1.本文前期退稿主要原因是寫作不清，和編輯郭建秀老師討論以后，建議根據(jù)認(rèn)真修稿后重新投稿。退稿原因：本論文擬驗證肺炎鏈球菌（spn）三磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH｝和熱休克蛋白DnaJ的相互作用，以期闡明DnaJ在GAPDH分泌中的作用，在實驗設(shè)計、結(jié)果判讀等方面存在諸多缺陷。1在前言中對研究的意義交代不清，缺乏依據(jù)。2在表達(dá)GAPDH時，從引物的設(shè)計上看是表達(dá)GAPDH全蛋白，怛PCR擴增時又稱為G叩片段，沒有交代清楚，造成讀者混亂。3將g叩基因構(gòu)建到pETWB載體后，轉(zhuǎn)化巳coliDH5a進行重組質(zhì)粒驗證（方法15）,而后直接誘導(dǎo)表達(dá)（方法1-6）?pET載體在口H"中不可能表達(dá)目標(biāo)蛋白。4損GAPD修克隆抗體效價達(dá)110240000'很高，請給出ELISA檢測的實驗圖片證據(jù)。5細(xì)菌戲雜交系統(tǒng)不而的原理與酹母雙雜交（Y2H）不同，本文用的pBT/pTRG是基于轉(zhuǎn)錄激活的原理設(shè)計的，不是僅靠生長判都匡司作用，如有特殊，請?zhí)峁┰碚f明。質(zhì)粒pTRG和pBT-DnaJ,pTRG-G叩和pBT共轉(zhuǎn)化XL1-BlueMRF^Kap'^該可以在Amp,Cm,Kan三抗平板上生長，而不是文中所述的'陽性克隆只在非選擇平板生長，在其他平板上未頂%長S回顧該團隊的前期研究（蔡鶯鶯的碩士論文），采用了免疫共沉淀和細(xì)菌雙雜交這兩種蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)來篩選能夠與DnaJ有相互作用的蛋白：首先通過Co-IP篩選并經(jīng)MALDI-TOFMS^定出9個可能與DnaJ有相互作用的蛋白，其中包括本文中的GAPDH（Gap）,隨后進一步用細(xì)菌戲雜交技術(shù)證實了Dn殂與9個蛋白中的3個有相互作用，其中不包括GAPDH。兒本文中，作者采用大胴桿菌雙雜交系統(tǒng)驗證了GAPDH和口皿」的相互作用。前后的研究之間存在銜接上的不一致性，就此，希望作者能做出解釋°中」5=1WKII岌件人："W曜"酒h已rfenl況一hi@1啟一sm*炭送時間：由M年11月1U日星期一收件人："郭建秀"〈gangela喊trnmuEdurriA雌：主題：既:退晴通知尊敬的編輯：您好！接到退稿通知，雖然有點難過，怛是同時也感謝您給本文指出的不足！現(xiàn)就退稿原因做出一定解釋。1、本文的研究意義在于，用多種方法證明了肺炎鏈球菌兩種毒力因子GAP和DnaJ的相互作用，為進一步研究二彳相互作用所產(chǎn)生的功能奠定了基礎(chǔ)。2、每一個基因都是一個核昔酸片段，本文中Gap基因全長片段與作"Gap^段“可能會給讀者造成誤解！將予以不正！3、G叩基因克隆大pET28（a）后轉(zhuǎn)化EcoliDH5a進行驗證，然后正確的質(zhì)粒再轉(zhuǎn)AEcoliBL21,進行誘導(dǎo)吊用;是我寫作錯誤！4、抗GADH多克隆抗體效價，具有原始數(shù)據(jù)。套靠前期所爰文章也沒有給出ELIS潟果圖，所以本文也沒有給出。5、本文中細(xì)菌戲雜交采用HIS3-aadAj?X報告基因，結(jié)果的判讀就只通過觀察在選擇平板及雙選擇平板上是否生長。具體原理如下：本實驗采用新的HIS3-.aadA雙報告基因。檢測蛋白和蛋白的相互作用依賴HIS3報告基因的轉(zhuǎn)錄激活，：HIS3激活后，可以在含有3-AT的平板上生長，3-AT是組氧酸3酶的競爭性抑制劑。報告菌由于任出的缺陷，在：PS3沒有激活前，不能和3-AT競爭利用培養(yǎng)基中地組氨酸，在含有3-AT的平板上不能生長。只有當(dāng)HIS3轉(zhuǎn)錄激活后才能有足夠的能力抵消3-AT的競爭作用，利用培養(yǎng)基中的組氨酸，在含3-AT的培養(yǎng)基上可以生長。丑弟激活后進一步激活下游的aadA基因，該基因為鏈霉素抗性基因，可以再含有鏈毒素的平板上生長.Re:Re:退稿通知NOS精簡信息公發(fā)件人：S^M^<gangela@tmiTiu,edu,cn>忸牛氏馬lS<shenfenl23,hi@163,com^J時向:2014^11^14日09:21厚期旬附件：1八■；通昌片lOpng）查看附件馬峰你好，不好意思我今天才看到你的雨毛你的解釋的確有一定道理，主要問題是寫作時交代不清r造成畝稿人的誤解-建迎你認(rèn)真修改r最好請你我不了解你課題臣容的師長、同學(xué)或者朋友通讀一下r看看便們有沒有產(chǎn)空玄些誤解.非常河你修磨?I2.本課題采用大腸桿菌雙雜交的原理如下：本實驗采用新的HIS3-aadA雙報告基因。靶質(zhì)粒pTRG帶四環(huán)素（Tef）抗性基因，誘餌質(zhì)粒pBT帶氯霉素（Camr）抗性基因。HIS3編碼組氨酸合成途徑的一個蛋白，報告菌由于HisB的缺陷，在HIS3沒有激活前，不能和3-AT（組氨酸酶3的競爭性抑制劑）競爭利用培養(yǎng)基中地組氨酸，在含有3-AT的平板上不能生長。只有當(dāng)?shù)鞍缀偷鞍紫嗷プ饔眉せ頗IS3報告基因的轉(zhuǎn)錄，才能和3-AT競爭利用培養(yǎng)基中的組氨酸，可以在含有3-AT的平板上生長，繼而激活下游的aadA（編碼鏈霉素抗性基因，Strepr）基因，可以在含有Strep的平板上生長。如果檢測蛋白沒有相互作用，只能在非選擇平板生長（含Tet，Cam），在選擇平板（含Tet，Cm，3-AT）及雙選擇平板（含Tet，Cm，3-AT，Strep）上不能生長。只有當(dāng)HIS3轉(zhuǎn)錄激活后才能有足夠的能力抵消3-AT的競爭作用，利用培養(yǎng)基中的組氨酸，在含3-AT的培養(yǎng)基上可以生長。HIS3激活后進一步激活下游的aadA基因，該基因為鏈霉素抗性基因，可以再含有鏈霉素的平板上生長。

綜上，本實驗的結(jié)果通過觀察子平板上是否生長來判定誘餌質(zhì)粒pBT氯霉素抗性靶質(zhì)粒pT