第五章種子檢驗(yàn)【前言】種子檢驗(yàn)（seedtesting）是保證種子質(zhì)量（種子品質(zhì)）的重要關(guān)鍵，特別是把種子作為商品流通后，種子檢驗(yàn)工作就顯得更為重要，所有種子的生產(chǎn)、加工、銷售全部過(guò)程的質(zhì)量,都須通過(guò)對(duì)種子進(jìn)行檢驗(yàn)確定（圖版4）。種子檢驗(yàn)的內(nèi)容種子檢驗(yàn)是應(yīng)用科學(xué)的方法對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的種子品質(zhì)（seedquality）進(jìn)行細(xì)致的檢驗(yàn)、分析、鑒定，以判斷其品質(zhì)優(yōu)劣的一門(mén)學(xué)科或技術(shù)。種子品質(zhì)是由種子不同特性綜合而成的概念;包括品種品質(zhì)和播種品質(zhì)兩方面內(nèi)容。品種品質(zhì)（geneticquality）是指與遺傳特性有關(guān)的品質(zhì)（即種子內(nèi)在品質(zhì)），可用真、純兩個(gè)字概括。播種品質(zhì)（sowingquality）是指種子播種后與田間出苗有關(guān)的品質(zhì)（即種子外在品質(zhì)），可用凈、壯、飽、健、干五個(gè)字概括?！罢妗笔侵阜N子真實(shí)可靠的程度，可用真實(shí)性表示?！凹儭笔侵钙贩N典型一致的程度，可用品種純度表示。“凈”是指種子清潔干凈的程度，可用凈度表示?！皦选笔侵阜N子發(fā)芽出苗齊壯的程度，可用發(fā)芽力、生活力、活力表示?！帮枴笔侵阜N子充實(shí)飽滿的程度，可用千粒重（和容重）表示?！敖　笔侵阜N子健全完善的程度，通常用病蟲(chóng)感染率表示?！案伞笔侵阜N子干燥耐藏的程度，可用種子含水百分率表示。綜上所述種子檢驗(yàn)的內(nèi)容包括種子真實(shí)性、品種純度、凈度、發(fā)芽力（生活力）、活力、千粒重、種子水分和健康狀況等。其中，純度、凈度、發(fā)芽率和水分四項(xiàng)指標(biāo)為種子質(zhì)量分級(jí)的主要標(biāo)準(zhǔn)，是種子收購(gòu)、種子貿(mào)易和經(jīng)營(yíng)分級(jí)定價(jià)的依據(jù)。種子檢驗(yàn)的方法、步驟和程序種子檢驗(yàn)分為田間檢驗(yàn)和室內(nèi)檢驗(yàn)兩部分。田間檢驗(yàn)是在作物生育期間，在采種田的田間取樣分析鑒定，主要包括檢驗(yàn)種子真實(shí)度和品種純度，病蟲(chóng)感染率，雜草與異作物混雜程度和生育情況。以品種純度為主要檢驗(yàn)項(xiàng)目。室內(nèi)檢驗(yàn)是在種子收獲脫粒以后，到現(xiàn)場(chǎng)或倉(cāng)庫(kù)直至銷售播種前抽取樣品進(jìn)行檢驗(yàn)。在種子脫粒、貯藏運(yùn)輸和播種前，由于種種原因都有可能使種子品質(zhì)發(fā)生變化。因此，必須定期對(duì)種子品質(zhì)進(jìn)行全面檢驗(yàn)。檢驗(yàn)內(nèi)容包括種子真實(shí)度、品種純度、凈度、發(fā)芽力、生活力、千粒重、含水量、病蟲(chóng)害等。種子入庫(kù)前，要重點(diǎn)檢驗(yàn)種子含水量、種子真實(shí)度。種子調(diào)運(yùn),播種前，重點(diǎn)檢查發(fā)芽力等。種子檢驗(yàn)的主要步驟可分為取樣、檢驗(yàn)和簽證。（一） 取樣：按一定規(guī)則和手續(xù)從大量的種子（或材料）中插取小部分有代表性的樣品，作檢驗(yàn)品質(zhì)之用。（二） 檢驗(yàn)：采用科學(xué)方法和必要的儀器和藥品對(duì)種子各項(xiàng)品質(zhì)進(jìn)行分析鑒定，力求獲得正確的檢驗(yàn)結(jié)果。（三） 簽證：將所檢各項(xiàng)結(jié)果填入種子檢驗(yàn)單內(nèi)，檢驗(yàn)合格的種子發(fā)給合格證明書(shū)，并定出等級(jí)，不合格的簽發(fā)不合格證書(shū)并提出處理意見(jiàn)。種子田間檢驗(yàn)與室內(nèi)檢驗(yàn)的內(nèi)容很多，必須按一定程序進(jìn)行（如圖5-1）。種品界雜子a實(shí)神迎作n度痂MH*作H?紫送撿樣品種品界雜子a實(shí)神迎作n度痂MH*作H?紫送撿樣品Vi小1K保懵Ah政型雜質(zhì)嘗 ?]試膾林晶1試翳樣風(fēng)|1送輸樣花］剛輸拊整低K?他批物沖廣?■物艸f數(shù)r實(shí)發(fā)粒品1力/I1種上活摩(ft田間小區(qū)伺定結(jié)果iff神F檢驗(yàn)程序m間題或1「室內(nèi)翰臆街聖i、w瞿史］風(fēng)樣r.分析檢輸涼合評(píng)定圖A1種子檢驗(yàn)程序品種純度的檢驗(yàn)品種純度(cultivarpurity)和種子真實(shí)性(seedgenuineness)是鑒定種子質(zhì)量的首要指標(biāo)。種子真實(shí)性是指一批種子所屬種類品種與所附文件的說(shuō)明是否一致。如不進(jìn)行種子真實(shí)性檢驗(yàn)，投入生產(chǎn)的不是所需種類、品種，往往給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)不可彌補(bǔ)的損失。如雜交水稻生產(chǎn)中，錯(cuò)把不育系當(dāng)雜交種播種造成顆粒無(wú)收，這樣的教訓(xùn)屢見(jiàn)不鮮。在蔬菜生產(chǎn)中，錯(cuò)將弱冬性的甘蘭品種當(dāng)強(qiáng)冬性品種而作春甘蘭栽培，就很易發(fā)生未熟抽苔，嚴(yán)重的會(huì)使整個(gè)生產(chǎn)將會(huì)損失殆盡。凡此種種不勝枚舉。品種純度是指品種典型一致的程度，即樣品中本品種的種子數(shù)（或植株數(shù)）占供檢樣品種子總粒數(shù)（或總株數(shù)）的百分率。品種純度高的種子，因保證了群體優(yōu)良特性的一致性，能充分發(fā)揮品種的遺傳潛力，得到高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品；而品種純度低，則常常表現(xiàn)植株生長(zhǎng)不整齊，既減少優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的產(chǎn)量又延誤農(nóng)時(shí)。品種純度檢驗(yàn)的方法有田間檢驗(yàn)和室內(nèi)檢驗(yàn)兩種。目前，純度的檢驗(yàn)仍以田間為主，室內(nèi)檢驗(yàn)為輔。一、品種純度的田間檢驗(yàn)（一） 田間檢驗(yàn)時(shí)期田間檢驗(yàn)（fieldinspection）應(yīng)在品種特征特性表現(xiàn)最明顯的時(shí)期進(jìn)行，一般一年生作物可分苗期、開(kāi)花期、果實(shí)成熟期三個(gè)階段，二年生作物可分為苗期、食用部分發(fā)育初期、食用部分成熟期、抽苔期和開(kāi)花期五個(gè)階段。絕大多數(shù)蔬菜作物的食用部分成熟期是田間檢驗(yàn)的關(guān)鍵時(shí)期，這些食用部分（器官）的形狀、大小、色澤及其他特征特性是鑒別的主要性狀。（二） 田間檢驗(yàn)的方法田間檢驗(yàn)分取樣、檢驗(yàn)、簽證三個(gè)步驟。取樣取樣前要了解良種繁殖田塊面積、耕作制度、種子播前處理，檢查品種證明書(shū)、種子來(lái)源、保管、品質(zhì)等情況，并檢查繁育技術(shù)、隔離情況，以及被檢驗(yàn)品種的特征特性和在當(dāng)?shù)氐谋憩F(xiàn)。然后進(jìn)行劃區(qū)設(shè)點(diǎn)。凡同一品種、同一來(lái)源、同一繁殖世代、同一栽培條件的相連田塊為一個(gè)檢驗(yàn)區(qū)。一個(gè)檢驗(yàn)區(qū)的最大面積為500畝。設(shè)點(diǎn)取樣量主要取決于作物種類、田塊面積（表5-1）。.備#柜籟的果律點(diǎn)敢和療歌掉規(guī)神類而K(m2)堆杵.&數(shù)機(jī)點(diǎn)fft帆株'M'叡U下<11^100)X667(201—5M)X6?75a1115S00k*.扇瑚，如花，向11擲、■?加油業(yè)，能麻JOX66T隊(duì)下<11-100)X667(101-2(10)X667(201-500}X6675K1115200n乾.綃牌冃戦、花棹地.芥菓、郷I■.偷黃.番茄、茄子、神蝸.眞瓜5X6S7以下(6-153X66710000m1以上.増M%€6759?14増加1由00*-100注‘啞沖覇墮田，帝，田，蜘交水精制神出，取樣點(diǎn)散如俗，取樣點(diǎn)要均勻設(shè)置，按田塊和面積大小的不同，采用如下方式（圖5-2）：對(duì)角線式取樣點(diǎn)分布在一條或兩條對(duì)角線上，等距設(shè)點(diǎn)，適用于方形或長(zhǎng)方形地塊。梅花形式在田塊四角、中心共設(shè)5點(diǎn)，適用于較小的方形或長(zhǎng)方形地塊。棋盤(pán)式在田塊的縱橫每隔一定距離設(shè)1點(diǎn)，適用于不規(guī)則地塊。大壟（畦）取樣在壟（畦）作地塊，先數(shù)總壟數(shù)，再按比例每隔一定的壟（畦）上設(shè)1點(diǎn)，各壟（畦）的取樣點(diǎn)要錯(cuò)開(kāi)。檢驗(yàn)設(shè)點(diǎn)取樣后，根據(jù)鑒定時(shí)品種應(yīng)具備的主要特征特性逐點(diǎn)逐株觀察分析鑒定。將本品種、異品種、異作物、有害雜草、感染病蟲(chóng)株數(shù)分別記載，然后計(jì)算百分率。本品種株（穗）數(shù)品種純度（%）= x100供檢本作物總株（穗）數(shù)異品種株（穗）數(shù)異品種（%）= xlOO供檢本作物總株（穗）數(shù)異作物株（穗）數(shù)TOC\o"1-5"\h\z異作物（%）= X100供檢本作物總株（穗）數(shù)+異作物株（穗）數(shù)雜草株（穗）數(shù)雜草（%）= X100供檢本作物（穗數(shù)）+雜草株（穗）數(shù)雜交制種田，應(yīng)計(jì)算父、母本雜株散粉率及母本散粉株率：母本散粉株數(shù)母本散粉株（%）= X100供檢母本總株數(shù)父（母）本散粉雜株數(shù)父（母）本散粉雜株（%）= X100供檢父（母）本株數(shù)）在檢驗(yàn)點(diǎn)外，有零星發(fā)生的檢疫性雜草，病蟲(chóng)感染株，要單獨(dú)記載。3.簽證分析鑒定完畢后，將每個(gè)檢驗(yàn)點(diǎn)的各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的平均結(jié)果，填寫(xiě)在田間檢驗(yàn)結(jié)果單上（表5-2），并按種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)提出種子的等級(jí)。如果是原種或雜種品種的親本，則應(yīng)提出建議，表明能繁殖，去雜株后可繁殖以及不能留種三種具體意見(jiàn)。繁神面積嶇樣點(diǎn)數(shù)品種或堀合周附補(bǔ)：監(jiān)引間茹仲飩度（30￥品伸（憑）肝fl：佝4%）親#E田間傳驪結(jié)果分說(shuō)蟬度.達(dá)TU ，既理怛或庶見(jiàn)府戦州門(mén)蘭荀tn 峻弗員，檢羚口期； 年 月 日"2出可檢駐餡果舉t農(nóng)H：物程了槍疝規(guī)程.imm字第號(hào)二、品種純度的室內(nèi)檢驗(yàn)品種純度的室內(nèi)檢驗(yàn)（laboratorytest）對(duì)保證原種和良種的質(zhì)量也是很重要的。因?yàn)樵谠N的繁殖過(guò)程中，雖然逐株進(jìn)行了鑒定，保證了原原種植株是高純度的，但隔離條件收獲、脫粒、貯藏等方面，都不易得到絕對(duì)的保證。良種雖然直接用于商品生產(chǎn)，不影響下一代，但如果在良種采收或采收后的一系列過(guò)程中，發(fā)生了生物學(xué)和機(jī)械混雜而未及時(shí)檢驗(yàn)出來(lái)，同樣將會(huì)給生產(chǎn)造成不可估量的損失。（一）傳統(tǒng)的鑒定技術(shù)種子形態(tài)鑒定種子形態(tài)鑒定是用肉眼或借助放大鏡觀察種子的形狀、大小、色澤、花紋和種皮表面結(jié)構(gòu)特征（光滑與粗糙，有無(wú)突起，脊及多少，有無(wú)刺毛及多少等）。鑒定時(shí)須有標(biāo)準(zhǔn)品種的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品種種子彩色圖譜及描述作依據(jù)。一般可以鑒定至種，少數(shù)可以鑒定至變種，個(gè)別的也能鑒定至品種。幼苗形態(tài)鑒定各類種子都可利用幼苗形態(tài)鑒定法進(jìn)行品種純度檢驗(yàn)。禾谷類可利用芽鞘顏色等性狀；十字花科可利用子葉形態(tài)，真葉形狀和茸毛以及顏色等性狀。鑒定時(shí)，隨機(jī)取100粒種子，2-4次重復(fù)進(jìn)行光下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗出現(xiàn)固有色澤和特征時(shí)，鑒定和計(jì)算品種純度。解剖鑒定各種作物不同種或品種類型的種子，其種皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)和大小等均有不同。據(jù)此可采用解剖法加以鑒別。如豆類種子可從種皮柵狀細(xì)胞大小鑒別品種；十字花科蕓苔屬可根據(jù)縱切片和橫切片細(xì)胞形狀和大小鑒別不同的種;蘿卜可根據(jù)第一層表皮細(xì)胞形狀、大小鑒別品種;蔥類可根據(jù)表皮細(xì)胞外形的波紋鑒定不同的種。據(jù)鄭成超、張憲曾報(bào)道（1989），將小麥品種種被厚度、糊粉層厚度、種被+糊粉層厚度和種被/糊粉層厚度4項(xiàng)指標(biāo)結(jié)合可將各品種分開(kāi)。（二）現(xiàn)代鑒定技術(shù)1.化學(xué)鑒定（1）石炭酸（C6H5OH）染色法石炭酸又名苯酚，其染色的原理是單酚、雙酚、多酚在酚酶的作用下氧化成為黑素(C77H98O55N14S),由于每個(gè)品種皮殼內(nèi)酚酶活性不同，在石炭酸作用下呈現(xiàn)深淺不同的顏色。該法主要適用于小麥和水稻。⑵愈創(chuàng)木酚(C7H8O2)法其原理是豆類種子的種皮內(nèi)有過(guò)氧化物酶，能使過(guò)氧化氫分解而放出氧，使愈創(chuàng)木酚氧化而產(chǎn)生紅棕色的4-鄰甲氧基酚，由于不同品種過(guò)氧化物酶的活性不同，溶液顏色也有深淺之分。(3)堿液(NaOH或KOH)處理可用于十字花科種子真實(shí)性鑒定。取試樣兩份，各100粒，分別放在直徑8mm的小試管中，加入10%NaOH或KOH溶液3滴，使種子浸泡在溶液中，然后將試管放在25°C?28°C溫度下，經(jīng)2小時(shí)，會(huì)顯出不同的顏色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品種的顯色情況統(tǒng)計(jì)本品種種子數(shù)，并計(jì)算品種純度。熒光鑒定熒光分析法的原理是利用紫外線具有光激發(fā)現(xiàn)象，即紫外線照射物體后將不可見(jiàn)的短光波轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢?jiàn)的長(zhǎng)光波。其發(fā)光的持久性有兩種類型：一種叫熒光現(xiàn)象，紫外光連續(xù)照射后物體能發(fā)光，當(dāng)停止照射時(shí)，被激發(fā)的光也隨著停止。另一種叫磷光現(xiàn)象，當(dāng)紫外線停止照射后，激發(fā)生成的光在或長(zhǎng)或短時(shí)期內(nèi)可繼續(xù)發(fā)光。由于不同種類或品種種子的組織結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的不同，紫外線照射時(shí)發(fā)出可見(jiàn)光的顏色和紫外線停止后可見(jiàn)光持續(xù)的時(shí)間是不同的，可以用此原理來(lái)判斷種子的品種純度。電泳鑒定近年來(lái)，電泳法發(fā)展較快，應(yīng)用廣，準(zhǔn)確度高，已成為種子純度鑒定的主流，有較強(qiáng)的生命力。電泳法最初采用淀粉凝膠電泳(SGE)。近年來(lái)發(fā)展到利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)。最近，等電聚焦(IEF)電泳技術(shù)又得到迅速發(fā)展。聚丙烯酰胺凝膠電泳是從種子中提取的醇溶蛋白在PH為3.2條件下進(jìn)行電泳分析，如小麥、大麥，用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)條帶與遺傳基因有關(guān)，即指紋(fingerprints)，由單粒種子所產(chǎn)生的指紋可鑒定品種的真實(shí)性和純度。等電聚焦電泳法是用等電聚焦電泳分離種子蛋白的印漬來(lái)鑒定品種純

度的一條新途徑。將非變性等電聚焦電泳凝膠分離種子蛋白酶，然后將這些電泳分離出來(lái)的種子蛋白吸附在可移動(dòng)的膜上形成印漬。一次電泳即可進(jìn)行多種酶的染色分析。電泳法的基本原理是利用不同帶電質(zhì)點(diǎn)在一定電場(chǎng)中遷移速度不同進(jìn)行分離。凝膠電泳除電荷效應(yīng)外，還有分子篩效應(yīng)，使顆粒小、形狀為圓球形的分子移動(dòng)快,而顆粒大、形狀不規(guī)則的分子不易通過(guò)凝膠孔洞則移動(dòng)緩慢。因此，不同大小形狀的分子就固定在支持物（凝膠）的不同部位，形成了一定的譜帶。用電泳法鑒定品種純度的關(guān)鍵是要找到本品種典型的標(biāo)志譜帶（圖5—3）。凈電荷瑋叟度曖25凈電荷瑋叟度曖25圉5-3電泳原建1.為在自主溶液里冷電間作用12-為在姦帶或白也笛液羊電荷英啓電點(diǎn)昨用'敦有拄素內(nèi)拆岐眞棉度凝瞠里做

*'■點(diǎn)小抽作明異.為擊而備酸體凝膛甲一演電荷幡分聲匕：、的作用円.為覧丙墀醜嗟離股甲單洛太小的作用4.高效液相色譜鑒定電泳技術(shù)在多種作物純度檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。但對(duì)于那些親緣關(guān)系較近的品種之間，如大白菜的一些品種，電泳法較難得到滿意效果。而利用高效液相色譜法可得到理想結(jié)果。原理是使具有一定遺傳特性的品種組成蛋白質(zhì)，在色譜上形成了保留時(shí)間和大小不同的峰構(gòu)成的指紋，不同品種間遺傳特性差異使其具有不同的圖譜，從而把品種區(qū)別開(kāi)來(lái)。5.分子生物學(xué)鑒定分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展使種子純度鑒定進(jìn)入了基因水平。它以種子的DNA片段(基因)直接作為檢測(cè)對(duì)象，有很高的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和重復(fù)性。其中以RFLP、PCR、RAPD、單克隆抗體等實(shí)驗(yàn)技術(shù)有較好的應(yīng)用前景。RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism)法，即限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性。其原理是，不同遺傳特性植物、DNA不同部位具有多態(tài)性，這些專一堿基序可被限制內(nèi)切酶所識(shí)別。RFLP技術(shù)同生理生化技術(shù)鑒定品種及其純度相比具有這樣一些相似的特點(diǎn)。如共顯性，缺乏環(huán)境效應(yīng)和基因多效性對(duì)農(nóng)藝性狀的影響。然而，它的特殊優(yōu)點(diǎn)在于：首先，植株的任何組織在任何發(fā)育時(shí)期均可用于分析。其次，既能探索品種間細(xì)胞核基因方面的差異，又能揭示母體細(xì)胞質(zhì)方面的非孟德?tīng)栠z傳因子的影響；每一位點(diǎn)存在多型性，遺傳穩(wěn)定。第三，由于探針數(shù)目和內(nèi)切酶種類組合方式理論上不可計(jì)數(shù)，因而其潛在鑒別能力是不可估量的。第四，分離的DNA在適宜條件下幾年內(nèi)穩(wěn)定不變，從而有可能從標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品種制備大量DNA，以供長(zhǎng)期使用。DNA樣品儲(chǔ)藏期遠(yuǎn)遠(yuǎn)長(zhǎng)于個(gè)體生活史，這對(duì)于作追溯性或仲裁性鑒定大有益處。此法的不足之處是客觀存在的。比如缺乏適宜的探針，以“探測(cè)”植物染色體組中變異豐富的區(qū)域。另外，這種方法比較繁瑣，價(jià)格昂貴，而且需要較多的設(shè)備和技術(shù)水平高的分析人員，因此不適于推廣應(yīng)用以及批量商品種子的純度鑒定。PCR(PolymeraseChainReaction)法，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，又叫特異性DNA倍增技術(shù)，由于此法不需要放射性標(biāo)記(探針)，能夠從復(fù)雜的DNA分子群體中選擇性地復(fù)制一段特異的序列，使某一DNA片段得到特異性的擴(kuò)增。這一方法在很大程度是改變了科研中DNA分析的方法，是DNA研究方法的一次革命。近年來(lái)，這一技術(shù)得到了不斷的完善和越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，并已經(jīng)成為種子純度鑒定的一種非常有效的工具。擴(kuò)增后的DNA片段經(jīng)瓊脂糖電泳進(jìn)行分離，比較來(lái)自不同品種的電泳譜帶，或與標(biāo)準(zhǔn)品種進(jìn)行比較，即能鑒別品種和純度檢測(cè)。用PCR技術(shù)檢測(cè)種子純度與RFLP技術(shù)相比，具有快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)（不需放射性標(biāo)記）、特異性高的優(yōu)點(diǎn)。RAPD（RandomAmplifiedPolymorphicDNA）法，是用隨機(jī)序列的9一10個(gè)核苷酸的引物，對(duì)基因組的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再通過(guò)PAGE或瓊脂糖凝膠電泳分離，經(jīng)漠化乙錠（EB）染色來(lái)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物DNA片段的多態(tài)性。RAPD所用的引物序列各不相同，對(duì)于任一特定引物，當(dāng)它在植物DNA的兩條鏈上找到同源區(qū)域時(shí)，會(huì)與之結(jié)合并在PCR反應(yīng)中擴(kuò)增基因組DNA。由于不同植物DNA與引物結(jié)合的區(qū)域以及這些區(qū)域間的距離不同，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的片斷大小表現(xiàn)為多態(tài)性。提供的信息可作為基因鑒定的客觀標(biāo)記。與PCR相比，RAPD技術(shù)可以在對(duì)品種（或植物）沒(méi)有任何分子生物學(xué)研究的情況下，對(duì)其進(jìn)行DNA多態(tài)性擴(kuò)增。RAPD圖譜與RFLP相比也有明顯的優(yōu)點(diǎn),比如人工合成的隨機(jī)引物可在實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行交換，這要比克隆DNA片段作為探針要容易和迅速得多；可以免去分子雜交手續(xù)；操作可采用自動(dòng)化，因而RAPD指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用范圍廣，近年來(lái)已經(jīng)得到迅速發(fā)展和應(yīng)用，為高精度種子檢測(cè)展示了美好的前景。但是，由于種子純度檢測(cè)的特殊性——逐粒分析，也使得其和RFLP一樣顯得繁瑣和昂貴（圖5—4）。種子播種品質(zhì)的檢驗(yàn)一、扦樣扌千樣（sampling）又稱取樣或抽樣。扌千樣是種子室內(nèi)檢驗(yàn)的首要環(huán)節(jié)，扌千樣的目的是從一批大量的種子中，扦取適當(dāng)數(shù)量的有代表性的送驗(yàn)樣品供檢驗(yàn)之用。扦樣是否正確，樣品是否有代表性，直接影響到種子檢驗(yàn)結(jié)果的正確性。樣品的組成扦取后的樣品按其組成不同，可分為初次樣品、混合樣品、送驗(yàn)樣品和試驗(yàn)樣品。初次樣品(primarysamples)又稱小樣，是指從一批種子的某個(gè)點(diǎn)，用扌千樣器或徒手每次扦出來(lái)的少量種子?；旌蠘悠?compositesamples)又稱原始樣品，是指從一批種子中所扌千出來(lái)的全部初次樣品合并混和而成的樣品。送驗(yàn)樣品(submittedsample)又稱平均樣品，是指從混合樣品中分取一部分相當(dāng)數(shù)量作檢驗(yàn)用的樣品。試驗(yàn)樣品(workingsample)簡(jiǎn)稱試樣，由送驗(yàn)樣品中分出一定量種子，供檢驗(yàn)種子品質(zhì)的個(gè)別項(xiàng)目用的樣品。扦樣方法扦樣原則：樣品必須由檢驗(yàn)人員親自扦取，扦取前必須了解種子來(lái)源、產(chǎn)地、品種、運(yùn)輸和保管情況，供分批時(shí)參考。種子批和檢驗(yàn)單位的劃分：所謂“一批”種子，必須是屬于同一品種，同年同季收獲，同一繁殖世代和同一產(chǎn)地且品質(zhì)狀況基本一致者。一批種子(不再分檢驗(yàn)單位的)只扦取一個(gè)平均樣品。當(dāng)一批種子數(shù)量過(guò)大時(shí)，則應(yīng)劃分成若十個(gè)檢驗(yàn)單位。一個(gè)檢驗(yàn)單位分別扦取一個(gè)平均樣品。扦取初次樣品：在批和檢驗(yàn)單位劃分后，根據(jù)一批或一個(gè)檢驗(yàn)單位的種子數(shù)量，首先決定應(yīng)扦取樣品的數(shù)量，再按種子的存放情況，決定扦樣的部位和每一部位扦樣點(diǎn)數(shù)，最后從各個(gè)部位點(diǎn)扦取初次樣品。(1)袋裝種子扦樣法扦樣的袋數(shù)(扦樣點(diǎn)數(shù))取決于總袋數(shù)，如表5-3所示。<5-3種子幷樣袋被種子寢払樸樣套散種子伐數(shù)樸樣捲牧心514^612010-15102312ai-ioo%InEl?1帥36?叫120K上扣在調(diào)種數(shù)量多，時(shí)間緊迫時(shí)，可酌情減少拝樣袋數(shù)，但不能少于總袋數(shù)的5%o種子袋堆垛時(shí)，各抨樣點(diǎn)應(yīng)均勻地分布在上、中、下各層，一般分布形式如圖5—5o????.圖5-5樣袋分布種子袋不是堆垛而是平放時(shí)，可間隔一定袋數(shù)確定各取樣袋。扦樣時(shí)，中小粒種子用袋裝拝樣器從袋口的一角斜插向袋的對(duì)角。大粒種子可采用相適應(yīng)的拝樣器或倒包，徒手扦樣等方法拝樣。徒手抨樣時(shí)應(yīng)注意每次用手取種子的數(shù)量，以保證各個(gè)初次樣品的量大致相等。（2）散裝種子拝樣法在已劃分的檢驗(yàn)單位內(nèi)，按種子堆的大小劃分檢驗(yàn)區(qū)，每區(qū)面積不得超過(guò)25m2。每區(qū)的中心和四角（距邊沿50cm）各設(shè)一點(diǎn)，共5個(gè)扦樣點(diǎn),同一檢驗(yàn)單位內(nèi)的相鄰區(qū)的角點(diǎn)可以共同，如圖5—6。（三）樣品的配制1.混合樣品的配制在各點(diǎn)扦取若干初次樣品時(shí)，注意觀察每次扦取的初次樣品在純度、凈度、顏色、氣味和水分等方面有無(wú)明顯差異，如無(wú)差異就可將一個(gè)檢驗(yàn)單位的全部初次樣品均勻混合在一起，便組成了混合樣品，如發(fā)現(xiàn)初次樣品間的品質(zhì)有差異，則應(yīng)作為不同的檢驗(yàn)單位處理，即分別將有差異的若十初次樣品組成不同的混合樣品。2.送驗(yàn)樣品的配制各種作物送驗(yàn)樣品的規(guī)定量不同，并且往往小于混合樣品，這就要求從混合樣品中分出縮小的樣品來(lái)。從混合樣品中分出一定數(shù)量送檢驗(yàn)室供各項(xiàng)檢驗(yàn)分析用的種子，即送驗(yàn)樣品。當(dāng)混合樣品較少而與規(guī)定的送檢樣品數(shù)量相符時(shí)，就可把此樣品作為送驗(yàn)樣品。種子批（seedlot）和樣品的重量規(guī)定見(jiàn)RFLF RAPD分離|分離DN；贏必酶訪一HF~DMA擴(kuò)增瓊脂慵程膠電泳 丨瓊脂補(bǔ)曬睦電泳Southern轉(zhuǎn)移 拍照DMA標(biāo)記DNA雜交沖洗及X-膠片曝尤圖5-4RFLP和RAPD技術(shù)操作程序單克隆抗體法是根據(jù)蛋白質(zhì)與其抗體之間免疫反應(yīng)專一性來(lái)鑒別不同遺傳性的種子?；痉椒ㄊ请娪痉蛛x種子蛋白，純化某一品種的專一的種子蛋白組分。從免疫動(dòng)物脾臟中分離出能合成抗體的淋巴細(xì)胞分別培養(yǎng)為細(xì)胞株。篩選出合成該專一蛋白的細(xì)胞株，大量繁殖得到有能量的單克隆抗體，用此單克隆抗體處理硝酸纖維素膜，將待鑒定的種子蛋白液直接點(diǎn)在這種硝酸纖維膜上，經(jīng)酶標(biāo)第二抗體處理，酶染色即顯示專一蛋白帶。此種方法不足之處是，單克隆抗體細(xì)胞株篩選繁瑣，但一經(jīng)篩選成功，即可快速、方便鑒定種子純度。由此可見(jiàn)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，尤其是生物化學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，種子純度檢驗(yàn)方法已經(jīng)從傳統(tǒng)的形態(tài)解剖鑒別發(fā)展到分子水平和基因水平，經(jīng)歷了一個(gè)由表到里、由粗到細(xì)、由簡(jiǎn)單到復(fù)雜而精確的過(guò)程，檢驗(yàn)技術(shù)向深入細(xì)致和綜合技術(shù)應(yīng)用的方向發(fā)展?？梢赃@樣講，對(duì)于任何一個(gè)品種或雜交種，其真實(shí)性和純度都能被鑒定出來(lái)。但在一般的種子檢驗(yàn)中，有時(shí)用一種方法往往難以準(zhǔn)確鑒定或把幾個(gè)品種分開(kāi)，若選用數(shù)種方法組合起來(lái)，可能比較容易獲得成功。任何方法在應(yīng)用中都表現(xiàn)出明顯的優(yōu)點(diǎn)和不足之處，關(guān)鍵是選用適當(dāng)?shù)姆椒āｈb定品種的方法要求簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)、準(zhǔn)確，但并不是同等重要，關(guān)鍵是準(zhǔn)確，同時(shí)應(yīng)根據(jù)具體情況各有所側(cè)重。只要是能夠準(zhǔn)確進(jìn)行品種鑒定的方法，都是好方法，因此傳統(tǒng)的鑒定法并不過(guò)時(shí)。在種子純度檢驗(yàn)工作中，目前最有推廣價(jià)值的是種子蛋白質(zhì)電泳法，對(duì)于那些因親緣關(guān)系近用蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）不能鑒別的品種，可用等電聚焦或雙向電泳方法進(jìn)一步檢驗(yàn)。對(duì)于經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)，種子交易雙方仍有較大爭(zhēng)議，或出現(xiàn)重大種子純度責(zé)任事故而需進(jìn)行仲裁的，目前既可以通過(guò)規(guī)范的田間小區(qū)種植，也可以通過(guò)RAPD技術(shù)提供檢驗(yàn)依據(jù)。分取送驗(yàn)樣品有分樣器法和分樣板法。分樣器有鐘鼎式和橫格式分樣器，前者適用于小粒種子，后者對(duì)大小不同的種子均適用。分樣板法也叫四分法。無(wú)論采用哪種分樣方法，目的是既分樣均勻有代表性，又達(dá)到規(guī)定的數(shù)量。每個(gè)混合樣品分取兩份送驗(yàn)樣品，一份供檢驗(yàn)凈度（包括純度、發(fā)芽力、生活力、

活力、千粒重等）用，可裝入布裝或紙袋內(nèi)；另一份供水分、病蟲(chóng)害測(cè)定和保留樣品用，其重量可比凈度檢驗(yàn)少一半，該份樣品應(yīng)密封包裝，并置于防濕的容器內(nèi)。容器應(yīng)貼好標(biāo)簽。送驗(yàn)樣品連同拝樣證明書(shū)（表5—5）在24小時(shí)內(nèi)送驗(yàn)。気5-5戶耳聞等受校帕位茜爵I 批號(hào)I樸『存故虎由1 枇重：前成力Ki htf?nt.作物忡眞r i ㈱淼華怛r繁危也代I WTMia嘩：收篌年陽(yáng)1 殲股祥新市尊：品神名榕， 糧孰喚日，殲 I.慚段料門(mén)I 受檢部門(mén)：一區(qū)五點(diǎn)二區(qū)八點(diǎn)一區(qū)五點(diǎn)二區(qū)八點(diǎn)圏46械裝拝樣點(diǎn)分布種子堆高不足2m時(shí)，分上下兩層；堆高2-3m時(shí)，分上、中、下三層。上層距頂部10-20cm，中層在種子堆中部，下層距底部5-10cm。分層定點(diǎn)后，用散裝扦樣器由上到下逐層扦取。二、種子凈度分析種子凈度（seedcleanliness）是指樣品中除去雜質(zhì)和其它植物種子后，留下的本作物（種）凈種子重量占種子樣品總重量的百分率。種子的凈度是種子播種品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，是種子分級(jí)的依據(jù)。凈度分析的目的首先是要了解一批種子的真實(shí)重量，為計(jì)算種子用價(jià)（種子用價(jià)=凈度x發(fā)芽率）提供一項(xiàng)指標(biāo)。其次是了解一批種子中其它植物種子及無(wú)生命雜質(zhì)的種類和含量，以便采取適當(dāng)?shù)那謇矸椒ǎ岣叻N子批的播種品質(zhì)。凈度分析有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表5—6。三、種子發(fā)芽力、生活力、活力和千粒重檢驗(yàn)種子發(fā)芽力（germinability）、生活力（viability）、活力（vigour）均是種子生命狀況的表現(xiàn)。干粒重則間接地反應(yīng)了種子的生命狀況。發(fā)芽力高、生活力、活力強(qiáng)的種子一般千粒重也高。（一） 種子發(fā)芽力檢驗(yàn)種子發(fā)芽力是指種子在適宜條件下發(fā)芽并長(zhǎng)成正常植株的能力，通常用發(fā)芽勢(shì)（germinatingenery）和發(fā)芽率（germinatingpercentage）表示。發(fā)芽勢(shì)是指發(fā)芽試驗(yàn)初期（規(guī)定日期內(nèi)）正常發(fā)芽的種子數(shù)占供試種子數(shù)的百分率。種子發(fā)芽率是指發(fā)芽試驗(yàn)終期（規(guī)定日期內(nèi)）全部正常發(fā)芽種子數(shù)占供試種子數(shù)的百分率。種子發(fā)芽勢(shì)高，表示種子活力強(qiáng)，發(fā)芽整齊，田間出苗一致。種子發(fā)芽率高，表示有活力的種子多，播種后出苗率可能高。發(fā)芽試驗(yàn)通常是在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的。因?yàn)樵谔镩g條件下試驗(yàn)受環(huán)境影響大，其試驗(yàn)結(jié)果重演性差。而在實(shí)驗(yàn)室可控制適宜的標(biāo)準(zhǔn)化條件，使試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可W靠。（二） 種子生活力檢驗(yàn)種子生活力是指種子發(fā)芽的潛在能力或種胚所具有的生命力。一般情況下，種子生活力可以通過(guò)發(fā)芽力表示。但是由于低溫潮濕條件下收獲的某些作物（如黃瓜、甜瓜等）往往未達(dá)生理成熟，還處于生理休眠狀態(tài)，某些作物種子的種被或稃殼不透氣（如禾本科）和種皮不透水（如小粒豆科種子、棉子等），使得在一般發(fā)芽條件下具有生命力的種子也不能及時(shí)發(fā)芽。因此通過(guò)一定的技術(shù)手段來(lái)測(cè)定種子的生活力，具有實(shí)踐意義。種子生活力測(cè)定的方法較多，歸納起來(lái)有三類：物理和化學(xué)法，包括凡是能夠使種子潛在的發(fā)芽力發(fā)揮出來(lái)，促使種子萌發(fā)的各項(xiàng)措施，如干熱處理、低溫處理、溫湯浸種、急劇變溫處理，剝?nèi)ワ麣ず凸N皮、機(jī)械損傷種皮，硫酸處理、過(guò)氧化氫處理、硝酸和硝酸鉀處理、赤霉素(GA3)處理、預(yù)先洗滌處理等，均可作為測(cè)定種子生活力的預(yù)措方式。針對(duì)種子不能及時(shí)萌發(fā)的原因，采用相應(yīng)的預(yù)處理后再于標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)芽條件下讓其萌發(fā)，這就可以避免由于各種原因造成的有生命力種子不能萌發(fā)的情況。生物化學(xué)方法。此法的原理是利用活種子與死種子其細(xì)胞的化學(xué)成分功能上的差別，以特定的化學(xué)藥劑處理，從生化反應(yīng)的結(jié)果來(lái)間接判別死種子與活種子。生物化學(xué)方法主要有四唑染色法和靛紅染色法。四卩坐法測(cè)定的原理是胚的活細(xì)胞里含有脫氫酶，具有脫氫還原的作用，被種子吸收的C19H15N4C1(2,3,5-氯化三苯四氮坐，簡(jiǎn)稱四坐(TTC或TZ)，為白色或淡黃色的粉劑，有微毒，對(duì)光敏感，容易被光所分解，故應(yīng)用棕色瓶裝盛，并用黑紙包裝〕參與了活細(xì)胞的還原作用，被還原成為紅色、穩(wěn)定、不擴(kuò)散和不溶于水的基甲月替，而無(wú)生活力的種子則無(wú)此反應(yīng)而不染色。由此可按胚組織的染色情況區(qū)別有生活力和無(wú)生活力的種子。靛紅染色法的原理是由于胚的活細(xì)胞原生質(zhì)具有選擇透性，靛紅(C16H8O2N2C(03Na)2〕，不能滲入活細(xì)胞內(nèi)部而不著色，死細(xì)胞原生質(zhì)則無(wú)功能而被染成藍(lán)色，因此可根據(jù)染色情況判斷種子生活力的有無(wú)或強(qiáng)弱。靛紅染色法適用于豆類、谷類、棉花、瓜類和林木等大粒種子種類。軟X-射線造影法。此法的原理是根據(jù)活組織細(xì)胞膜具有選擇透性，可阻止重金屬(Ba++)滲入，而死傷組織則失去選擇透性的能力，重金屬(Ba++)能滲入。把這種滲鋇狀況不同的種子置于軟X-射線下照射造影時(shí)，在熒光屏上，凡是死傷組織，由于滲入的鋇離子吸收了X-射線，而呈現(xiàn)不透明的暗影，活組織則較透明且較亮。經(jīng)顯影定影后，在底片（負(fù)片）上死組織則較為透明，而活組織較為黑暗。在印成相片后，則死傷組織較為黑暗，而活組織較為白亮，借此可以鑒別死活，測(cè)定種子生活力。（三）種子活力檢驗(yàn)種子活力的概念是指種子抵抗不利環(huán)境和生長(zhǎng)潛力的特性。種子活力是種子質(zhì)量的一個(gè)綜合指標(biāo)，是種子所有生理特性的總和。由于各種類型種子其單粒重、種皮厚度、發(fā)芽速度差異較大，因此，測(cè)定方法也有所不同。目前，國(guó)內(nèi)外主要有以下幾種：外部形態(tài)法（目測(cè)法）根據(jù)種子的特點(diǎn)，觀察其飽滿度、色澤、氣味、千粒重等。顆粒飽滿、千粒重大、外觀色澤光亮、呈現(xiàn)其固有色澤、無(wú)任何異味、胚呈乳白色，一般為活力強(qiáng)的種子。逆境試驗(yàn)法原理是在非最適條件下或逆境條件下，高活力種子表現(xiàn)出較高生命力。Woodstock（1976）,JekronyandEgli（1977）用加速老化法預(yù)測(cè)種子活力，即在高溫高濕（40?45°C、100%RH）條件下將種子處理一定時(shí)間后進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。在這種情況下，只有活力高的種子發(fā)芽并形成正常幼苗。冷凍試驗(yàn)是模擬早春田間條件，先把種子低溫（10C）下培養(yǎng)一段時(shí)間，然后轉(zhuǎn)移到良好條件下發(fā)芽，經(jīng)冷凍處理后，低活力種子受低溫抑制作用較敏感而遭凍害，也易受真菌危害，高活力種子抵抗能力強(qiáng)，冷凍處理后仍能出苗。熒光法種子在老化過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一系列生化變化，導(dǎo)致種子化學(xué)成分在質(zhì)和量上發(fā)生變化。不同活力的種子在紫外線激發(fā)下會(huì)產(chǎn)生不同熒光反應(yīng)。紫外熒光法所用的儀器簡(jiǎn)單，只需一臺(tái)紫外熒光燈就可以進(jìn)行，不需試劑，適于檢測(cè)壽命短、活力差別較大的種子。軟X-射線造影法此法不僅可檢測(cè)種子生活力，而且可根據(jù)顯影后圖像的完整度、清晰度來(lái)鑒別種子活力的高低?；盍Ω叩姆N子，圖像完整、清晰。乙烯含量法把種子浸泡在密閉容器中，24h后用注射器抽取一定體積的浸泡液，用氣相色譜儀測(cè)定乙烯含量，含量越高，活性越強(qiáng)。電導(dǎo)法電導(dǎo)法是一種最快速、簡(jiǎn)便的測(cè)定種子活力的方法，活力不同的種子，細(xì)胞膜透性有差異。浸泡一定時(shí)間后，由于種子質(zhì)量不同，內(nèi)含物滲出量不同?；盍Φ偷姆N子滲出液多，電導(dǎo)率高?；盍Ω叩姆N子，細(xì)胞膜控制能力強(qiáng)，外滲液少，電導(dǎo)率低。因?yàn)榧?xì)胞膜系統(tǒng)的完整性是種子活力基礎(chǔ)，物質(zhì)交換、能量傳遞等重要生化現(xiàn)象都在細(xì)胞膜上進(jìn)行，膜結(jié)構(gòu)完整性喪失，必然引起種子電解質(zhì)滲漏。種子變劣時(shí)，細(xì)胞膜損傷大，浸泡后析出電解質(zhì)多，因而測(cè)得電導(dǎo)率高，電導(dǎo)率大小與種子活力呈負(fù)相關(guān)。呼吸強(qiáng)度法種子吸脹2?4h后,用呼吸計(jì)或氧電極測(cè)定種子CO2的呼吸量或CO2的放出量,計(jì)算呼吸強(qiáng)度，強(qiáng)度越高，活力越高。ATP含量法種子萌發(fā)時(shí)呼吸旺盛，因而分解產(chǎn)生ATP多，種子活力越高，ATP產(chǎn)量越大。所以，用熒光光度計(jì)測(cè)定ATP含量，可以測(cè)定種子活力。四唑測(cè)定法四卩坐法不僅能測(cè)定種子生活力，而且可以根據(jù)胚部染色部位以及染色程度的不同來(lái)判斷種子活力的高低，這種四坐染色法稱為“四坐定位圖形法"(topographictetrazoliumtest)o這種方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，還可避開(kāi)環(huán)境的影響，也不受休眠的限制。Moore(1973)認(rèn)為，四唑染色的所在部位比范圍大小更重要。因?yàn)樵谥饕课患词箵p傷的范圍很小，但種子的劣變程度是相當(dāng)嚴(yán)重的。在種子活力測(cè)定的各種方法中，物理方法簡(jiǎn)便、快速、對(duì)種子損壞輕且用種量少。生理方法中，電導(dǎo)法快速可同時(shí)測(cè)大量樣品。發(fā)芽試驗(yàn)法比較直觀，指標(biāo)明確，但需時(shí)間長(zhǎng)。生化法速度快、準(zhǔn)確、精度高，不受時(shí)間、季節(jié)限制。逆境試驗(yàn)不是一個(gè)孤立的方法，處理本身得不到指標(biāo)而是為了加大種子活力差異，便于測(cè)定?？梢?jiàn)，不同種子活力測(cè)定方法各有特點(diǎn)，在生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)不同情況選擇應(yīng)用。(四)千粒重測(cè)定千粒重是指含有規(guī)定水分的1000粒種子的重量，以克為單位。千粒重是種子充實(shí)、飽滿、大小、均勻度的綜合表現(xiàn)。千粒重可用于計(jì)算單位重量粒數(shù)和播種量等。1-實(shí)測(cè)水分%千粒重(規(guī)定水分)(g)=實(shí)測(cè)千粒重(g)x 1-規(guī)定水分％四、種子水分和種子健康測(cè)定種子水分和種子健康測(cè)定所用試樣均取自于密封好的平均樣品。(一)種子水分測(cè)定種子水分(seedmoisturecontent)又稱種子含水量，是指種子樣品中所含水分的重量占樣品重量的百分率。種子含水量與種子有效貯藏年限有直接的關(guān)系，超過(guò)安全含水量的種子在貯藏期間，會(huì)因呼吸旺盛消耗養(yǎng)分，造成發(fā)芽，同時(shí)因?yàn)榘l(fā)熱使微生物大量繁殖，導(dǎo)致種子霉變等。因此必須將種子含水量控制在安全范圍內(nèi)。種子水分的測(cè)定方法很多，目前常用烘干減重法和電子儀器測(cè)定法。(二)種子健康測(cè)定種子健康測(cè)定(seedhealthtesting)的目的是了解種子樣品的健康狀況，并由此推知種子批的健康狀況，從而比較不同批的價(jià)值和有目的地控制危害性病蟲(chóng)害的蔓延。1.肉眼檢驗(yàn)從平均樣品中取出一半種子作試樣，放在白紙或玻璃板上，用肉眼或5-10倍的擴(kuò)大鏡檢查，取出病原體、害蟲(chóng)或病粒、蟲(chóng)蛀粒，稱其重或計(jì)其粒數(shù)，按下列公式計(jì)算病害感染率，蟲(chóng)害種子百分率及每公斤種子中害蟲(chóng)的頭數(shù)。病?；虿≡w重量(g)TOC\o"1-5"\h\z感染病害(%)= X100試樣重量(g)被蟲(chóng)蛀食或損傷的種子數(shù)蟲(chóng)害種子(%)= X100供檢種子粒數(shù)揀出害蟲(chóng)頭數(shù)種子害蟲(chóng)數(shù)(頭/Kg)= X1000供檢試樣重量(g)此法適用于有較大病原體或種子外表有明顯癥狀的病害。如小麥赤霉病、水稻稻瘟病、馬鈴薯晚疫病等。適用于害蟲(chóng)自由活動(dòng)在種子堆中或種子受害蟲(chóng)損傷后有明顯特征的蟲(chóng)害測(cè)定。2.過(guò)篩檢驗(yàn)從平均樣品中取出一半種子作試樣，用規(guī)定孔徑的篩子過(guò)篩，不同作物種子所用篩孔不同(表5-7)。表5-7取篩子按孔徑大小疊好(孔徑上層大，下層小)，將試樣倒入上層篩內(nèi)，篩理2min,最好用電動(dòng)篩選器進(jìn)行。然后將各層篩上物倒入白瓷盆內(nèi)，用肉眼或10-15倍擴(kuò)大鏡檢查。將底層的細(xì)小篩出物倒于黑底玻璃板上，用50-60倍雙目擴(kuò)大鏡檢查。最后計(jì)算病、蟲(chóng)害感染率和每公斤含量。病原體重量(g)病原體含量(%)= X100試樣重量(g)揀出害蟲(chóng)頭數(shù)種子害蟲(chóng)(頭數(shù)/Kg)= X1000試樣重量(g)此法適用于較大病原體，其形狀、大小與種子不同。如菌瘻、病核、蟲(chóng)瘻及