臨床臨床醫(yī)學(xué)檢驗考試輔導(dǎo)《臨床免疫學(xué)和免疫檢第PAGE第PAGE1第三章免疫原和抗的第一節(jié)免疫原的一、顆粒性抗顆粒性抗原：各種細胞、細菌、二、可溶性抗原的和純（一）可溶性抗原的組織細胞抗原的組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原第一步單個細胞獲得的方法第二步細胞破碎方法有：等）作為免疫原可出分辨力更高的特異性抗溴化裂解法：用溴化裂解蛋白質(zhì)肽鏈IgGF（ab’）2（二）超速離心法僅適用于少數(shù)大分子抗原及一些較輕的抗原，而不適用于大多數(shù)中小分子抗原核糖核酸降解法更簡便（DNARNA）聚合物沉淀法2000～6000又叫分子篩層析。通過凝膠分子篩作用，可將大、中、類分子分開，選擇凝時應(yīng)注意選用適親和層析是利用生物分子間所具有的專一性親和力而設(shè)計的層析技術(shù)。如抗原和抗體、酶和酶抑制物、酶蛋白和輔酶、激素和受體、DNARNA物，如將復(fù)合物的一方固定于固相載體上，則可從溶液中分離和提純另一方。（三）280nm和260nm的吸光度值，并根據(jù)計算蛋白含（SDS）SDS免疫活性鑒定采向免疫擴散法、免疫電泳法或ELISA法三、半抗原性免疫原的（一）多肽聚合物大分子聚合物和某些顆粒（二）（三）第二節(jié)免疫佐一、佐劑的種（一）化合物包括氫氧化鋁、明礬、礦物油、吐溫-80、弗氏不完全佐劑（羊毛脂與液狀石蠟的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂等（二）氏不完全佐劑兩種。使用時加入水溶性抗原并充分，使抗原與佐劑形成油包水乳劑。佐劑和抗原的比例為1：1。的方法有兩種：①研磨法②攪拌混合法二、佐劑的作用機（一）（三）三、免疫佐劑的概第三節(jié)抗的一、抗的概含有抗體的，就是抗。將免疫原接種給動物，該動物在抗原刺激下，體內(nèi)多個B細胞激活產(chǎn)生針對某一抗原的抗體，其混合物為多克隆抗體。動物血液，分離，即得到抗。二、免疫動物的選能用于抗的動物主要是哺乳類和禽類，常用的有家兔、綿羊、豚鼠、雞、和（一）（二）動物的選動物必須適齡、健康、體重合抗需求量少時，可選用家兔、豚鼠和雞等小動（三）抗的分為R型和HR型抗是用家兔及其他動物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較寬，適于作診斷試H型抗是用馬等大動物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療（四）對于蛋白質(zhì)抗原大部分動物皆適合，常用的是和家兔。某些動物體內(nèi)有類似物質(zhì)時，蛋白質(zhì)抗原對這些動物免疫原性極差，如IgE對綿羊、胰島素對家兔、多種酶類對，免疫后均不易產(chǎn)生抗體。三、免疫程（一）（二）有皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈、腹腔、淋等途徑皮內(nèi)或皮下免疫時一般采用多點注射初次免疫一般選擇皮內(nèi)接種，加強免疫和顆粒性抗原一般選擇靜脈注射。寶貴抗原可選擇淋內(nèi)微量注射法。（三）37～10四、動物采血（一）頸動脈采血法該法最常用，適用于家兔、綿羊、等動物。用頸動脈采血最多可獲70～80ml50ml（二）心臟采血法此法多用于家兔、豚鼠、大鼠和雞等動物。1120～30ml（三）靜脈采血法家兔可用耳中心靜脈采血，和綿羊可用頸靜脈采血動物采血后，應(yīng)盡快分離，分離的方法常采用室溫自然凝固，然后置37℃或4℃使血塊收縮后，收集。五、收動物采血后，應(yīng)盡快分離，分離的方法常采用室溫自然凝固，然后置37℃或4℃使血塊收縮后，收集。第四節(jié)抗的鑒定和保一、抗的鑒（一）常向免疫擴散法。進行雙擴散18～24小時后，觀察上下兩排孔之間出現(xiàn)的沉淀（二）顆粒性抗原采用凝集試驗?？扇苄钥乖上蛎庖邤U散試驗、ELISA。一種是將經(jīng)過系列稀釋的抗分別與一個濃度的抗原反應(yīng)。另一種是同時稀釋抗原和抗，分別與不同濃度的抗進行雙向免疫擴散試驗（稱為棋盤滴定）。（三）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳等方法。若只出現(xiàn)一條蛋白電泳區(qū)帶說明抗體純化已達到要求。若出現(xiàn)多條蛋白區(qū)帶則表明抗中混有雜蛋白，須進一步純化（四）二、抗的保保存，一般可保存第五節(jié)抗的純抗原免疫動物的抗是成分復(fù)雜的混合物，除含有特異性抗體外，還存在與目的抗體不相關(guān)的成分。最常見的是提取抗中的特異性IgG或單價抗體。一、IgG抗組主要是IgG和較少量的IgA、IgD、IgE等；第3組主要是白蛋白、黏蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等將純化抗原