第十一章抗生素類藥物的分析張蕾中藥分析教研室第一節(jié)概述1、抗生素的定義

抗生素是指在低微濃度下即可對某些生物的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱。一、抗生素藥物的特點2、抗生素的來源:＊生物合成(發(fā)酵)＊化學合成或者半合成3、抗生素的特點（1）化學純度低：（2）穩(wěn)定性差：活性組分易發(fā)生變化同系物多，異構體多，降解產物多抗生素質量的復雜性

二、抗生素藥物的質量分析（一）鑒別試驗（二）抗生素類藥物常規(guī)檢查項目：用化學法、物理化學法以及生物學法來確認是哪種抗生素1、穩(wěn)定性指標：結晶性、酸堿度、水分或干燥失重等3、安全性指標：異常毒性、熱原或細菌內毒素、降壓物質、無菌試驗2、控制有機和無機雜質的指標：溶液的澄清度與顏色、有關物質、殘留溶劑、熾灼殘渣、重金屬等。（三）效價測定：有效成分的含量測定理化方法生物學法1、生物學測定法：以抗生素抑制細菌生長能力或殺菌能力作為衡量效價標準。稀釋法比濁法管碟瓊脂擴散法國際通用法CHP③

既適用較純精制品,也適用于純度較差產品④

已知或新發(fā)現抗生素都能應用⑤同一類型的抗生素,不需分離,可一次測定它們的總效價。①原理恰好與臨床要求一致，更能夠確定抗生素效價。②靈敏度高，需要樣品量較小優(yōu)點：缺點：①

操作步驟多，測定時間較長②

誤差較大2、物理化學測定法：根據抗生素化學結構利用其理化性質測定主藥的含量。優(yōu)點：①

操作簡單、省時、方法準確②

具有較高的專屬性

①不一定代表生物效價缺點：β–內酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內酯類、氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類林可霉素類、其他抗生素類三、分類（按結構與性質）：第二節(jié)β–內酰胺類抗生素

青霉素類（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)（一）結構和性質：頭孢菌素類7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA（青霉素G、芐青霉素）（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)代表藥物：氨芐西林（氨芐青霉素）（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)代表藥物：阿莫西林（羥氨芐青霉素）（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)代表藥物：7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA頭孢氨芐7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA頭孢拉定頭孢羥氨芐7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA頭孢噻吩鈉7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA酸性性質:與堿金屬(Na+、K+)成鹽1、羧基:

7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)與有機堿(普魯卡因)成鹽普魯卡因青霉素

7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)性質:2、手性C:﹡﹡﹡﹡﹡頭孢菌素類:*C6*

C7青霉素類：*C3*

C5*

C6

7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)性質:﹡﹡﹡﹡﹡頭孢菌素類：青霉素類：3、共軛體系

母核無明顯UV多數有苯環(huán)取代基母核有共軛體系

7-AminocephalospoanicAcid,7-ACA（6-AminopenicillanicAcid,6-APA)不穩(wěn)定四元環(huán)有張力大酰胺鍵拒易水解性質:4、β詠–內酰懲胺環(huán)?、ⅱ＂ぃㄒ唬㎏+、Na+反應二、鑒別農試驗焰色→鮮黃色+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+焰色→紫色+0.1%四苯硼鈉+Ac→↓白

K+（二）尼呈色反則應1.陵羥祖肟酸鐵職反應β-內仆酰胺類紅色絡合共物H+Fe3+/3（紅、饒棕、褐擋）2、硫酸忙及硫酸-池甲醛反應硫酸-變異色酸反應硫酸-硝引酸反應（二）呈掃色反應1.析羥趨肟酸鐵進反應β-內饒酰胺類紅色絡傾合物3.茚駛三酮反應△α-氨基藍紫色α-氨嘗基、伯貌胺某些羥旨基胺類酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍紫色4.幕雙縮桑脲反應β-內酰鑒胺類（開環(huán)分解）似肽鍵藍紫色5.盟與變色酸液-硫酸反炊應活潑“-坊CH2-”青霉素阿莫西衫林氨芐西朋林150℃（縮合）（縮合）6.領與重寫氮苯磺昌酸反應（偶合）酚羥基頭孢哌酮（三）袋沉淀反譯應1.惑遇信酸→↓在過量H科Cl或有機溶誓劑中溶厚解2.亮有機戴胺鹽反梳應重氮化怎-污偶合反建應重氮化-位偶合反應芳伯氨基光譜法（四）1、UV法樣品、分分解產是物Cu2+頭孢氨芐后λmax逐=2淋62nm青霉素V倚鈉A280叮nm/A264n調m=1醒.30悼～1.汁50氯唑青霉素3410.682雙氯青霉素3420.653苯唑青霉素3391.328(nm)2、IR法β-內酰叨胺環(huán)酰胺色譜法（五）1、TLC法對照品奔對照法2、HPLC法三、含量測也定（水解莊）（一）碘量法1.睡原理水解產縮慧物定量過量剩余β-內酰居胺類ChP第一步第二步理論上:踢1mol法青霉素≈上8mol偷I原撫子;實際上肢:1潮mol五青霉素喊≈8~邁9mo拒l篩I原子※溫度，妹放置時間什，pH，砍濃度，碘詢過量程度華，雜質多臨少等影響欲因素。（1）主端試驗：2.方閣法（2）震空白試勻驗：I2液（定過澤量）I2液（定稅過量）例注射用普悲魯卡因青瓦霉素含量測定取裝量差盡異項下的察內容物，潔精密稱取慚約0.1釀2g，置站100m急l量瓶中咬，加水使謎溶解并稀既釋至刻度膠，搖勻，揉精密量取阿5ml，踏置碘瓶中膚，加1m爛ol/匆L氫氧巴化鈉溶塊液1m攻l放置蝕20分尼鐘，再段加1m市ol/衰L鹽酸毯溶液1都ml與宇醋酸-劍醋酸鈉鑒緩沖液債(pH叮4.5釋)5訪ml，極精密加列入碘滴袋定液(責0.0醫(yī)1mo銳l/L吊)1治5ml疏，密塞，搖哲勻，在2季0～25傾℃暗處放遲置20分演鐘，用硫講代硫酸鈉仁滴定液（脾0.01碰mol/牢L）滴定至近終點指時加淀粉統(tǒng)指示液，勿繼續(xù)滴定淺并強力振悶搖，至藍癢色消失；另精密糕量取供匙試品溶幼液5m題l，置釀碘瓶中煤，加醋酸-擺醋酸鈉緩運沖液（p析H4.5晚）5ml摧，精密加供入碘滴定于液（0.樂01mo廊l/L）均15ml奸，密塞，銀搖勻，揮在暗處指放置2限0分鐘案，用硫蚊代硫酸鄉(xiāng)豐鈉滴定坊液（0咐.01次mol脈/L）誓滴定，摩作為空鴉白。同時用搬青霉素快鈉對照慮品同法江測定作咱對照，算出供試戚品的含量順。V樣空V樣對照液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴V對空V對供試液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴空白試驗A、消除你樣品已降篩解產物的遼干擾B、消除怪樣品中其續(xù)他消耗碘租的雜質的干擾C、消除脖碘揮發(fā)造禾成的誤差以未經水策解的樣品迎作空白測崖定采用標準澆品平行對案照測定A、可頭消除溫羽度、p漢H、操角作、環(huán)境等條銜件的影麗響B(tài)、使臥本法測芒定結果生與微生雕物檢定法一致3.條侵件（1）隨弱酸性赤：p肢H4.啊5（2）溫誤度：24貧～26℃溫度＞38℃未水解的愈供試品亦憤消耗碘（3）水蔥解時間：以水解尿20分蘿鐘后的耗碘量最坡大。4.特汪點（1）靈哄敏度高樣品:殲碘反=1聲:8（2）援反應條聯件、實墊驗操作鋼要求高V對、V對空V樣、V樣空1份含量加試劑難次序、棒反應時腥間、滴秘定速度暗相同10~三100層μg/狹ml5、計暈算（二）汞搜量法1.卻原理（水解恨）青霉素族ChP2.方武法樣品以未經水披解的樣品昆作空白測臥定例青霉素鈉含量測定取本品碗約50棉mg，隸精密稱熊定，加品水5ml溶肉解后，加庸1mol蹤蝶/L氫氧哭化鈉溶液毀5ml，覽搖勻，放渠置15分煙鐘，加1憲mol/今L硝酸溶垂液5ml刮，醋酸鹽征緩沖液(譜pH4.閣6)2艷0ml及殲水20m送l，搖勻勝，照電位嚼滴定法(基附錄Ⅶ隸A),用綠鉑電極為詞指示電極卷，汞-硫擔酸亞汞電究極為參比葛電極，在男35～4夢0℃，用紀硝酸汞滴般定液(疫0.02夸mol/鵝L)緩慢尺滴定，車（控制滴巖定過程約傾為15分陽鐘），不頭計第一個卸等當點，鄉(xiāng)豐計算第二途個等當點興時消耗滴招定液的量刷。每1m近l硝酸汞葵滴定液(松0.02睬mol/楚L)相當首于7.1葬28mg約的總青霉殖素(按C16H17N2NaO4S計算蛙)。另取本品痕約0.5辮g，精密冷稱定，加劉水與上述帳醋酸鹽辯緩沖液口各25圖ml，筍振搖使推完全溶解妥，在室舅溫下，裳立即用秋硝酸汞眠滴定液(0尤.02盜mol等/L)程滴定，機終點判輝斷方法惑同上.每1ml濁硝酸汞滴鑒定液（0蕩.02m喝ol/L柿）相當于7.采128體mg的遺降解物晨（按C16H17N2NaO4S計算）?？偳嗝顾厣俚陌俜趾闪颗c降解接物的百分含量之墨差值即為桃青霉素的東含量。3.黎討論（1）以第二次衫滴定突躍共為終點電位法寇指示終裂點（2）反應摩豈爾比1:屬1（3）空白試驗哭消除讓已降解產壇物干擾（4）優(yōu)點不需標裕準品4.計怠算精密稱捷取含水趟量為0描.5%嘆的青霉扶素鈉0.0享502g抵，按藥典舍方法測定攻總青霉素動含量時，掘用去硝傅酸汞滴逢定液(澆0.0惠200孝9mo晉l/L介)6.9解7ml正。另精丙密稱取獄上述樣脊品0.售501葛3g，按藥典其方法測吼定降解雷物含量恥時，用廢去硝酸汞滴定眉液(0.壘0200粒9mol紅/L)1濟.33m軟l。以干燥品計礦算，求揀樣品中款青霉素酬的含量勒。例青霉素煉鈉含量測糖定(0.0產2moL似/L)Miss困Zha券ng，P駁leas鋪ehe隱lpm標e!1.振硫醇汞蠅鹽法（1）鞏原理（咪唑）青霉素族ChP（三）犯可見-徒紫外分厭光光度址法咪唑（2）狠方法對照品詠法（3）計浮算pH9例氨芐西臣林鈉含量測早定取本品冬約60量mg置100仗ml量瓶壯中，加水檔溶解并稀裁釋至刻度慨，搖勻，鞠精密量取暖5ml，偷置另一1炊00ml住量瓶中，悼加水稀釋勉至刻度，噸搖勻，再市精密量取加5ml，緣瑞置25m滋l量瓶中蘆，加硼酸廁緩沖液2平.5ml賴與醋酐的種乙腈溶液迷（1→5惹0）0.代25ml尺，放置5鄉(xiāng)豐min后冠，加咪唑壞溶液至刻笛度，搖勻州，置60腥℃水浴中衛(wèi)，加熱3要0min瘦，取出冷殘卻，照分躬光光度法申（附錄Ⅳ道A）濤，在32纖5nm的史波長處測且定吸收度往；另取氨系芐西林三塑水合物標毀準品，按葉同法測定鎖，計算，秀即得。（3）議討論a.圓咪唑催們化的水解陶產率高，也硫醇汞鹽穩(wěn)革定（≥3h）b.碧側租鏈有-未NH2時，需煤加醋酐科先將其乙酰蛙化后才能腿發(fā)生上述反應pH9（4）及特點A、簡堅便快速B、用標方準品對照略，重現性石良好，RS編D≤1%（水解）2.宣酸水解班-銅鹽那法（1）原吸理穩(wěn)定劑JP青霉素執(zhí)族3.羥咐肟酸比色霸法USP謝JPβ-內酰膏胺類NaO軌HFe3+/3H+紅色第三節(jié)記氨基糖新苷類抗生存素鏈霉素滴雙氫須鏈霉素新霉素懼卡那達霉素慶大霉院素祖巴龍納霉素鏈霉素+N-甲惑基-L膝-葡萄狀糖胺苷元糖鏈霉雙糖突胺一、化學蓄結構及性閘質鏈霉胍+鏈霉糖絳紅糖耕胺紫素胺2-脫氧槍鏈霉胺加洛糖胺N-甲嘗基-3炎-去氧臥-4-具甲基戊暴糖胺

糖苷元

糖慶大霉素慶大霉寨素C復拌合物慶大霉素穿C1R=HR1、R2=CH3慶大霉素就C2R=R2=HR1=CH3慶大霉素宣C1aR、R1、R2=H慶大霉島素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉松素C2bR=R1=HR2=CH3一、結構凈與性質多與硫殺酸成鹽鏈霉素3個慶大霉素5個堿性中心堿性（一）（二）占溶解性水溶性鏈霉素pH5～7.5慶大霉素pH2～12穩(wěn)定（四）押穩(wěn)定性（五）高鏈霉素投水解產損物反應二、鑒別試驗（一）呈共同反戲應羥基胺塔結構1、茚三酮反應△氨基糖苷結構，具羥基胺類和α-氨基酸的性質。N-甲扭基葡萄俱糖胺反克應2、乙酰丙酮OH-吡咯衍生封物對二甲氨基苯甲醛H+紅色水解產物頌N-甲基哨葡萄糖胺匙特有反應(縮合)紅色對二甲氨基苯甲醛H+1、麥芽左酚反應鏈霉糖謀特有反堅應H+分子重排（二）鏈熊霉素的特揀征反應鏈霉胍涌特有反鳴應8-羥基喹啉2、坂近口反應α-萘酚+OH-次溴酸鈉紅色紅色坂口反應N-甲基葡萄糖胺反應麥芽酚反應三、雜質檢查（一）鏈盲霉素雜質將檢查鏈霉素曬B（甘擾露糖鏈薦霉素）方法及T砍LC中的賠對照品法（BP）1.車來源旦反浙應中間體對微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌歲種不同工藝差崗別C組分比例不一致規(guī)定控制歸各組分的噴相對百分蕩含量ChPUSPBPJP慶大霉素C組分的測定（二）λmax=33根0nm衍生化原窄理1.1-烷基既硫代-2訪-烷基異吲哚把衍生物RP－H敗PLC方法：規(guī)定C125~5業(yè)0%C1a15~艙40%C2a+C220~5溫0%計算：峰面積歸蘇一化法（柱前羊衍生化察）λma頂x=3井30n抹m第四節(jié)蓄四迫環(huán)素類抗變生素ABCD123456789101112四環(huán)素（TC）兩tetr號acyc淹line金霉素(CTC腎)chl霧ort錦etr繼acy拼cli簡ne氯四環(huán)除素土霉素(OTC赴)oxy圣tet閉rac捉y(tǒng)cl縱ine氧四環(huán)辮素多西環(huán)藏素(DO紗TC)賣do憑xyc淺ycl愚ine脫氧土遣霉素美他環(huán)挪素（ME媽TC）獲me杜tac鏈ycl揭ine一、結構與性濱質（一）兩性1.與酸、堿均能成鹽2.強酸或強堿中溶解度↑

酚羥基、烯醇型羥基弱酸性二甲胺基弱堿性pH4.某5~7.廟2難溶于探水,p烈H低于4黃或高于8徑時,可以收得到高濃帆度的水溶徒液.吸濕性（二）多含結晶棵水與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+

UV（三）與金屬離子絡合（四）pH3霞~7.驚5熒光不穩(wěn)定性（五）1.演差向異鴨構化淡黃→黑藍色熒光差向四環(huán)異素（土霉傳素、多笛西環(huán)素屬不易差須向異構完化）2.降解反應（1）酸性下降頑解λmax瞇=445叔nmλma雁x=435n毯m橙黃色脫水四動環(huán)素～～TCETCATCEAT勇C＜＜（2）堿性下捉降解（熒光糕）對各種臘氧化劑長都不穩(wěn)歌定，且堿性水溶液特漏別易氧化其，顏色很孔快變深形轎成色素，欄干燥品較擊穩(wěn)定，但樹貯存時遇些光可使顏欣色變深（蜓因空氣氧縮慧化）。3．對迷氧化劑貝不穩(wěn)定霸：二、鑒別試驗H2SO4反應（一）FeCl3反應（二）TLC法（四）正相分描配薄層色色譜EDT君A明克閘服痕量棄金屬造桌成的拖扇尾現象（三）熒光反絮應：四環(huán)素另類在紫綠外燈下取產生熒泛光，其孕降解產朵物也具容有熒光畝，可供月鑒別。三、檢查·早4-差質向四環(huán)更素（E瞇TC）·脫輸水四環(huán)素高（ATC替）·才差向脫眠水四環(huán)櫻素（E綢ATC伐）·鹽奴酸金霉素聚（CTC攔）（一）有鎮(zhèn)關物質TLC