病原學(xué)診斷與防治2第1頁(yè)/共27頁(yè)

細(xì)菌學(xué)診斷內(nèi)容包括:查病原菌及其成分（抗原、代謝產(chǎn)物）——細(xì)菌學(xué)診斷查特異性抗體:用已知的抗原檢測(cè)標(biāo)本中未知的抗體——血清學(xué)診斷查致病菌特異性DNA片段為目的——基因診斷第2頁(yè)/共27頁(yè)細(xì)菌學(xué)診斷（一）標(biāo)本的采集和送檢原則嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作不同期不同標(biāo)本用抗生素以前采集病變明顯部位運(yùn)送注意保存標(biāo)本必須新鮮細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則第3頁(yè)/共27頁(yè)一、病原菌檢測(cè)（二）病原菌檢測(cè)的方法

1、形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查

2、分離培養(yǎng)鑒定

3、抗原檢測(cè)

4、其他檢測(cè)第4頁(yè)/共27頁(yè)（二）致病菌的檢驗(yàn)程序藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)本直接涂片檢查分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)明確診斷初步診斷（結(jié)合臨床）分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測(cè)技術(shù)第5頁(yè)/共27頁(yè)1.形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查一般程序：標(biāo)本涂片固定染色鏡檢（觀察鏡下特征：菌體形態(tài)、排列、染色性及特殊結(jié)構(gòu)等）初步鑒定炭疽桿菌第6頁(yè)/共27頁(yè)

病原菌檢測(cè)的主要技術(shù)（1）顯微鏡放大技術(shù)

A.普通光學(xué)顯微鏡以可見光為光源分辨率：0.25μm

放大倍數(shù)：

×1000第7頁(yè)/共27頁(yè)

病原菌檢測(cè)的主要技術(shù)B.電子顯微鏡

以電子流代替光波，電磁圈代替放大透鏡分辨率：1nm

放大倍數(shù)：10萬(wàn)以上電鏡標(biāo)本制作復(fù)雜且必須真空干燥狀態(tài)下觀察--不能觀察活的微生物猴子脾臟上炭疽桿菌第8頁(yè)/共27頁(yè)

病原菌檢測(cè)的主要技術(shù)C.

其他顯微鏡:適用不同觀察目的

?暗視野顯微鏡

?相差顯微鏡

?熒光顯微鏡

?共聚焦顯微鏡

第9頁(yè)/共27頁(yè)

病原菌檢測(cè)的主要技術(shù)（2）染色技術(shù)細(xì)菌易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合而著色簡(jiǎn)單染色法：只用一種染料，過程簡(jiǎn)單，可觀察菌體形態(tài)、排列方式復(fù)合染色法：用二種或二種以上染料多步驟染色,能反映菌體內(nèi)部染色特征第10頁(yè)/共27頁(yè)

病原菌檢測(cè)的主要技術(shù)革蘭染色法：革蘭陽(yáng)性菌（紫色）革蘭陰性菌（紅色）抗酸染色法：抗酸陽(yáng)性菌（紅色）抗酸陰性菌（藍(lán)色）特殊染色法：細(xì)菌莢膜、芽孢、鞭毛、細(xì)胞壁、核質(zhì)等染色炭疽桿菌（芽孢）糞產(chǎn)堿桿菌鞭毛染色（周鞭毛）

第11頁(yè)/共27頁(yè)

革蘭染色法(Gramstain)：標(biāo)本涂片，固定結(jié)晶紫初染→碘液媒染→95%乙醇脫色→沙黃復(fù)染→革蘭陽(yáng)性菌（G+）——藍(lán)紫色；革蘭陰性菌(G-)——淡紅色。第12頁(yè)/共27頁(yè)

革蘭陽(yáng)性菌

革蘭陰性菌返回第13頁(yè)/共27頁(yè)抗酸染色法(acid-faststain)：以5％石炭酸復(fù)紅染色，再用3％鹽酸酒精脫色，然后用美藍(lán)復(fù)染，則分枝桿菌呈紅色(+)，其他細(xì)菌和背景物質(zhì)為藍(lán)色(-)?？顾崛旧ā种U菌屬的實(shí)驗(yàn)診斷實(shí)驗(yàn)過程：取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸復(fù)紅染色8~10分鐘后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時(shí)輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止→水洗后，用堿性美藍(lán)復(fù)染1分鐘→水洗，印干→鏡檢返回第14頁(yè)/共27頁(yè)2.分離培養(yǎng)與鑒定（一般程序）標(biāo)本（或增菌后）接種普通瓊脂平板血瓊脂平板選擇培養(yǎng)基平板培養(yǎng)特征：營(yíng)養(yǎng)、生長(zhǎng)條件菌落特征溶血環(huán)特征等純菌染色鏡檢：根據(jù)形態(tài)特征初步鑒定生化反應(yīng)：如腸道桿菌的乳糖發(fā)酵試驗(yàn)純菌炭疽桿菌（普通平板）第15頁(yè)/共27頁(yè)2.分離培養(yǎng)與鑒定藥敏試驗(yàn)血清學(xué)鑒定：用已知的抗體檢查未知的抗原鑒定細(xì)菌的種、型毒力鑒定內(nèi)、外毒素檢測(cè)動(dòng)物試驗(yàn)：家兔、豚鼠等紙片法：只可定性試管法：可定量（測(cè)MBC、MIC）第16頁(yè)/共27頁(yè)3、其他檢測(cè)代謝產(chǎn)物的檢測(cè)：如氣相色譜法鑒定厭氧細(xì)菌PCR檢測(cè)核酸：注意防止污染、易出現(xiàn)假陽(yáng)性基因芯片第17頁(yè)/共27頁(yè)第18頁(yè)/共27頁(yè)二、血清學(xué)診斷原理：用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測(cè)患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。（用已知Ag測(cè)未知Ab）標(biāo)本：血清和其他體液標(biāo)本要求:雙份血清(早期；恢復(fù)期)診斷

恢復(fù)期或一周后血清Ab效價(jià)比早期升高4倍及4倍以上現(xiàn)癥感染第19頁(yè)/共27頁(yè)血清學(xué)診斷常用方法凝集試驗(yàn)：

肥達(dá)試驗(yàn)（Widaltest）---診斷傷寒、副傷寒外斐試驗(yàn)（Well-Felix）---診斷立克次體病中和試驗(yàn)：

抗“O”試驗(yàn)---診斷鏈球菌性風(fēng)濕病第20頁(yè)/共27頁(yè)肥達(dá)試驗(yàn)

是一種試管凝集反應(yīng)。用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原,與病人血清作定量凝集試驗(yàn),以測(cè)定患者血清中無相應(yīng)抗體存在,作為傷寒、副傷寒診斷的參考。第21頁(yè)/共27頁(yè)特異性預(yù)防與治療人工主動(dòng)免疫

是將疫苗及類毒素接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。

自然免疫

患病、隱性感染人工免疫

疫苗、類毒素人工被動(dòng)免疫

是注射含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體、細(xì)胞因子或致敏的免疫細(xì)胞等，使機(jī)體立即獲得特異性免疫，因而作用及時(shí)。人工被動(dòng)免主要用于急性傳染病的治療或緊急預(yù)防。

自然免疫

胎盤、初乳

人工免疫

抗毒素、丙球第22頁(yè)/共27頁(yè)人工被動(dòng)免疫1．抗毒素（antitoxin）抗毒素能中和相應(yīng)外毒素，阻斷各種毒素的作用。注射前務(wù)必先做皮膚試驗(yàn)，測(cè)試有無超敏反應(yīng)。必要時(shí)可采用脫敏療注射法。應(yīng)用人源性免疫球蛋白可避免發(fā)生超敏反應(yīng)。2．抗菌免疫血清（antibacterialimmuneserum）含有抗原特異性抗體的血清，是用細(xì)菌免疫動(dòng)物制成的。目前已基本淘汰。只是某些多重耐藥菌（如銅綠假單胞菌）感染時(shí)，仍可考慮抗菌血清治療。第23頁(yè)/共27頁(yè)人工被動(dòng)免疫3．胎盤（丙種）球蛋白(immuneserumglobulins)

是從健康產(chǎn)婦的胎盤和嬰兒臍帶血中提取而制成，主要含有丙種球蛋白。胎盤球蛋白主要用于麻疹、甲型肝炎、脊髓灰質(zhì)炎等病毒性疾病的緊急預(yù)防。4．細(xì)胞因子制劑(cytokines)

是近年來研制的新型免疫治療劑，主要試用于一些病毒性疾病和腫瘤中，例如轉(zhuǎn)移因子(transferfactor,TF)、干擾素、IL-2、LAK細(xì)胞(lymphokine-activatedcell)等。

第24頁(yè)/共27頁(yè)為傷病注射破傷風(fēng)抗毒血清，使參