率和選擇起始位點(diǎn)的作用；⑥不直接和RNAPol結(jié)合。第24頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院25轉(zhuǎn)錄的起始轉(zhuǎn)錄的延伸轉(zhuǎn)錄的終止第四節(jié)轉(zhuǎn)錄過程第25頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院26轉(zhuǎn)錄的起始原核生物轉(zhuǎn)錄的起始真核生物轉(zhuǎn)錄的起始第26頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院27原核生物的轉(zhuǎn)錄起始1.核心酶在σ因子的參與下與模板的DNA接觸，生成非專一的，不穩(wěn)定的復(fù)合物在模板上移動(dòng)；2.起始識(shí)別：全酶與模板的啟動(dòng)子結(jié)合，產(chǎn)生封閉的“酶-啟動(dòng)子二元復(fù)合物”（closedbinarycomplex）；3.酶緊密地結(jié)合在啟動(dòng)子的-10序列處，模板DNA局部變性，形成“開放的啟動(dòng)子二元復(fù)合體”（openbinarycomplex）；4.酶移動(dòng)到轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上，第一個(gè)rNTP轉(zhuǎn)錄開始，σ因子釋放，形成酶-啟動(dòng)子-rNTP三元復(fù)合體。第27頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院28E.coli轉(zhuǎn)錄的起始第28頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院29真核生物的轉(zhuǎn)錄起始每種RNA聚合酶都需要一些蛋白質(zhì)輔助因子，即轉(zhuǎn)錄因子，transcriptionfactor（I,II,III類分別對(duì)應(yīng)于聚合酶）第29頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院30RNA聚合酶I催化的起始轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游有2個(gè)順式作用元件，核心元件coreelement和上游調(diào)控元件UCE。RNA聚合酶I催化的轉(zhuǎn)錄需要2種轉(zhuǎn)錄因子，上游結(jié)合因子UBF和選擇性因子1，SL1。SL1有4個(gè)亞基，一個(gè)是TATA盒結(jié)合蛋白TBP,另3個(gè)是TBP相關(guān)因子TAF。第30頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院31p342UBF和UCE結(jié)合令DNA發(fā)生彎曲，使相距上百bp的UCE和核心元件靠攏，接著SL1和polI相繼結(jié)合到UBF-DNA復(fù)合物上，完成復(fù)合物的組建，開始轉(zhuǎn)錄。第31頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院32Pre-rRNA

AllowsRNApolbindingcomplextoinitiate

RNApol

第32頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院33RNA聚合酶II催化的起始轉(zhuǎn)錄因子：需要較多的轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的組裝：TFII-D與TATA盒結(jié)合，如無TFII-A的存在，TFII-D啟動(dòng)子復(fù)合物與抑制因子結(jié)合。TFII-A存在時(shí)與TFII-D結(jié)合成D-A復(fù)合物，防止復(fù)合物與抑制因子的結(jié)合，繼而與TFII-B結(jié)合。聚合酶與TFII-F先形成復(fù)合物后再結(jié)合到DNA上，此時(shí)不能啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，必須TFII-E和TFII-H/TFII-J的參與。TFII-H是最后加入的因子，有解旋酶的活性，使起始部位DNA解鏈。TFII-H還有蛋白激酶活性，使polIIC端多個(gè)絲氨酸殘基磷酸化，這是聚合酶離開起始點(diǎn)繼續(xù)轉(zhuǎn)錄的重要因素。第33頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院34真核生物的轉(zhuǎn)錄RNAPolⅡ的轉(zhuǎn)錄起始第34頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院35RNAPolⅡ的轉(zhuǎn)錄起始第35頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院36TATA+1

Wildsminorgroove

TFIIATBPofD

pre-TIC

TFIIFRNApolIITFIIB

BasicTIC

conclusion第36頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院37mRNA

Promoterclearance

TranscriptionstartingEHJEHBDAJ第37頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院38RNA聚合酶III催化的起始需要3個(gè)蛋白質(zhì)因子TFIII-A,B,C。tRNA基因轉(zhuǎn)錄的起始：在DNA上的調(diào)控序列位于起始轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)的下游，稱為內(nèi)部啟動(dòng)子。有2個(gè)調(diào)控區(qū)，A盒和B盒。5sRNA基因轉(zhuǎn)錄的起始：除了TFIII-B,C外，還需要TFIII-A，首先TFIII-A結(jié)合到下游C盒，然后TFIII-C結(jié)合到A盒和B盒，繼而是類似tRNA的轉(zhuǎn)錄第38頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院39TFIIIC

+1AboxBbox

tDNA

TFIIIB

TBPBRFB’’第39頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院40TFIIIBallowsRNApolIIItobindandinitiatetranscription

tRNA

RNApolIII

+1第40頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院41

RNApolIIITFIIIC

TFIIIA

+1AboxCbox

TFIIIB

rRNA

5spre-rRNAtranscription第41頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院42轉(zhuǎn)錄的延伸延伸階段，原核和真核比較相近。聚合酶如何向轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)下游移動(dòng)？轉(zhuǎn)錄區(qū)的模板如何形成局部單鏈區(qū)？第42頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院43原核生物的延伸：核苷酸鏈中的的一個(gè)磷酸二酯鍵形成后，σ因子從全酶中解離出來，核心酶沿DNA分子移動(dòng)。真核生物：

RNA聚合酶需要較多的轉(zhuǎn)錄因子，起始后酶的移動(dòng)也靠多種轉(zhuǎn)錄因子的共同作用使酶的構(gòu)象發(fā)生改變來實(shí)現(xiàn)，如在TFII-H的作用下，polIIC端絲氨酸的磷酸化是向下游移動(dòng)的重要因素。第43頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院44轉(zhuǎn)錄的延伸延伸時(shí)RNA聚合酶以穩(wěn)定收縮和突然伸展的方式在DNA上“爬行”，穩(wěn)定的收縮是指RNA聚合酶從35bp長連續(xù)地收縮到28bp，然后前端又突然向前伸展8bp,RNA聚合酶又恢復(fù)到35bp長。第44頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院45轉(zhuǎn)錄泡p345在轉(zhuǎn)錄延伸的過程中，DNA雙鏈需要解開10－20bp，形成的局部單鏈區(qū)象一個(gè)小泡為了保持局部的轉(zhuǎn)錄泡狀態(tài)，在RNA聚合酶下游的DNA需要不斷的解鏈，可使其下游的DNA越纏越緊，形成正超螺旋，而其上游的DNA鏈變得松弛，產(chǎn)生負(fù)超螺旋。解旋酶和拓?fù)涿缚梢韵@些螺旋第45頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院46第一個(gè)磷酸二酯鍵的形成是由第一個(gè)核苷酸的3‘OH與第二個(gè)核苷酸的5’磷酸之間脫水形成的。第一個(gè)核苷酸的5’三磷酸保留在轉(zhuǎn)錄局部形成的RNA:DNA雜合雙鏈之間的力比DNA雙鏈的弱，存在A:U配對(duì)，延長中的RNA鏈的5’端會(huì)被重新形成的DNA雙鏈擠出，使合成中的RNA鏈的5’端游離于轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。第46頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院47轉(zhuǎn)錄的終止生物轉(zhuǎn)錄的終止處有特殊結(jié)構(gòu)的存在，稱為終止子

在原核細(xì)胞中有兩種不同的終止子，一種是強(qiáng)終止子，另一種是弱終止子。強(qiáng)終止子在體外實(shí)驗(yàn)中，無需其他任何因子的幫助就可以終止核心酶，這種終止子被稱為內(nèi)部終止子（intrinsicterminators）。弱終止子需要在一種蛋白質(zhì)因子ρ（rhofactor）的幫助一才能終止，所以又稱為ρ依賴性終止子（Rho-dependentterminator）第47頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院48強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu)強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu)有三個(gè)特點(diǎn)：①有回文結(jié)構(gòu)存在。由它轉(zhuǎn)錄出mRNA可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，可阻止RNA聚合酶的前進(jìn)；②莖的區(qū)域富內(nèi)含G-C，使莖環(huán)不易解開；③強(qiáng)終止子3′端上有6個(gè)U，由于它和模板形成的連續(xù)U-A配對(duì)較易打開，從而便于釋放出RNA。第48頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院49弱終止子的結(jié)構(gòu)它也可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，但在莖中的G.C含量少，莖環(huán)易打開。在其3′端也沒有寡聚U，因此RNA聚合酶合成此段RNA后，由于莖環(huán)的存在可使聚合酶暫停一下，若此時(shí)ρ因子追上來和聚合酶結(jié)合，那么轉(zhuǎn)錄即可終止，若無ρ因子聚合酶還可越過終止進(jìn)行“通讀”。第49頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院50RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄mRNAρ因子附著到mRNA識(shí)別位點(diǎn)ρ因子在RNA聚合酶后面沿mRNA移動(dòng)RNA聚合酶在終止位點(diǎn)停留，ρ因子趕上了聚合酶在轉(zhuǎn)錄泡中ρ因子解開DNA-RNA雜合鏈終止RNA聚合酶，ρ因子和RNA被釋放 在原核mRNA轉(zhuǎn)錄中ρ依賴性終止機(jī)制第50頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院51ρ依賴性終止子，其共同特點(diǎn)是C豐富，G缺乏第51頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院52RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出mRNA后核糖體結(jié)合到mRNA上核糖體在突變位點(diǎn)解離ρ因子追上了RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄提前終止無義突變時(shí)ρ因子可能使轉(zhuǎn)錄提前終止第52頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院53原核轉(zhuǎn)錄的過程第53頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院54真核生物轉(zhuǎn)錄的終止機(jī)制了解不多，且3種聚合酶的轉(zhuǎn)錄終止不完全相同。RNA聚合酶I催化的轉(zhuǎn)錄有18bp的終止子序列，可被輔助因子識(shí)別。RNA聚合酶II和III催化轉(zhuǎn)錄的終止子，可能有與原核生物不依賴ρ因子的終止子相似的結(jié)構(gòu)和終止機(jī)制，即有GC的莖環(huán)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的U。由于成熟的mRNA3’端已被切除了一段，并加入了polyA尾巴，具體的轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)目前尚未認(rèn)識(shí)。第54頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院55真核生物的轉(zhuǎn)錄終止爪蟾rDNA的轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)真核生物的RNA大部分都要經(jīng)過加工，包括剪切和加上poly(A)，因此對(duì)于其終止的情況了解很少，只有少數(shù)的例子搞得比較清楚。前體RNA轉(zhuǎn)錄的終止是隨著組織的變化而變化。例如在爪蟾中有兩個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)：T2和T3。T2是28SrRNA序列3′末端下游約235bp序列。T3是排列在下一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位的上游約200bp處。T2和T3都含有7個(gè)堿基的保守序列：5′-GACTTGC-3′。T2是前體rRNA轉(zhuǎn)錄的初始終止位點(diǎn)。T3是作為“失敗-保險(xiǎn)”的終止位點(diǎn)，由于rDNA轉(zhuǎn)錄單位是串聯(lián)排列的，所以“失敗-保險(xiǎn)”終止系統(tǒng)讓RNAPol分子可能在一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位上起始和轉(zhuǎn)錄。第55頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院56第五節(jié)RNA轉(zhuǎn)錄后加工原核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工mRNA轉(zhuǎn)錄后的加工rRNA轉(zhuǎn)錄后的加工tRNA轉(zhuǎn)錄后的加工真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工rRNA轉(zhuǎn)錄后的加工tRNA轉(zhuǎn)錄后的加工mRNA轉(zhuǎn)錄后的加工第56頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院57原核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工mRNA的加工：mRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，一般無需加工即具有活性，可作為翻譯的模板。但近年也發(fā)現(xiàn)要添加3’polyA的現(xiàn)象。tRNA,rRNA的加工修飾較多。rRNA的加工：rRNA基因常與一些tRNA基因混合組成一個(gè)操縱子，呈有序排列。RNA酶III對(duì)其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行切割，其產(chǎn)物還需再加工才成為成熟的rRNA，具體機(jī)制不明。第57頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院58原核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工tRNA的加工：原核生物tRNA的初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有幾種形式，1、與rRNA相連；2、相同的幾個(gè)拷貝連在一起；3、不相同的幾個(gè)連在一起。要經(jīng)過多個(gè)加工程序才能成為成熟的tRNA。參與tRNA加工的酶類有多種包括：RNA酶III，RNA酶D，RNA酶P，tRNA核苷酸轉(zhuǎn)移酶第58頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院59真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工rRNA的加工：有5s，5.8s，18s，28s四種，其中5.8s，18s，28s是由RNA聚合酶I催化一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位（中度重復(fù)序列），產(chǎn)生45srRNA前體，rRNA轉(zhuǎn)錄后加工包括前體rRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合，然后再切割和甲基化。轉(zhuǎn)錄在核仁進(jìn)行，新生的前體迅速與蛋白質(zhì)結(jié)合成前體核糖體顆粒，然后，其中的RNA經(jīng)一系列切割先產(chǎn)生18srRNA，該RNA與蛋白質(zhì)組成核糖體的小亞基。余下的部分再拼接成5.8S,28SrRNA。前體rRNA的切割在特殊序列位點(diǎn)，可能是由核仁小RNA(snoRNA)催化。前體rRNA還接受蛋氨酸提供的甲基被甲基化，在切割加工后，甲基化仍保留，甲基化的位點(diǎn)在脊椎動(dòng)物中是高度保守的。5sRNA在核質(zhì)中轉(zhuǎn)錄無需加工進(jìn)入核仁與28s，5.8srRNA及蛋白質(zhì)一起組成核糖體的大亞基，以大亞基的形式通過核孔進(jìn)入胞漿。第59頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院60真核生物RNA轉(zhuǎn)錄后的加工tRNA的加工：包括切除和堿基修飾，有些需要剪接。所有tRNA5’端比成熟tRNA多一段序列，由RNaseP切除。有些tRNA基因在反密碼環(huán)處含有內(nèi)含子，剪接加工與前體mRNA的加工有所不同：在內(nèi)含子兩端切割去除內(nèi)含子后將外顯子連接，沒有轉(zhuǎn)酯反應(yīng)。第60頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院61真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄后加工RNA聚合酶II催化轉(zhuǎn)錄，初始產(chǎn)物為核不均一RNA(hnRNA)，新生的hnRNA從開始形成到轉(zhuǎn)錄終止，就逐步與蛋白質(zhì)形成不均一核糖核蛋白顆粒，前體mRNA加工的順序是形成5’帽子結(jié)構(gòu)、內(nèi)切酶去除3’端序列、polyA聚合酶催化形成尾巴；剪接取出內(nèi)含子變成成熟的mRNA第61頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院625’帽的形成P348經(jīng)鳥苷酰轉(zhuǎn)移酶催化與另一個(gè)GTP作用在鳥嘌呤－7－甲基轉(zhuǎn)移酶作用下，以S-腺苷蛋氨酸為甲基來源再經(jīng)2’甲基轉(zhuǎn)移酶催化5’帽子的類型第62頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院63前mRNA3’端切除及加polyA尾除組蛋白的mRNA外，真核生物所有的mRNA都有3’polyA尾。polyA上游10－35bp有AAUAAA序列，下游約50bp有富含GU序列，這2處序列是剪切和加尾所需的信號(hào)。第63頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院64mRNA的剪接剪接splicing幾乎所有真核生物的核前體mRNA都有特征的GU/AG序列，稱為GU-AG規(guī)則。內(nèi)含子離3’剪切點(diǎn)20－50bp范圍內(nèi)有一個(gè)A也是不變的，稱為分支點(diǎn)。分支點(diǎn)附近也有保守序列。第64頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院65剪接過程p350由核小RNA與蛋白質(zhì)組成的核小核糖核蛋白與內(nèi)含子結(jié)合，通過snRNA中的U1snRNA與5’剪接點(diǎn)互補(bǔ)結(jié)合，U2snRNA與內(nèi)含子分支點(diǎn)序列互補(bǔ)，以及snRNP之間的相互作用，內(nèi)含子折疊，使內(nèi)含子兩側(cè)的外顯子靠近，利于剪接反應(yīng)的進(jìn)行。剪接反應(yīng)通過2次轉(zhuǎn)酯，釋放出套索狀結(jié)構(gòu)的第一內(nèi)含子。第65頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院66核mRNA從核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿mRNA在胞漿中的定位胞漿中mRNA的穩(wěn)定性第六節(jié)mRNA的轉(zhuǎn)運(yùn)及其在胞漿中的定位、穩(wěn)定性第66頁/共73頁暨南大學(xué)藥學(xué)院67核mRNA從核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿前體mRNA（hnRNA）的加工在核內(nèi)特定的亞核結(jié)構(gòu)（核基質(zhì)）中進(jìn)行。隨著新合成的mRNA鏈延長，不斷有hnRN