血型血清學若干問題第1頁/共58頁一、標本1、標本采集(1)采錯被檢者（換床、同名……檢測未錯,輸血錯……)(2)護士送檢途中“掉包”(3)大量輸液處采樣(4)抗凝管未混勻,只采干管凝塊血紅細胞有凝集第2頁/共58頁2、被檢者特殊情況(1)新生兒(Ag不成熟,ABO抗體來自母親/IgG……);老年(Ag↓）；②輸異型血/成份血/血漿置換；③疾病：白血病，淋巴?。篈g↓感染→多/全凝集；類B真紅，多發(fā)性骨髓瘤：串錢狀AIHA（自身免疫性溶血性貧血）→干擾正/反定型冷凝集血漿蛋白紊亂,低丙球血癥；④造血干細胞移植后⑤罕見先天性無ABO抗體⑥ABO亞型⑦ABO外抗體第3頁/共58頁二、定型試劑①失效;②使用不當（AHG最適稀釋度）;③效價（抗A≥128，抗B≥64），親合力（3min>1mm2），特異性（A2B不漏檢，抗體篩選，冷凝集素……）;④染色（抗A，B紅，抗-A蘭，抗-B藍），未染色者標簽脫落；⑤試劑紅細胞3-5%；溶血洗3-5個混合；⑥陰/陽對照（酶，聚凝胺）。第4頁/共58頁三、操作1、血清1-2滴（50-100u），滴管450傾斜；2、先加血清，后加細胞??！3、室溫/血清（血漿×）4、離心條件/玻片清潔抗-A（256）0.01ml+NS0.49ml→取0.1ml+(3-5%)RBC0.1ml→1000rpm秒101520301+1+2+2+取離心時間為15秒5、結果觀察（凝塊大小，游離細胞mf，真、假凝集，鏡下膜完整……）第5頁/共58頁ABO定型

正定反定吸收分抗A抗A1抗B抗AB抗HA1A2BO放散泌A1++-+---+-AA,HAint+W+-+W+--+-AA,HA2+--++-/+1%-+-AA,HA3Mf--Mf+-/+20%-+-AA,HAbountuMf--Mf++-+-AHAbend-/+--W++--+-AHAel----+--+-AHAx-/w+--+++-/++-AA,HAm-/w+---/W++--+-AA,HB--++-++--BB,HB5--MFMf+++--BB,HBx--VW+W++++--BHBm---VW++++--BB,HO----++++-HHOh-----++++?-第6頁/共58頁ABO定型考慮的問題1、正反定型不以誰為準？---找出原因標本錯誤（細胞/血清不一個人）輸液處采樣輸異型血新生兒/老年疾病移植ABO外抗體亞型（A2產(chǎn)生抗-A1）試劑2、抗-AB（W+而抗-A，亞型？）3、mf：亞型？輸異型血？第7頁/共58頁4、OC（+）：買？ABO外抗體5、抗-A/抗-B：W+→吸收放散證實6、唾液/分泌型唾液→隔水煮沸15`→離心上清（倍比稀釋）→加量抗血清修正液（1：8？）→室溫靜置1hr→加對應紅細胞→離心→結果（后留稀釋管陽性）修正液：倍比稀釋，4+最后一管稀釋度7、抗-H參考價值必須同時作AB，A，B，O對照比較8、B2？中國報道B2，對應A2，產(chǎn)生抗-B1，抗BW+，H弱于O強于B，1961，Jacobowic：一個家系母及2均B，但B抗原弱，類似A1與A2，稱BK第8頁/共58頁1976，Bryant:提出B2，未被公認：Mollison(Blood+ransfusioninclinicalmedicine),Mohn(Humanbloodgroups),Zmijawsk;CBloodbankingsciences),LawrenceCclinicalpracticesoftransfusionmedicine),肖星甫（輸血技術手冊），李昌林（免疫血液學）……均未承認有B2。9、A2→抗A1→嚴重溶血性輸血反應10、亞型與輸血理論：①29個血型系統(tǒng)，400多種血型抗原；②（一個人）有什么Ag，不產(chǎn)生什么Ab，缺什么Ag，（接受該Ag）可能產(chǎn)生什么Ab。原則：供者Ag只能比受者少，不能比受者多。亞型病人：接受O型血亞型獻血員：當A/B型血用

第9頁/共58頁ABO定型與疾病1、白血病血型變異血型終生不變；基因未變，抗原減弱；“階段性”，可恢復；只變“少”，不變“多”（A/B→O，AB→A/B；不會反過來?。?、血漿蛋白紊亂→凝集肝臟病，傳染?。═B，黑熱?。?，多發(fā)性骨髓病→球蛋白↑心肌梗塞，感染，外傷，腫瘤→纖維蛋白↑辦法：加鹽水→散開洗滌紅細胞至散開→定型例：顧×，正定型時而B，時而AB，反定型抗-A分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均小凝塊，加鹽水減弱，鏡下串錢狀，紅細胞洗滌后正定型為B，血球蛋白紊亂引起●B型。例：薛×，TB，正定似AB，但抗-A50%凝集，鏡下串錢狀，加鹽水串錢狀不完全消失。分析：洗滌3次紅細胞抗-A（-），抗-B（+），●B型。第10頁/共58頁3、類B●

G-桿菌感染，A→“AB”O(jiān)→“B”●

感染控制，“B”消失●

血清中抗-B●

唾液無B物質●

可吸收抗-B，吸收后抗-B效價不降低，放散出抗B（比正常B細胞）多（類B與抗B結合疏）●

加AB血清不凝集（與全/多凝集正別）例：韓×，52y，膽道手術，正定型B，但血清合抗-B，與A型血血主/次側均凝集，與O配血次側凝集。分析：抗-AB（+），抗-B（+，離細胞多），抗-A（-）。血清中抗-B效價8，抗-A效價512，唾液中H，紅細胞上H似O型。，吸收抗-B效價只降 1高度，放散點抗B64?！?/p>

O型，產(chǎn)生類B第11頁/共58頁4、多/全凝集●

細菌污染→RBCT活化，出生6個月后產(chǎn)生抗-T●

多凝集：與部份（？/10）AB型血清凝集全凝集：與“全部”（10份）AB型血清凝集●

真凝集，洗滌細胞不能去除●

（血清中抗T已被自己RBC吸收）無自身凝集●

感染史/血污染●

控制感染后消失●

mf●

凝集4℃強，37℃弱全/多凝集第12頁/共58頁●

正定型→吸收/放散，“全/多凝集RBC”→吸收抗-A/抗-B→RBC吸/放：ABO抗體+抗-T→試劑（ABORBCCT未溶化）→避開抗T干擾，測定ABO抗體吸收情況→判定全/多凝集RBCABO血型，對照：反定型，唾液血型物質→制定ABO血型。例：蘇×，女，8M，肺炎，正定型AB，但配血血清凝集AB紅細胞。分析：正定型抗-AB，抗-A，抗-B均凝集，游離C50%；10份AB型血清（+），室溫強，37℃消失；RBC不吸收抗-A，抗-B；反定型AC（+），BC（+），自身（-）?！馩型，全凝集，輸ORBC，或ORBC+代血漿（無抗體）第13頁/共58頁5、冷凝集素●

AIHA，肺炎→冷凝集素↑，甚至30℃凝集自身/他人RBC?！?/p>

遞增溫度（37℃-45℃）鹽水洗RBC

例：趙×，貧血，正定型“AB”，洗滌RBC后定“O”；與O型配血全側輕凝集。分析：37℃鹽水洗2次，正定型O型；血清中冷凝集壽效價64，宜37℃配血，并作自身對照。第14頁/共58頁6、AIHA，LE●RBC 粘自身抗體→干擾正定型（蛋白介質ABO抗血清中非特異凝集）；血清中自身抗體→干擾反定型?！?/p>

遞增溫度鹽水（22℃→37℃→45℃），反復洗滌RBC→正定型氯喹放散法→正定型：（蘭炯采，中華血液學雜志1988；9（10）：624：二磷酸氯喹以NS配20%，加20%AB血清，PH6.0；壓積RBC0.2ml+20%氯喹液0.8ml→37℃震蕩5分鐘→洗3次→定型），自身吸收（氯喹放散）→反定型，O.C吸收→反定型（同種抗體漏檢？）

第15頁/共58頁例：蘭炯采，中華醫(yī)學檢驗雜志1990；13（5）311：6/21AIHAABO正反定型不合直抗間抗放散前放散后正反正反+4ABBBB+4ABBBB+16ABBBB+4AB？BB+16ABOOO+-ABOOO第16頁/共58頁例：韓×，1y，Hb2g%，正定型：RBC鹽水洗滌→A；反定型：OC（+），AC（+），BC（+），37℃(試管)法：OC(-)，AC(-)，BC（+）朱×，34y，LE,正定型：A，反定型：6℃，20℃凝集AC，37℃減弱，37℃（試管）法：AC（-）張×，伊文氏綜合癥正定型：抗-A（+），抗-B（+），自身（+），鹽

水洗滌不消失。反定型：OC（+），AC（+），BC（+），45℃鹽水洗3次，定O型；與O型血主側凝集，選擇凝集不強于自身對照者輸血，無反應。第17頁/共58頁ABO亞型

●常規(guī)用抗-AB！例：張×，膽囊炎，初定O，配血次側（與O型獻血員血清）凝集，主側（與O型RBC）不凝集。復查：抗-A，B（+），抗-A（-），抗-B（-）（初定血型未用抗-AB而誤定O），RBC吸收放散抗-A，唾液有H，無A物質，血清有抗-B，不凝集A2●

AX例：王×，抗-A（-），抗-B（-）初定O，作O型獻血，配血凝集。7份O型人血清+EC，3份15份凝，4份30分凝；王清+AC（+），BC（-）。唾液有H，無A，B物質，王C吸收抗-B，排除（血袋）污染。●

BX（？）第18頁/共58頁新生/嬰兒ABO定型

胡利亞、蘭炯采，中華醫(yī)學檢驗雜志，1992；15（4）：23127例<6月嬰兒：正、反定型不一致22例，低離子法正反定型一致，且輸血無反應。方法：測定管中加2滴低離子溶液（NaCl75g,甘氨酸18g→加PBS20ml→加H2O至1000ML→侗PH6.7第19頁/共58頁ABO外抗體影響ABO定型

IgM抗體常見于：ABO，P，NM，Lewis例：張×，女，宮外孕，初定AB型，與AB型血配血，主側凝集。分析：正定型抗-AB（+），抗-A（+），抗-B（+），抗-A1（-）→A2B反定型：OC（-），AIC（±），A2C（-），BC（-）→合抗-A1●A2B，合抗-A1，輸B或ORBC+AB血漿第20頁/共58頁例：楊×，B型，楊血清凝集2/4例BC，混合OC（+/-？）分析：楊N，P2型，血清介（IgM）抗P，凡P（+）BC、P（+）OC均凝集。注意：混合OC作抗體篩選細胞缺陷，如3個OC均P2型，便漏檢。

第21頁/共58頁操作技術影響ABO定型

1、責任心：標本弄錯；試劑弄錯/過期/污染；采血不規(guī)范；操作未正規(guī)培訓（先加血清后加細胞）。2、RBC懸液過濃/過稀。3、反應溫度過低/過高。4、離心條件強調(diào)：責任心；正定型：抗-AB；反定型：OC；正、反定型2人分開做；正、反定型不合→找原因。第22頁/共58頁RH定型

1、國產(chǎn)試劑無統(tǒng)一標準；2、常規(guī)RHD定型的爭論；3、初篩RHD（-）復檢：①弱D：AHG法；②部分D：McAb/不同批號（真/假？）抗-D；③報弱D：氯仿/三氯乙烯吸收放散，RBC+抗-D→37℃30分→洗→+等體積鹽水→+等體積氯仿/三氯乙烯混合物→搖10秒→測量1分→敞口→37℃水浴5分，混勻→1000rpm5分→取上層液+O.D（+）RBC→AHG凡直抗（+）RBC，作Rh（聚凝胺，酶，AHG）均產(chǎn)生假陽性。第23頁/共58頁解釋：RhD（-）RBC—I

gG（自身抗體）→不凝集→+抗-D（并未粘上RBC）→“搭橋”劑→凝集（搭的“自身抗體橋”）→誤制Rh血型！原則：

①血型有29個血型系統(tǒng)，400多種Ag，一個人有全部血型系統(tǒng)，但無全部血型Ag；

②有什么Ag，不會產(chǎn)生什么Ab，缺什么Ag，可能產(chǎn)生什么Ab→受者Ag只能比供者少！●弱D，部分D，報弱D：供者→作Rh（+）血用受者→當作Rh（-）受血第24頁/共58頁自身抗體血型特異性

胡利亞、蘭炯采，河南醫(yī)科大學學報1990；25（2）2097例AIHA，RBC乙醚放散：放散液

1:21:41:81:161:321:641:28分析CCDee1+±-----抗ccDEE3+3+3+2+2+1+--Eccdee1+±-----CCDee3+2+1+1+---抗ccDEE3+1+------Cccdee1+±-----第25頁/共58頁自身抗體掩蓋

同種（Rh）抗體

自身抗體→凝集它人OC→干擾抗體篩選→同種抗體（常為Rh）漏檢，隨機OC（如D+）吸收自身抗體（+抗-D），同種抗體（抗-D）可能也被吸收而漏檢。自身RBC→放散（自身Ab）→吸收（血清中自身Ab）→放散→吸收……至吸完自身Ab（直抗-），→抗體篩選/鑒定自身RBC不會吸收同種Ab；（有什么Ag，不會產(chǎn)生什么Ab；無什么Ag，才可能產(chǎn)生什么Ab）。第26頁/共58頁胡利亞，蘭炯采，河南醫(yī)科大學學報1992；27（2）：17821例AIHA：自身RBC/氯奎放散法吸收自身Ab→抗-E2例，抗-cE1例。自身抗體→直抗（+）→干擾：①血型（Rh）；②抗篩；③交叉合血。解決方法：1、熱鹽水反復洗→直抗（-）；2、放散（氯奎法，45℃熱鹽水，甘氨酸法）→直抗（-）；3、選擇凝集不強于自身對照的血液；4、自身抗體血型特異性→選擇合血。第27頁/共58頁影響血型鑒定的方法問題

抗血清：IgM---鹽水法

IgG---“搭橋”（酶，AHG，聚凝胺，低離子，白蛋白……）“搭橋法”，沒有一種100%可靠。酶：易出假，+/-，可發(fā)現(xiàn)“酶型Rh抗體”，方便聚凝胺：假+/-AHG：可靠，但操作麻煩，試劑標準化（最近稀釋度/前帶、后節(jié)現(xiàn)象；單價/多價？）配血卡：（原理為AHG）假+/-

第28頁/共58頁重要技術—吸收放散

原理：1、Ag-Ab結合系可逆反應（條件？/）2、弱抗原吸收能力不弱，放散強；方法：熱放散，氯仿/三氯乙烯，氯喹，乙醚，二甲苯，澤比鹽皂甙，超聲波，酒精……用途：1、證實弱抗原；

2、證實全/多凝集血型；3、分離抗體；4、特殊配血（AIHARBC放散液配血→避開自身Ab血型特異性。注意：選擇最適合的放散方法第29頁/共58頁疑難血型鑒定的參考步驟

1、吸收放散；2、血型物質測定；3、家系分析；4、DNA（參考）對照實驗凡“搭橋法”應設陰/陽/自身對照?？茖W設計對照實驗，逐一檢查反應體系中每個因素。第30頁/共58頁抗體篩選

1、ABO外抗體多為IgG（“搭橋法”檢測）；2、每個人都有IgMABO抗體（鹽水凝集）；3、用抗原A/BRBC）查抗體→5%RB懸液（鹽水介質）+血清（IgMABOAb+IgGABO以外Ab）→IgMABOAb凝集RBC→無法（用“搭橋法”）檢測有無IgGABO外Ab?！?/p>

用OC（IgMABOAb不凝集）查ABO外Ab；OC要含有“全部”血型Ag（1個人不具備全部Ag，用幾個人混合）。第31頁/共58頁查出OC各種Ag分布，選擇2-3個OC，各種血型Ag“互補”，組合具有“全部”Ag。

DCEcePMN……

1+-+-+++-2-+-+++-+組成“篩選細胞”購買注意：是否含“全部”血型Ag，是否每種Ag均“互補”。

第32頁/共58頁簡易方法：隨機3-5個OC混合，“假設”組合具有“全部”血型Ag。太少→可能某Ag均陰性；太多→某抗原呈陽性，但被“稀釋”（如：10個細胞，9個Fyb(-),1個Fyb(+)，抗-Fyb會漏檢。

3-5個OC，各洗3次，混合，3-5%被檢血清（抗-A+抗-D）+篩選C（O，D+）→（鹽水）不凝集（因無H抗原）→聚凝胺/酶/AHG凝集（抗-D凝集D+紅細胞）如果鹽水凝集：含IgMABO以外抗體（P.MN.Lewis……）如果：被檢血清（抗-A+抗-D）+A，D+RBC→凝集：只能認定血清合體，不能判定有無抗-D。第33頁/共58頁抗體篩選陽性→抗體鑒定“譜細胞”選用10份已知各種血型AgO型RBC要求：每種Ag有+/-，合理搭配，被檢血清分別與10份細胞反應（10管）

DCEceJKaJKb……鹽水AHG1 +++++--- +2 -+-++-+- -3 ++--+++ - +4 +-++-++ - +5 ---+-++ - -6 --+++++ - -7 -+-++-- - -8 ++++++- - +9 +++-+++ - +10 ++--+++ - +

陰性排陽性！！不能陽性排陰性！第34頁/共58頁購買譜細胞注意

1、是否包含“全部/常見”血型Ag；2、每種Ag搭配是否合理，+/-比例，3-7/7-3如某Ag+9，-1;或+1，-9均屬不合理。3、無2個Ag格局一樣被檢血清反應譜細胞某Ag合計+-+ABA+B-CDC+D合計A+CB+DN=A+B+C+D第35頁/共58頁(A+B)!(C+D)!(A+C)!(B+D)P=A!B!C!D!N!P<1/20,可靠性>95%;P>1/20,可靠性<95%第36頁/共58頁例:某譜細胞格局中E+9個,E-1個,被除檢樣本“陰性挑陽性”后，余下抗-E不能排除，制定樣本含抗-E，可靠嗎？

血清E+-+909-011

919+1=10

9!!9!1!P==1/10>1/20,可信度<95%，

9!0!0!1!0!結果不可靠。第37頁/共58頁沒有完美無缺的譜細胞

有時“陰性挑陽性”后余下2種以上抗體不能排除。進一步分析：確有2種抗體，還是只有1種抗體（另一種是假陽性）？方法：1、換一套譜細胞；2、查對應的Ag（血型）；3、吸收放散

查對應的Ag：“有什么Ag，不產(chǎn)生什么Ab”→排除其中一種Ab。例：抗體鑒定，余下抗-D，抗-Fya，2種不能排除。如果被檢樣本/患者的血型為D（-），F(xiàn)ya（+）。分析：血清中只含抗-D；無抗-Fya（因為患者有Fya抗原，不會產(chǎn)生抗-Fya）。第38頁/共58頁吸收放散法

用D（-），F(xiàn)ya（+）紅細胞吸收→放散→

+D(-),Fya（+）紅細胞分析：結果（+），有抗-Fya；結果（-），無抗-Fya注意：Rh抗體有“聯(lián)合抗體”，如抗–CE，抗-ce……用吸收放散法，能證明“二者不可分”，例：抗體鑒定余下抗-c，抗-E2種，用c(-),E(+)紅細胞吸收→放散→凝集c(-),E(+)→不凝集c(+),E(-)→含抗-E，凝集c(+),E(-)→含聯(lián)合抗體抗-c，不凝集c(-),E(+)→無抗E。

第39頁/共58頁抗體鑒定幾種情況分析

1、抗體篩選(+)，鑒定(-)→實驗差錯（商業(yè)篩選細胞系譜細胞中排出）；

2、鹽水(+),“搭橋”(-)→實驗差錯（鹽水如真凝集，再加搭橋劑如何會散開？）；

3、譜細胞全陽性→高頻率抗原的抗體/實驗有誤/全凝集。

第40頁/共58頁臨床輸血中其它與血型有關的問題

1、OC，AB漿是“通用血”（理由：患者可接受比自己Ag/Ab少的血！）；

2、Rh陰性病人如無抗-D，接受Rh陽性血→產(chǎn)生抗-D占80%或者1/3→后果：①再次必須輸Rh陰性血；②女性HDNRh(-)含抗-D：必須輸Rh(-)血；Rh(-)無抗-D，盡量輸Rh(-)血，搶救生命時輸Rh(+)血，但講明后果，領導/患者同意生命第一！

3、輸血前試驗“三保險”：血型、抗體篩選、交叉配血第41頁/共58頁

方法相合%

隨機64ABO定型99.4Rh99.8抗體篩選99.94交叉合血99.95自身輸血100第42頁/共58頁

●安全輸血

三保險（血型、抗體篩選、交叉合血）切無掉以輕心！交叉合血是關鍵的關鍵！標本弄錯，一切全完蛋！結果判定：配血“從嚴”！，HDN“從寬”?。皇苷逜g“從少”，供者Ag“從多”；“自創(chuàng)”“改良”方法未列入，文件切勿用于常規(guī)。第43頁/共58頁4、Rh“唯酶抗體”臨床意義？5、沒有一種合血技術“十全十美”或100%保險！建立多種技術。6、既能免疫（妊娠、輸血、血制品……）→Ab↓→交叉合血漏檢→遲發(fā)性溶血反應。7、血型難定，緊急輸血→幾種方法交叉合血“硬配”十抗體篩選。8、輸400ml全血或分離的紅細胞→Hb升高1--1.5gHb升高不到預期值，除外失血（注意隱性失血）→追究“血到哪兒去了？）第44頁/共58頁9、注意因血型不合引起的輸血反應；①急性溶血；②遲發(fā)性溶血（輸血后3-5天，Hb明顯↓，不能用原發(fā)病解釋）；③單純Hb不升高。10、發(fā)生輸血反應，千萬別忘收集制定血型不合所致的“證據(jù)”。①血袋血；②立即采血：直抗(+)，Mf；③第一次尿：Hb。第45頁/共58頁血型血清學實驗若干問題

已知Ag→檢測Ab；已知Ab→檢測Ag；Ag、Ab均未知→棋盤法分析。凝集制定凝集積分

4+12一大塊

3+10幾大塊，少量游離細胞

2+8小塊，游離細胞占1/2

1+5小塊，游離細胞>1/2

±顆粒粗，鏡下制定

W+2VW+-0無凝集

mf少數(shù)大塊，大量游離細胞第46頁/共58頁●AHGRBC+IgMAb→凝集RBC+IgGAb→不凝集+AHG（搭橋）→凝集多價與單價AHG的應用●酶RBC被“消化”→IgGAb凝集（破壞M，N，S，F(xiàn)ya,Fyb）+/-;現(xiàn)用現(xiàn)配/冰凍保存一期法：RBC+抗血清+酶→37℃15分二期法：RBC+酶→37℃15分→洗滌→加抗血清→37℃15分第47頁/共58頁●聚凝胺假凝集+拘椽酸三納→散開RBC+聚凝胺

真凝集+拘椽酸三納→不散開●

配血卡●

低離子，牛白蛋白……第48頁/共58頁AHG直抗：RBC“充分”洗滌+AHG前滯現(xiàn)象抗查“Ig”（無“特異性”）抗IgG抗C3d交價IgGIgM藥物Ab藥物Ab間抗：RBC“充分”洗滌→+血清→37℃30-60分→“充分”洗滌→控干水分→+AHGRBC（體內(nèi)）已粘Ig（無論是否血型Ab）→間抗均“+”；被檢RBC→定血型，血清→定Ab第49頁/共58頁血型物質：ABH抗原存在于體液中游離的ABH抗原意義/用途：分析ABO血型，中和（ABO）天然抗體（混合血漿中）中和ABO抗體。抗體：第50頁/共58頁

天然免疫性產(chǎn)生原因？妊娠，輸血IgIgMIgG通過胎盤不能能血型物質中和（一定效價）不中和2-ME裂解19SIgM為7S無影響最適反應溫度0-25℃37℃第51頁/共58頁凝集反應操作

RBC→洗滌→2-5%懸液磁磚法試管法：矯正離心條件。