水解方法1(毛頭鬼傘菌絲體粗提物的制備)取2mg多糖樣品放入薄壁長試管中，加入2mol/L三氟乙酸(TFA)4mL,在110°C下水解多糖樣品水解2h后，取試管內(nèi)溶液減壓蒸干(低于40C)然后加入3mL甲醇蒸干,重復(fù)以上操作4一5次，以完全除去TFA。用超純水溶解定容至100mL容量瓶，稀釋100倍后上樣測定。凡軍民.毛頭鬼傘菌絲體多糖的分離、純化和化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.方法2(山藥多糖的分級純化)取10mg多糖加入3mL2mol/L的TFA溶液，封管100C水解6小時減壓抽干加入3mL酸性甲醇液減壓抽干重復(fù)3次然后加入3mL甲醇液甲醇抽干，以充分帶走TFA。姜軍.山藥多糖的分離純化及其化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步研究[D].揚州大學(xué),2007.方法3：(亞麻籽殼多糖的提取)稱取多糖樣品5mg于安甑管中，加入2mol/L三氟乙酸1.0mL在通有氮氣的情況下用酒精噴燈封管，置于烘箱中120r水解3h再加入2.0mL甲醇，蒸干以完全去除三氟乙酸，反復(fù)3次,反應(yīng)后置干燥皿中備用毛豐瑋.亞麻籽殼多糖的提取、分離純化與結(jié)構(gòu)研究[D].浙江工商大學(xué),2013.方法4：(山藥多糖的GC-MS分析)取10mg多糖加入3mL2mol/L的TFA溶液封管100C水解6小時減壓抽干加入3mL酸性甲醇液，減壓抽干重復(fù)3次加入3mL甲醇液，抽干，以充分帶走TFA水解產(chǎn)物加入0.6mL0.05mol/LNaOH溶液，再加入5mgNaBH4，室溫下反應(yīng)8~10小時加少許乙酸分解過量的NaBH4，至無氣泡產(chǎn)生為止，蒸干反應(yīng)液，以酸性甲醇液洗滌反應(yīng)產(chǎn)物，蒸干甲醇液，重復(fù)3次，以除去硼酸根最后加入甲醇蒸干并于105C烘箱中除去水分。[1]姜軍.山藥多糖的分離純化及其化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步研究[D].揚州大學(xué),2007.關(guān)鍵：TFA、甲醇的濃度、體積，蒸發(fā)次數(shù)當(dāng)多糖含有糖醛酸時，由于中性糖和酸性糖對酸水解的耐受不同，與糖醛酸連接的單糖很難被酸水解。糖醛酸的定量可使用比色分析法或?qū)ふ倚枰渌姆治龇椒ㄈ鏕C-MS。含糖醛酸的多糖用氘代硼化鈉還原后，再進行酸水解、衍生化，經(jīng)GC-MS可以很好地定性糖醛酸類型。測定衍生GC方法1：(山藥多糖的GC-MS分析)乙?；苌铮喝∷獾膯翁?mg加入1mL的毗啶，1mL的乙酸酐，加熱兩個小時。后減壓抽干加入氯仿，溶解用蒸餾水洗滌，分三次萃取，取氯仿層，加壓抽干，得棕黃色產(chǎn)物，此乙?；膯翁谴加寐确孪♂尯筮M行GC-MS分析。GC-MS操作條件：DB-5MS柱(30mX0.25mmX0.25旦m)柱溫采用程序升溫開始溫度為120°C，以10C/min速率升溫至170C；再以15C/min升溫至280C；最后在280C維持40分鐘。MS條件：M/Z：50?550，電子流量70ev，EI源。[1]姜軍.山藥多糖的分離純化及其化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步研究[D].揚州大學(xué),2007.方法2：(亞麻籽殼多糖的提取)加入10mg鹽酸羥胺0.5mL毗啶,搖勻于90°C條件下水浴反應(yīng)30min加入1.OmL乙酸酐,90°C水浴30mm進行乙?；磻?yīng)氮吹去除溶劑，加入1.0mL肌醇六乙酸醋內(nèi)標(biāo)溶液，進行GC分析。標(biāo)準(zhǔn)單糖的衍生化分別稱取鼠李糖、木糖、巖藻糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10口8,加入10mg鹽酸羥胺，1mL毗啶搖勻,90°C水浴30min,加1mL乙酸酐,90°C水浴30min進行乙?；?氮氣吹干溶劑，加入1mL肌醇六乙酸酯內(nèi)標(biāo)溶液，進行GC分析。氣相色譜分析條件HP7890,FED檢測器，色譜柱為HP-INNOWAX柱(30mxO.25mmxO.25um),恒流模式，流速為2mL/min,程序升溫條件為：180°C保持1min,從180°C開始以5°C/min升溫至210C,保持lOmin，再以1°C/min升溫至230C,保持5min。進樣口采用分流模式，分流比為10:1,進樣口溫度為270C。檢測器溫度為270C,檢測器H2流速為30mL/min,空氣流速為300mL/min，尾吹為25mL/min。進樣量為1uL。毛豐瑋.亞麻籽殼多糖的提取、分離純化與結(jié)構(gòu)研究[D].浙江工商大學(xué),2013.方法3：甲基化-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析(1)羧基還原10mg多糖溶于7mL水中，加入CMC330mg，磁力攪拌下滴加0.01mol/LHCl,使pH保持為4.75,維持2h。逐滴滴加2mol/LNaBD4溶液(10mL),此時pH值急劇上升，需用4mol/LHCL控制pH為7.00,持續(xù)攪拌,NaBD4溶液在45min內(nèi)加完，在室溫下繼續(xù)反應(yīng)Ih。反應(yīng)完畢后，滴加冰乙酸至pH4.0以消耗多余的NaBD4,反應(yīng)液蒸溜水透析24h,流水透析24h,透析袋內(nèi)液濃縮后，冷凍干燥。甲基化反應(yīng)⑴無水二甲基亞颯的制備二甲基亞颯中加入4A分子篩，置于干燥皿中保存。(2)NaOH干燥粉末的制備在取適量的塊狀NaOH,置于紅外燈下碾磨至粉狀，現(xiàn)磨現(xiàn)用。⑶甲基化反應(yīng)瓶先通入干燥氮氣15min左右驅(qū)趕瓶中空氣，在氮氣流中快速加入P2O5千燥后的羧基還原多糖和5ml無水二甲亞颯(DMSO,以4A分子篩脫水)，磁力攪拌至糖樣充分溶解后再攪拌1h。迅速加入碾磨好的NaOH干燥粉末，蓋上瓶蓋，反應(yīng)2h。將反應(yīng)瓶置于冰水浴中,用注射器加入碘甲烷1mL,繼續(xù)反應(yīng)2h,整個反應(yīng)過程在氮氣壓下進行，盡量保證反應(yīng)在無水無氧條件下進行。將反應(yīng)后溶液加入等體積氯仿，充分振蕩，萃取甲基化多糖,重復(fù)至少三次，合并萃取液。再用蒸德水反復(fù)洗萃取液至少三次,減壓濃縮后于P205千燥瓶中千燥。以紅外光譜3600-3300cm"'處有無輕基吸收峰作為判別甲基化是否完全的標(biāo)準(zhǔn)。（3）甲基化多糖水解、還原和乙?；谆嗵切枰纫约姿崴庠儆萌宜崴?。加入90%甲酸1mL于裝有樣品的安甑管中，充氮封管，在100°C下水解6h，水解完畢后，以氮吹除去甲酸，加入甲醇1ml,氮吹去除，以完全去除甲酸，加甲醇重復(fù)三次。加入NaBD470mg還原24h,室溫磁力攪拌，除去NaBD4,再加入lmL2mol/L三氟乙酸，充氮封管，在120°C下水解3h。水解完畢后，以氮吹完全除去三氟乙酸，加入甲醇1ml,氮吹去除，以完全去除甲酸，加甲醇重復(fù)三次。甲基化單糖經(jīng)乙醍化，水解后，用氣相色譜-質(zhì)譜分析。（4）氣相色譜一質(zhì)譜分析儀器型號:TRACEGCULTRADSQII（thermo）色譜柱:TR-35MS（30mxO.25mmxO.25um）:恒流流速（高純氦氣）：1.0mL/min,柱溫程序升溫:80度保留3min,以15°C/min升至200°C保留1min，再以10°C/min升至260°C,保留5min。接口溫度250CEI+源:70eV,250°C,掃描頻率5次/s,質(zhì)量范圍：33-500amu。[1]毛豐瑋.亞麻籽殼多糖的提取、分離純化與結(jié)構(gòu)研究[D].浙江工商大學(xué),2013.方法4：（黨參果聚糖）高碘酸鈉氧化10mg樣品溶于10mL0.015mol?L-1高碘酸鈉中，避光置于4°C處，間隔不同時間取樣稀釋250倍后用分光光度法測定高碘酸鈉的消耗量及用0.005mol-L-1NaOH滴定甲酸的釋放量。上述氧化完全的多糖溶液加入0.2mL乙二醇，充分混合后對蒸餾水進行透析24h,用8mgNaBH4于室溫還原12h,用0.1mol?L-1醋酸調(diào)至pH4?5,再對水透析24h,減壓抽干，用1mol?L-1三氟醋酸封管100C水解12h，減壓抽干，乙?；筮M行氣相色譜。[1]葉冠，李晨，黃成鋼，李志孝，王新亮，陳耀祖.黨參果聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)[J].中國中藥雜志，2005,17:1338-1340.HPLC方法1：（阿魏側(cè)耳子實體多糖）高效液相色譜:色譜條件為:色譜柱為ShodexKS804Sugar（300mmX7.8mm）,柱溫40度；流動相為水，流速0.8mL?min-1。檢測用410RI示差檢測器，數(shù)據(jù)處理用810GPC軟件進行。同時用鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、木糖、果糖、葡萄糖、巖藻糖8種單糖進行對照，根據(jù)峰值確定樣品的單糖組成。[1]李軍.阿魏側(cè)耳子實體多糖分離純化及其化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步研究[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.方法2：（白術(shù)多糖）分子量及純度檢測根據(jù)文獻和中華人民共和國藥典2000版附錄的方法，分別將分離組分和各種標(biāo)準(zhǔn)多糖用重蒸餾水配制成溶液，用HPLC-ELSD進行檢測。色譜條件:色譜柱為ShodexKS804Sugar（300mmx7.8mm）,柱溫40C;流動相為水，流速0.8ml/min。檢測條件:飄移管溫度為120度，氣流速度3.4L/min,靈敏