微生物實驗一培養(yǎng)基制作及滅菌第1頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六實驗一培養(yǎng)基配置和滅菌一、實驗目的1.掌握微生物學實驗中常用的玻璃器皿的包扎方法與棉塞的制作2.了解配制培養(yǎng)基的原理，并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟3.了解加壓蒸汽滅菌的原理，并掌握其具體操作方法第2頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六二、實驗原理（1）微生物學常用的玻璃儀器

培養(yǎng)皿，試管，三角瓶（錐形瓶）、吸量管，（大?。?）培養(yǎng)基的分類

按物理狀態(tài)分、按組成成分分、按用途分配置培養(yǎng)基時注意的事項：pH（不能回調(diào)），T

（3）培養(yǎng)基的滅菌

培養(yǎng)基配置好后應立即滅菌，且不能再次滅菌化學滅菌(甲醛，潔爾滅、升汞），物理滅菌（干熱，紫外線等、過濾除菌）、濕熱滅菌第3頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六第4頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六第5頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六干燥箱第6頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六第7頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六細菌過濾器第8頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六用于濾過除菌的各式濾器第9頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六手提式滅菌鍋坐式滅菌鍋第10頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六高壓蒸汽滅菌器臥式滅菌鍋第11頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六三、實驗器材

1.藥品及試劑：2.儀器及其它

試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻棒、天平、藥匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(5.5-9.0)、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、干燥箱、培養(yǎng)皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠第12頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六四、實驗方法和步驟微生物常用玻璃儀器的包扎和棉塞的制作

a.培養(yǎng)皿的包裝每10套一包，用舊報紙包扎（或放在特制鐵皮圓筒里，加蓋扣嚴）。

b.吸管的包裝首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用長紙條包扎、打結。

c.玻璃涂布棒的包裝方法同吸管的包裝。

d.三角瓶的包扎第13頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六第14頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六2.培養(yǎng)基的制備與分裝（1）三角瓶固體培養(yǎng)基的制備

a.稱量按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取藥品，放入在瓷缸內(nèi)。（注意藥品稱量順序）

b.加入定量的瓊脂、水，煮沸，溶解

c.完全溶解后，補充水分，調(diào)pH值（不要調(diào)過頭）

d.分裝置三角瓶中，注意裝液量

e.加棉塞，包扎，高壓蒸汽滅菌,121℃,0.10Mpa,20min第15頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六（2）試管斜面固體培養(yǎng)基的制備

a.稱量按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取藥品，放入在瓷缸內(nèi)。（注意藥品稱量順序）

b.加入定量的瓊脂、水，煮沸，溶解

c.完全溶解后，補充水分，調(diào)pH值

d.在培養(yǎng)基未融化之前，用10mL移液管快速加入試管內(nèi)，每根7-8mL，塞上棉塞，包扎，滅菌，滅菌完后擺斜面。第16頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六3.培養(yǎng)基、無菌水、器皿的滅菌

a.將培養(yǎng)基、無菌水放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，濕熱滅菌。b.滅菌完畢，將試管培養(yǎng)基擱成斜面。c.器皿放入干熱滅菌箱內(nèi)，加熱滅菌。第17頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六思考題1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)菌是無菌的？2.加壓蒸汽滅菌的原理是什么？是否只要壓力表上的指針指到所需的壓力時就能達到所需滅菌溫度？為什么？3.干熱滅菌應該注意哪些事項？4.管口、瓶口為什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？為什么？第18頁，共20頁，2023年，2月20日，星期六實驗報告注意事項1.上課前必須寫好預習實驗報告2.實驗報告內(nèi)容必須填寫完整，如實驗課程，實驗時間，指導教師等3.本次實驗結束后必須記錄好原始記錄，由老師簽完名后方可離開4.