原料藥中雜質(zhì)控制與案例分析

周立春

.6.19原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第1頁(yè)主要內(nèi)容雜質(zhì)定義與分類雜質(zhì)檢測(cè)方法雜質(zhì)檢驗(yàn)方法建立與驗(yàn)證

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第2頁(yè)雜質(zhì)定義及分類定義：任何影響藥品純度物質(zhì)。分類：一、按化學(xué)特征分類：有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)、有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)。二、按起源分類：相關(guān)物質(zhì)（反應(yīng)前體、中間體、副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物等）、其它雜質(zhì)、外來(lái)物質(zhì)。三、按結(jié)構(gòu)分類：其它甾體、其它生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和聚合物。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第3頁(yè)藥典中分類方式1

有機(jī)物質(zhì)相關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)殘留溶劑3

有機(jī)揮發(fā)性化合物2無(wú)機(jī)雜質(zhì)－無(wú)機(jī)鹽陰離子陽(yáng)離子－重金屬催化劑

－過(guò)濾介質(zhì)、活性炭原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第4頁(yè)雜質(zhì)檢測(cè)方法物理常數(shù)測(cè)定法旋光度-檢驗(yàn)含有光學(xué)活性雜質(zhì)(尼莫地平)紫外分光光度法雜質(zhì)吸光度-在特定波長(zhǎng)含有紫外吸收雜質(zhì)（葡萄糖）容量滴定法過(guò)氧化物（大豆油）、還原糖（乳酸）重量法酸中不溶物（磷酸氫鈣）、可溶性物質(zhì)（氧化鋅）比色比濁法游離淀粉（氧化淀粉）、碘化物（甲狀腺粉）、鐵鹽（磷酸哌嗪）、氯化物（氯法齊明）、硫酸鹽（門冬酰胺）等原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第5頁(yè)雜質(zhì)檢測(cè)方法原子吸收分光光度法：檢驗(yàn)金屬雜質(zhì)（葡萄糖酸鋅）毛細(xì)管電泳法：抑肽酶中檢驗(yàn)去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶兩個(gè)特定雜質(zhì)色譜法：液相色譜法，檢驗(yàn)有機(jī)雜質(zhì)主要方法薄層色譜法，作為液相色譜法補(bǔ)充氣相色譜法：檢驗(yàn)揮發(fā)性雜質(zhì)熱分析法：檢驗(yàn)不一樣晶型雜質(zhì)（影響生物利用度和穩(wěn)定性）拉曼光譜法、紅外光譜法、X-射線粉末衍射生物檢定法、酶聯(lián)免疫試劑盒（抗生素殘留量）

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第6頁(yè)殘留溶劑控制標(biāo)準(zhǔn)起草過(guò)程中，應(yīng)針對(duì)所用到有機(jī)溶劑進(jìn)行檢驗(yàn)提議采取了頂空進(jìn)樣方式和程序升溫梯度洗脫方法，應(yīng)注意供試品溶液配制，要求供試品在溶劑中溶解。方法學(xué)試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行回收試驗(yàn)，確認(rèn)是否有基質(zhì)干擾。采取標(biāo)準(zhǔn)加入法，該方法可降低基質(zhì)干擾，提升方法準(zhǔn)確度。關(guān)于校正相對(duì)保留時(shí)間（RART）應(yīng)用。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第7頁(yè)殘留溶劑檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題：共出峰干擾

熱降解干擾

基質(zhì)效應(yīng)影響

藥品溶解性影響

溶劑介質(zhì)影響

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第8頁(yè)共出峰干擾共出峰：在相同色譜條件下含有相同保留值組分不一定是同一物質(zhì)。不一樣物質(zhì)在某一色譜條件下含有相同保留值現(xiàn)象，被稱為共出峰現(xiàn)象。不一樣物質(zhì)在性能（極性或氫鍵形成能力等）不一樣色譜柱中含有完全相同保留行為幾率很小。所以采取不一樣極性色譜柱分別測(cè)定，能夠排除共出峰干擾。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第9頁(yè)吡柔比星中正己烷共出峰排除色譜柱樣品批號(hào)PS-117PS-118PS-119DB-624柱5.449%6.209%4.794%SPB-1柱0.569%0.631%0.579%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第10頁(yè)熱降解干擾假如藥品對(duì)熱不穩(wěn)定，則可能會(huì)在直接進(jìn)樣或頂空加熱過(guò)程中發(fā)生熱降解，假如降解產(chǎn)物恰好與待測(cè)有機(jī)溶劑共出鋒，或恰好就是某種有機(jī)溶劑，則會(huì)造成把降解產(chǎn)物看成殘留溶劑檢測(cè)，得犯錯(cuò)誤結(jié)果。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第11頁(yè)熱降解原因分子結(jié)構(gòu)中有烷氧基藥品可能熱解產(chǎn)生對(duì)應(yīng)醇。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第12頁(yè)排除干擾方法改變頂空溫度能夠確定頂空條件下樣品是否能產(chǎn)生熱降解干擾物。也能夠經(jīng)過(guò)測(cè)定已知不含該溶劑對(duì)照樣品來(lái)加以判斷。頂空溫度頭孢西丁鈉頭孢美唑氟氧頭孢利福平70℃21.7815.526.122.7120℃1100.451309.42667.4965.2原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第13頁(yè)基質(zhì)效應(yīng)影響和排出基質(zhì)效應(yīng)－－頂空分析時(shí)，因?qū)φ掌啡芤汉凸┰嚻啡芤航M成不一樣，使得待測(cè)揮發(fā)性組分在氣液兩相間分配系數(shù)不一樣引發(fā)定量誤差。標(biāo)準(zhǔn)加入法能夠有效地排除基質(zhì)效應(yīng)影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果與內(nèi)標(biāo)法結(jié)果系統(tǒng)偏差約10%（通常偏低）時(shí)，能夠認(rèn)為方法存在顯著基質(zhì)效應(yīng)。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第14頁(yè)內(nèi)標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定結(jié)果比較藥品名稱批號(hào)或箱號(hào)殘留溶劑內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法頭孢氨芐211848甲醇0.585%0.569%211850甲醇0.445%0.437%211854甲醇0.964%0.972%吡柔比星PS-117正己烷0.569%0.496%PS-118正己烷0.651%0.602%PS-119正己烷0.579%0.509%頭孢哌酮鈉75835031丙酮1.799%1.780%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第15頁(yè)藥品溶解性影響當(dāng)樣品在溶解介質(zhì)中未溶解時(shí)，測(cè)定結(jié)果通常偏低且精密度差。如待測(cè)溶劑為水溶性不好溶劑，且選擇水為溶媒時(shí)，可先用少許乙醇或甲醇溶解待測(cè)溶劑后再用水稀釋方法配制對(duì)照品溶液。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第16頁(yè)藥品溶劑介質(zhì)藥品溶解性殘留溶劑殘留量（RSD(n=5)）頭孢氨芐水微溶甲醇0.385%（4.4%）0.5mol/LNaOH溶解甲醇0.427%（1.9%）頭孢泊肟酯水不溶丙酮0.0016%（73.0%）DMF溶解丙酮0.0035%（4.1%）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第17頁(yè)供試品溶液制備對(duì)水溶性藥品，采取水為溶劑；當(dāng)藥品不溶于水，但可溶解于一定濃度酸或堿溶液中時(shí)，可采取酸或堿溶液作為溶劑；對(duì)于非水溶性藥品，可采取N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、DMSO等為溶劑。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第18頁(yè)溶液配制應(yīng)注意問(wèn)題：

1、為了防止殘留溶劑揮發(fā)，不可用超聲或加熱方式溶解樣品。假如采取頂空進(jìn)樣，樣品置頂空瓶并封蓋之后能夠超聲或加熱溶解樣品。2、大顆粒樣品不能夠研磨取樣，只能取原態(tài)樣品（或冷凍粉碎）。

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第19頁(yè)溶解介質(zhì)影響當(dāng)藥品在某種溶解介質(zhì)中溶解后，待測(cè)溶劑或內(nèi)標(biāo)可能與藥品產(chǎn)生較強(qiáng)相互作用，以至采取標(biāo)準(zhǔn)加入法也無(wú)法排除對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第20頁(yè)頭孢呋辛酯在不一樣溶劑介質(zhì)中對(duì)

正己烷殘留量測(cè)定影響批號(hào)DMF1mol/LNaOH水溶液內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)加入法21360170.0023%0.0023%0.081%0.034%21360180.0036%0.0038%0.139%0.067%21360190.0036%0.0040%0.152%0.058%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第21頁(yè)以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時(shí)，盡管對(duì)照品溶液與供試品溶液中內(nèi)標(biāo)丁酮濃度相同，不過(guò)其峰面積卻相差一倍；而溶劑介質(zhì)為DMF時(shí)，相同濃度丁酮內(nèi)標(biāo)在對(duì)照品溶液和供試品溶液中峰面積幾乎相同。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第22頁(yè)以1mol/LNaOH溶液為溶劑介質(zhì)時(shí)，利用內(nèi)標(biāo)法得到數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)加入法得到數(shù)據(jù)，計(jì)算對(duì)照品（正己烷）回收率，發(fā)覺(jué)對(duì)照品回收率約為50%，超出方法可接收范圍（80-120%）。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第23頁(yè)藥品研發(fā)中殘留溶劑研究存在問(wèn)題：表述不全方面或不準(zhǔn)確。對(duì)色譜圖中出現(xiàn)未知峰未進(jìn)行研究。試驗(yàn)條件未進(jìn)行考查。方法學(xué)驗(yàn)證不全方面。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第24頁(yè)

無(wú)機(jī)雜質(zhì)控制無(wú)機(jī)鹽起源：來(lái)自工藝、原料或降解產(chǎn)物主要控制項(xiàng)目有：氯化物、硫酸鹽、硫化物、氰化物、磷酸鹽、溴化物、碘化物、重金屬等原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第25頁(yè)CompanyLogo供試品溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液最正確顯色量程度確實(shí)定

無(wú)機(jī)雜質(zhì)控制132原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第26頁(yè)氯化物取本品1.0g，加水50ml，搖勻，煮沸2－3分鐘，放冷，濾過(guò)，取續(xù)濾液25ml，依法檢驗(yàn)（附錄ⅧA），與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0ml制成對(duì)照液比較，不得更濃（0.01％）。

硫酸鹽取本品1.0g，加稀鹽酸3ml，煮沸后，放泠，加水稀釋成50ml，濾過(guò)；分取濾液25ml，依法檢驗(yàn)（附錄ⅧB(niǎo)），與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液5.0ml制成對(duì)照液比較，不得更濃(0.1％)。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第27頁(yè)無(wú)機(jī)雜質(zhì)程度試驗(yàn)計(jì)算方法主要參數(shù)：程度、取樣量（W）、對(duì)照溶液濃度（C）和對(duì)照溶液用量（V）。公式C（g/ml）×V（ml）程度=———————

×100%

W（g）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第28頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——要求概述全部品種都應(yīng)進(jìn)行相關(guān)物質(zhì)考評(píng)對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行定性研究，確定結(jié)構(gòu)，從而為實(shí)現(xiàn)對(duì)已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)區(qū)分控制，同時(shí)也為科學(xué)制訂檢驗(yàn)方法系統(tǒng)適用性要求提供基礎(chǔ)保障。優(yōu)化方法（增加有效系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求）程度合理原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第29頁(yè)相關(guān)物質(zhì)起源－起始原料－中間體、副產(chǎn)物－降解產(chǎn)物－聚合物－異構(gòu)體多晶型雜質(zhì)原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第30頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法ICGCCEPC普通采取色譜法TLCLC（反相、正相、凝膠）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第31頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法色譜柱標(biāo)準(zhǔn)：方法驗(yàn)證時(shí)進(jìn)行粗放度試驗(yàn)（三根以上色譜柱），特殊填料應(yīng)在各論中給予注明，強(qiáng)調(diào)“或效能相當(dāng)”。大多為反相高效液相法，采取C18、C8、苯基等鍵合硅膠填料，以C18為最慣用；當(dāng)前C18色譜柱類型也很多，不一樣基質(zhì)、不一樣載碳量、不一樣封端處理方式、不一樣純度、不一樣粒徑、孔徑、柱長(zhǎng)等，影響原因較多，方法研究時(shí)應(yīng)注意粗放度考查；原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第32頁(yè)色譜柱差異Minutes515253545Symmetry?C18Alconc.<10ppmTFUSP=1.9AmitriptylineNova-Pak?C18Alconc.=~375ppmTFUSP=6.4低金屬不純物含量原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第33頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法色譜柱還有采取離子色譜法，采取離子色譜填料。例：氯膦酸二鈉及注射劑，采取陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)

）也有采取分子排阻色譜法，有采取親水改性硅膠；例：頭孢地嗪鈉相關(guān)物質(zhì)Ⅱ，以球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量適用范圍為1000～10000）為填充劑原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第34頁(yè)例：離子色譜（氯膦酸二鈉）照離子色譜法試驗(yàn)用陰離子交換色譜柱（推薦使用IonPacAS11-HC，或效能相當(dāng)），柱溫30℃以水為流動(dòng)相A，以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫，流速為1.2ml/min。檢測(cè)器為電導(dǎo)檢測(cè)器，檢測(cè)方式為抑制電導(dǎo)檢測(cè)。

氯膦酸二鈉原料藥相關(guān)物質(zhì)與制劑含量測(cè)定原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第35頁(yè)β-內(nèi)酰胺類抗生素聚合物定義：藥品中分子量大于藥品本身雜質(zhì)總稱。分子量大?。?000-5000道爾頓，個(gè)別有10000道爾頓。類別1）蛋白（多肽類）物質(zhì)，起源于生產(chǎn)過(guò)程殘留或污染。類別2）聚合物，起源于生產(chǎn)、儲(chǔ)存和使用條件下發(fā)生分子間聚合反應(yīng)物。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第36頁(yè)β-內(nèi)酰胺類抗生素聚合物起源方式β-內(nèi)酰胺類抗生素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：β-內(nèi)酰胺環(huán)。以頭孢地嗪為例。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第37頁(yè)聚合方式分子內(nèi)聚合：反應(yīng)僅和母核結(jié)構(gòu)相關(guān)，側(cè)鏈活性基團(tuán)不參加反應(yīng)。對(duì)于7位側(cè)鏈不含自由氨基頭孢菌素，如：頭孢噻吩、頭孢呋辛、頭孢哌酮等。分子間聚合：側(cè)鏈活性基團(tuán)參加反應(yīng)。對(duì)于7位側(cè)鏈含自由氨基頭孢菌素，如：頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢噻肟等。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第38頁(yè)β-內(nèi)酰胺類抗生素聚合物檢測(cè)方法凝膠色譜法（分子排阻色譜法）：是依據(jù)分子大小進(jìn)行分離一個(gè)液相色譜技術(shù)。原理：色譜柱多以親水硅膠、凝膠或經(jīng)修飾凝膠如葡聚糖凝膠Sephadex和聚丙烯酰胺凝膠Sepherose等為填充劑，這些填充劑表面分布著不一樣尺寸孔徑，藥品分子進(jìn)入色譜柱后，它們中不一樣組分按其大小進(jìn)入對(duì)應(yīng)孔徑內(nèi)，大小大于全部孔徑分子不能進(jìn)入填充劑顆粒內(nèi)部，在色譜過(guò)程中不被保留，最早被流動(dòng)相洗脫至柱外，表現(xiàn)為保留時(shí)間較短；大小小于全部孔徑分子能自由進(jìn)入填充劑表面全部孔徑，在柱子中滯留時(shí)間較長(zhǎng)，表現(xiàn)為保留時(shí)間較長(zhǎng)；其余分子則按分子大小依次被洗脫。

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第39頁(yè)中國(guó)藥典方法(I)采取交聯(lián)葡聚糖凝膠（Sephadex）為分離柱。以水和磷酸鹽緩沖液分別進(jìn)行洗脫，前者進(jìn)行對(duì)照品測(cè)定，后者進(jìn)行樣品測(cè)定。以葡聚糖作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)標(biāo)志物，以葡聚糖峰理論板數(shù)、拖尾因子，和其在兩套系統(tǒng)中保留時(shí)間比值，以及該峰與對(duì)照品溶液峰和供試品溶液聚合物峰保留時(shí)間比值作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)主要指標(biāo)。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第40頁(yè)經(jīng)典供試品溶液色譜圖原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第41頁(yè)兩套流動(dòng)相系統(tǒng)用意因?yàn)橹袎阂合嘞到y(tǒng)會(huì)造成樣品溶液中主成份峰嚴(yán)重?cái)U(kuò)散，使面積歸一法和本身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)失去意義。所以，需采取另一套系統(tǒng)將主成份快速洗脫出來(lái)。為確保兩套系統(tǒng)中對(duì)照品峰與供試品溶液中聚合物峰有可比性，所以需要葡聚糖作為標(biāo)志物。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第42頁(yè)現(xiàn)行方法存在問(wèn)題分離度差：經(jīng)常出現(xiàn)臺(tái)階狀，或根本分不開(kāi)精密度差：對(duì)照品溶液5針精密度在5-7%，甚至10%。響應(yīng)值低：使程度與實(shí)際值相差很遠(yuǎn)。操作繁瑣：兩套液相系統(tǒng)，試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第43頁(yè)試驗(yàn)中應(yīng)注意問(wèn)題原要求柱內(nèi)徑1..3—1.6cm，柱長(zhǎng)30—40cm，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)發(fā)覺(jué)，柱內(nèi)徑降低至1cm，柱長(zhǎng)30—40cm亦可到達(dá)良好分離效果。同時(shí)聚合物保留時(shí)間在流速約為1ml/min時(shí)可小于10分鐘，使試驗(yàn)周期縮短。分離度也有一定提升。流動(dòng)相A中緩沖液濃度減低有利于提升聚合物檢測(cè)靈敏度適當(dāng)洗脫速度可取得適當(dāng)高聚物分離度，流速與分離度成反比。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第44頁(yè)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)要求（1）對(duì)照品保留時(shí)間應(yīng)與蘭色葡聚糖保留時(shí)間基本一致；（2）對(duì)照品測(cè)定和聚合物測(cè)定時(shí)在流動(dòng)相A、B系統(tǒng)中，蘭色葡聚糖保留時(shí)間基本一致。；（3）柱效要求；（4）拖尾因子均應(yīng)小于2.0；（5）對(duì)照品測(cè)定時(shí)峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于5.0%；（6）分離度應(yīng)大于2.0。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第45頁(yè)可能存在問(wèn)題與應(yīng)對(duì)（1）柱效達(dá)不到要求要求。提議在不影響分離度和測(cè)定結(jié)果前提下降低柱效要求，柱效以柱效/米表示更合理。（2）用0.1mg/ml蘭色葡聚糖溶液測(cè)定拖尾因子難以符合要求。能夠考慮適當(dāng)提升蘭色葡聚糖溶液濃度。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第46頁(yè)中國(guó)藥典方法(II)凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來(lái)一個(gè)分離方法，對(duì)高分子物質(zhì)含有很好分離效果。采取TSKGSW（60cm×7.5mm）柱。流動(dòng)相：0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液[（0.01mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.01mol·L-1磷酸二氫鈉溶液（61:39），用0.1mol·L-1磷酸調(diào)整pH至7.0]；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：室溫。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第47頁(yè)方法(II)經(jīng)典圖譜原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第48頁(yè)方法(II)優(yōu)點(diǎn)分離度好：能夠到達(dá)真正基線分離精密度好：對(duì)照品溶液5針精密度在2.0%之內(nèi)。響應(yīng)值合理：使程度與實(shí)際值基本一致。操作簡(jiǎn)捷：一套液相系統(tǒng)，試驗(yàn)時(shí)間短。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第49頁(yè)方法(I)與方法(II)部分驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果比較

試驗(yàn)項(xiàng)目方法(II)方法(I)檢測(cè)限(detectionlimit)5ng2μg重復(fù)進(jìn)樣精密度(precisionofreplicateinjections)/%0.200.92重復(fù)性(repeatability)/%0.945.7原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第50頁(yè)方法(I)與方法(II)結(jié)果比較生產(chǎn)廠家(manufactures)批號(hào)(LotNo.)方法(II)方法(I)SandozIndustrialProductsGmbH408095080.770.09340810501-10.720.08240810502-20.500.056原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第51頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法流動(dòng)相在確保靈敏度前提下，普通采取等度洗脫；必要時(shí)可采取梯度洗脫方式（如：多雜質(zhì)組分分離，等度洗脫分離效果不佳；或雜質(zhì)性質(zhì)相差較大，等度洗脫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，損失靈敏度）例：法莫替丁氯化鈉注射液流動(dòng)相以揮發(fā)性流動(dòng)相為好，普通情況下盡可能不加離子對(duì)試劑。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第52頁(yè)法莫替丁氯化鈉注射液（相關(guān)物質(zhì)）原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法等度洗脫結(jié)果：23.6%年版方法梯度洗脫結(jié)果：28.3%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第53頁(yè)廠家批號(hào)原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)最大單個(gè)雜質(zhì)%相關(guān)物質(zhì)總量%最大單個(gè)雜質(zhì)%相關(guān)物質(zhì)總量%1060301A1.73.70.81.8060301B1.73.90.92.0060301C1.94.00.91.920604091.76.40.93.00604151.86.80.92.90604161.96.60.82.63060214012.57.70.71.7060214022.58.11.01.7060214032.57.60.91.7403080110.228.39.023.60218039.928.28.322.902180414.835.59.727.95060721010.62.4060817010.62.6060815010.62.7606030161.74.40.51.506030171.84.60.51.306030181.64.40.71.6原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第54頁(yè)液相色譜慣用檢測(cè)器光學(xué)檢測(cè)器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測(cè)器）電化學(xué)檢測(cè)器：極譜、庫(kù)侖、安培電學(xué)檢測(cè)器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測(cè)器選擇性檢測(cè)器：靈敏度較高原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第55頁(yè)版藥典二部采取檢測(cè)器情況檢測(cè)器類型品種個(gè)數(shù)紫外檢測(cè)器1333個(gè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器28個(gè)示差檢測(cè)器10個(gè)電導(dǎo)檢測(cè)器5個(gè)原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第56頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于分離及檢測(cè)方法檢測(cè)器普通采取紫外檢測(cè)器：波長(zhǎng)選擇愈加關(guān)注雜質(zhì)最大吸收或最正確檢測(cè)參數(shù)，以提升雜質(zhì)檢測(cè)靈敏度。難以兼顧各雜質(zhì)可選擇多波長(zhǎng)檢測(cè)部分品種采取蒸發(fā)光檢測(cè)器：慎重選取蒸發(fā)光檢測(cè)器，必要時(shí)對(duì)主要試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行描述。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第57頁(yè)相關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)確實(shí)定頭孢地嗪經(jīng)過(guò)采取DAD檢測(cè)器在不一樣檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)各種破壞試驗(yàn)雜質(zhì)改變情況，發(fā)覺(jué)有雜質(zhì)在215nm和262nm紫外吸收不一樣。在215nm吸收與主峰吸收靠近，所以檢測(cè)波長(zhǎng)定在215nm。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第58頁(yè)破壞試驗(yàn)不一樣波長(zhǎng)雜質(zhì)改變加速破壞條件(0.5mg/ml樣品溶液)相關(guān)物質(zhì)(%)波長(zhǎng)215nm254nm262nm未破壞單個(gè)0.180.170.17總量0.360.330.30加0.1mol/L鹽酸1ml，放置7小時(shí)，加0.1mol/L氫氧化鈉1ml單個(gè)4.05.24.8總量10.67.46.5加0.1mol/L氫氧化鈉1ml，放置30分鐘，加0.1mol/L鹽酸1ml單個(gè)5.86.56.7總量10.38.48.24000lx光照二十四小時(shí)單個(gè)1.91.81.6總量4.83.52.9水浴30分鐘單個(gè)12.510.59.3總量37.126.724.1加30%過(guò)氧化氫1ml，放置二十四小時(shí)單個(gè)5.45.55.6總量8.18.08.2原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第59頁(yè)頭孢地嗪紫外吸收?qǐng)D原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第60頁(yè)雜質(zhì)之一紫外吸收?qǐng)D原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第61頁(yè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器優(yōu)點(diǎn)適合用于沒(méi)有特征紫外吸收或紫外吸收很弱待測(cè)物，使用UV時(shí)靈敏度更低；無(wú)需衍生化而直接測(cè)定，防止了衍生帶來(lái)誤差。能夠應(yīng)用有強(qiáng)紫外吸收試劑，如氯仿、丙酮等。適合用于組分復(fù)雜樣品分析，能夠進(jìn)行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測(cè)器，只要待測(cè)物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對(duì)不一樣物質(zhì)，ELSD對(duì)應(yīng)因子改變比其它檢測(cè)器要小得多。對(duì)環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒(méi)有溶劑前緣峰，適合用于保留時(shí)間短物質(zhì)檢測(cè)。與LC-MS色譜條件一致，可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第62頁(yè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器影響ELSD響應(yīng)原因載氣流速、霧化器設(shè)計(jì)與溫度、流動(dòng)相組成和流速等影響霧化過(guò)程。被分析物濃度和體積質(zhì)量決定了進(jìn)入光散射池氣溶膠中顆粒直徑。被分析物折射指數(shù)、光源發(fā)出光強(qiáng)度和波長(zhǎng)、光電倍增管位置等影響散射光強(qiáng)度。光電倍增管靈敏度和入射光強(qiáng)度決定了檢測(cè)效率，反應(yīng)為試驗(yàn)者所觀察峰面積。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第63頁(yè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器硫酸核糖霉素相關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65℃，分流模式）

總雜質(zhì)：5.26%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第64頁(yè)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器硫酸核糖霉素相關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110℃，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第65頁(yè)關(guān)于物料平衡概念baidu中名詞解釋：系指在藥品生產(chǎn)過(guò)程中,同批產(chǎn)品產(chǎn)量和數(shù)量所應(yīng)保持平衡程度。如有顯著誤差,必須查明原因,確認(rèn)無(wú)潛在質(zhì)量事故后,方可按正常事故處理,物料平衡是產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)性指標(biāo)。在液相檢測(cè)相關(guān)物質(zhì)時(shí)物料平衡：應(yīng)該是指經(jīng)過(guò)各種破壞試驗(yàn)后，主成份峰面積降低與雜質(zhì)峰面積增加之間平衡，以確定檢測(cè)方法準(zhǔn)確性。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第66頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度年版加強(qiáng)了對(duì)分離度要求，經(jīng)過(guò)分離度限制來(lái)確保分離重現(xiàn)性。要求雜質(zhì)和主成份、雜質(zhì)之間分離度均要得到良好確保。

（1）采取雜質(zhì)對(duì)照品溴丙胺太林：呫噸酸、呫噸酮、9－羥基溴丙胺太林與溴丙胺太林峰之間分離度均應(yīng)符合要求；尼莫地平：雜質(zhì)I與主峰分離度應(yīng)大于3.0；枸櫞酸氯米芬相關(guān)物質(zhì)中要求其順?lè)串悩?gòu)體分離度不得低于1.3。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第67頁(yè)呫噸酸9－羥基溴丙胺太林呫噸酮溴丙胺太林例：相關(guān)物質(zhì)（溴丙胺太林）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第68頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（2）采取混合對(duì)照品采取純度稍差但雜質(zhì)組分組成與百分比相對(duì)穩(wěn)定原料藥，能夠很好地確保分離重現(xiàn)性。關(guān)鍵在于對(duì)照品提供。例：氯碘羥喹原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第69頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制氯碘羥喹系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖相關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第70頁(yè)阿奇霉素雜質(zhì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖譜原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第71頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（3）經(jīng)過(guò)化學(xué)處理或其它降解方式產(chǎn)生雜質(zhì)（注意：反應(yīng)條件優(yōu)化與重現(xiàn)）例1：鹽酸甲氯芬酯—經(jīng)過(guò)水浴加熱，產(chǎn)生水解產(chǎn)物峰，該峰（相對(duì)保留時(shí)間0.6）與主峰分離度應(yīng)大于6.0；例2：戊酸雌二醇—稱取戊酸雌二醇對(duì)照品10mg，在160℃烘箱中加熱2小時(shí)后，用乙腈溶解并稀釋至25ml，搖勻，量取10μl注入液相色譜儀，戊酸雌二醇與降解產(chǎn)物（相對(duì)保留時(shí)間約為0.92）分離度應(yīng)符合要求。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第72頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制戊酸雌二醇系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖（戊酸雌二醇tR=9.466，降解物tR=8.723，分離度Rs=1.5）相關(guān)物質(zhì)（關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度）原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第73頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（4）采取其它方法制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用樣品（如：采取結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近指標(biāo)性物質(zhì)）例：茶堿，采取茶堿和可可堿配成溶液作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，要求二者分離度大于2.0。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第74頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度

（5）采取相對(duì)保留時(shí)間定位（假如無(wú)法長(zhǎng)久取得該雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)）應(yīng)尤其注意色譜條件耐用性考查如能在標(biāo)準(zhǔn)中列出主成份保留時(shí)間、色譜柱尺寸，可增強(qiáng)此法可操作性。在梯度洗脫色譜系統(tǒng)中為確保方法重現(xiàn)性，應(yīng)對(duì)主峰出峰時(shí)間進(jìn)行要求。例：己酮可可堿經(jīng)過(guò)梯度洗脫，在系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中不但要求相關(guān)雜質(zhì)分離度，同時(shí)要求己酮可可堿出峰時(shí)間為12分鐘。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第75頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：分離度（6）立體異構(gòu)體分離度要求－應(yīng)有消旋體分離度試驗(yàn)－異構(gòu)體峰最好在主成份峰前，且分離度符合要求－當(dāng)異構(gòu)體峰在主成份峰之后時(shí)，應(yīng)用異構(gòu)體程度濃度進(jìn)行分離度試驗(yàn)，以確證分離真實(shí)性。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第76頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：拖尾因子對(duì)于在色譜系統(tǒng)中峰形非對(duì)稱色譜峰要求該色譜峰拖尾因子是很有意義，以確保色譜峰不會(huì)因拖尾嚴(yán)重，而造成雜質(zhì)峰包裹在主峰中未被檢出。例：馬來(lái)酸依那普利色譜條件中，除要求相關(guān)雜質(zhì)分離度外，同時(shí)要求依那普利峰拖尾因子不得過(guò)2.0。

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第77頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：靈敏度試驗(yàn)經(jīng)過(guò)配制靈敏度試驗(yàn)溶液（主成份濃度普通與匯報(bào)限一致），并要求靈敏度試驗(yàn)溶液中主成份信噪比，能夠更加好地確保方法重現(xiàn)性、靈敏度和測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性。例：紫杉醇—對(duì)照溶液（2）（相當(dāng)于0.1%）主成份峰信噪比應(yīng)大于10。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第78頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求：匯報(bào)限經(jīng)過(guò)要求小于對(duì)照溶液主峰面積一定量色譜峰可忽略不計(jì)，可確保積分參數(shù)設(shè)置合理性和一致性。例：甘露醇—供試品溶液色譜圖中，任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.05倍峰可忽略不計(jì)。例：十一酸睪酮—供試品溶液色譜圖中，任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.02倍色譜峰可忽略不計(jì)。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第79頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（1）雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法：采取雜質(zhì)對(duì)照品，按外標(biāo)法計(jì)算，應(yīng)注意該雜質(zhì)線性范圍考查。（注意：如引入了定量雜質(zhì)對(duì)照品，則該雜質(zhì)對(duì)照品質(zhì)量應(yīng)滿足定量要求。）例：熒光素鈉—間苯二酚（雜質(zhì)Ⅰ）、鄰苯二甲酸（雜質(zhì)Ⅱ）例：對(duì)氨基水楊酸鈉—間氨基酚例：地塞米松—倍他米松原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第80頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法（2）加校正因子本身對(duì)照法：若僅在試驗(yàn)過(guò)程中可提供對(duì)應(yīng)質(zhì)量和數(shù)量雜質(zhì)對(duì)照品，而長(zhǎng)久提供符合要求雜質(zhì)對(duì)照品難度較大，則考查該雜質(zhì)相對(duì)于主成份校正因子。（用于測(cè)定校正因子雜質(zhì)對(duì)照品應(yīng)按定量對(duì)照品要求進(jìn)行標(biāo)化），采取加校正因子（超出0.9-1.1）主成份本身對(duì)照法進(jìn)行檢驗(yàn)。

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第81頁(yè)相關(guān)術(shù)語(yǔ)定義響應(yīng)因子（K）：當(dāng)檢測(cè)器輸出信號(hào)與被測(cè)物質(zhì)濃度呈線性響應(yīng)時(shí)，檢測(cè)器輸出信號(hào)（A）與被測(cè)物質(zhì)濃度（C）比值即為響應(yīng)因子。

K=A/C校正因子(F):響應(yīng)因子比值

F=K1/K2原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第82頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于定量方法

（3）不加校正因子主成份本身對(duì)照法：大多數(shù)品種采取了這種方法對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行控制。

（4）峰面積歸一化法：版化學(xué)藥品中極少使用，在確保0.1%或0.05%、甚至更低含量雜質(zhì)能被檢出情況下，主成份濃度就會(huì)很高，如采取該法應(yīng)考慮最小組分和最大組分檢測(cè)響應(yīng)是否在主成份線性范圍內(nèi)。慎重使用。例1：大豆油（供注射用）—脂肪酸組成例2：甘油—二甘醇、乙二醇與其它雜質(zhì)原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第83頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——?dú)庀嗌V法系統(tǒng)適用性要求例1：壬苯醇醚（游離環(huán)氧乙烷）—分離度例2：甘油（二甘醇、乙二醇與其它雜質(zhì)）—分離度、重復(fù)進(jìn)樣精密度原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第84頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——薄層色譜法優(yōu)化方法，分離度試驗(yàn)和靈敏度試驗(yàn)例1：司坦唑醇—與美雄諾龍分離度例2：蘇氨酸（其它氨基酸）

供試品溶液（10mg/ml)對(duì)照溶液(0.05mg/ml)靈敏度測(cè)試溶液(0.02mg/ml)

混合對(duì)照品溶液（蘇氨酸和脯氨酸）—分離度要求：靈敏度測(cè)試溶液應(yīng)顯一個(gè)顯著斑點(diǎn)，混合對(duì)照品溶液中應(yīng)顯兩個(gè)清楚分離斑點(diǎn)，供試品溶液除主斑點(diǎn)外所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)不得超出1個(gè)，其顏色與對(duì)照溶液主斑點(diǎn)比較，不得更深（0.5%）。原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第85頁(yè)ICH新原料藥中雜質(zhì)指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)

ICH要求雜質(zhì)匯報(bào)限<判定限<論證限

原料藥中雜質(zhì)的控制和案例分析專家講座第86頁(yè)相關(guān)物質(zhì)控制相關(guān)物質(zhì)——關(guān)于程度理論上講，應(yīng)該依據(jù)雜質(zhì)毒性、用藥量等各種原因綜合考慮，但因?yàn)槿狈?duì)雜質(zhì)基礎(chǔ)性研究，故普通國(guó)內(nèi)產(chǎn)品質(zhì)量能到達(dá)歐美要求，基本上與其保持一致。