實驗二通課的課件資料第1頁/共26頁內(nèi)容提要

三.細(xì)菌的分布與消毒

一.抗酸染色二.腸道致病菌的分離培養(yǎng)第2頁/共26頁一、實驗?zāi)康?/p>

1.掌握抗酸染色的操作方法。

2.熟悉抗酸染色的原理。

抗酸染色第3頁/共26頁分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要通過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝菌酸與染料結(jié)合后，很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅結(jié)合成牢固復(fù)合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再用堿性美藍(lán)復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其它細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。二、實驗原理第4頁/共26頁

細(xì)菌：卡介苗染液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、堿性美藍(lán)溶液其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片，玻片夾等

三、實驗材料第5頁/共26頁1、細(xì)菌涂片的制備

涂片干燥固定

2、染色1）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處（2～10cm）徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，加熱3～5min，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：3%鹽酸酒精脫色30s～1min；用水沖洗。3）復(fù)染：用堿性美藍(lán)溶液復(fù)染1min；用水沖洗后用吸水紙吸干。四、方法與步驟（與革蘭染色的區(qū)別）第6頁/共26頁

五、實驗結(jié)果未染色初染后脫色后復(fù)染后初染脫色復(fù)染石炭酸復(fù)紅鹽酸酒精堿性美藍(lán)第7頁/共26頁

結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色。第8頁/共26頁

六、注意事項1、無菌操作2、染色時間要充分3、初染時加熱勿沸騰勿干涸第9頁/共26頁二、腸道致病菌的分離培養(yǎng)

（88頁）第10頁/共26頁

一.腸道桿菌的生物學(xué)性狀

二.S-S培養(yǎng)基的特性及用途三.分離培養(yǎng)方法

主要內(nèi)容第11頁/共26頁一.腸道桿菌的生物學(xué)性狀

埃希菌屬：大腸埃希菌沙門菌屬：傷寒沙門菌甲型、乙型副傷寒沙門菌志賀菌屬：痢疾志賀菌腸桿菌科重要菌屬及代表菌種第12頁/共26頁1、相似的形態(tài)染色—從形態(tài)上無法區(qū)別

中等大小的G-桿菌

多有鞭毛、菌毛第13頁/共26頁乳糖發(fā)酵試驗初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌腸道致病菌

腸道非致病菌

多數(shù)不發(fā)酵乳糖

多數(shù)發(fā)酵乳糖2、活潑的生化反應(yīng)

第14頁/共26頁

-/+

-

+傷寒桿菌

-

-

+痢疾桿菌

-

⊕

⊕大腸桿菌硫化氫乳糖葡萄糖菌名三種細(xì)菌的生化反應(yīng)

第15頁/共26頁膽鹽抑制G+,枸櫞酸鈉和煌綠能部分抑制大腸桿菌,致病的沙門菌和志賀菌能大量生長。中性紅指示劑和乳糖,中性紅遇酸變粉紅。常用于腸道致病菌的分離培養(yǎng)。

二、S-S培養(yǎng)基的特性及用途第16頁/共26頁細(xì)菌

SS平板大腸桿菌粉紅色大菌落痢疾桿菌無色細(xì)小半透明菌落傷寒桿菌無色細(xì)小半透明菌落

S-S培養(yǎng)基中菌落特點：第17頁/共26頁大腸桿菌痢疾桿菌第18頁/共26頁

將糞便標(biāo)本以平板分區(qū)劃線法接種到SS培養(yǎng)基。

(每個實驗室8個SS平板，每組做好標(biāo)記，班長用膠布按班級綁好)

放入37℃溫箱中培養(yǎng)24小時。取出放4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。三、分離培養(yǎng)方法第19頁/共26頁三、細(xì)菌的分布與消毒1.細(xì)菌在自然界的分布2.化學(xué)因素對細(xì)菌的影響第20頁/共26頁1.空氣中細(xì)菌的檢查：（42頁，每個班1個普通瓊脂培養(yǎng)基）

原理：空氣中攜帶有微生物的氣溶膠粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。

方法：在室內(nèi)選擇一處放一個平皿。打開皿蓋，使培養(yǎng)基面向上暴露在空氣中15min，即蓋上皿蓋，37℃倒置培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果。第21頁/共26頁每個班2個血液瓊脂培養(yǎng)基取血瓊脂平板1塊，打開平皿蓋，將培養(yǎng)基面置于口腔前10cm處，受試者用力咳嗽幾次；蓋上平皿蓋，置37℃溫箱中倒置培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。2.咽喉部細(xì)菌的檢查第22頁/共26頁方法：取一普通瓊脂培養(yǎng)基，一部分寫上“前”，另一部分寫上“后”，然后將手指在寫有“前”的部分按一下，再將手指用酒精進(jìn)行消毒，待干后，在寫有“后”的部分按一下。放入37℃溫箱培養(yǎng)24小時后觀察。

（46頁，每個班4個平皿）

3.手指皮膚消毒前后的細(xì)菌學(xué)檢查第23頁/共26頁實驗報告內(nèi)容：抗酸染色一、原理二、材料三、方法四、結(jié)果（圖加