動物微生物應(yīng)用技術(shù)教師：XXX任務(wù)二：病毒的培養(yǎng)技術(shù)一、病毒增殖以自身基因組為模板，借助宿主細胞的酶類，復制出病毒的基因組，病毒的基因組經(jīng)過編碼產(chǎn)生大量的病毒蛋白質(zhì)，經(jīng)過裝配，形成子代病毒。復制周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配與釋放。病毒本身沒有獨立的蛋白合成酶系統(tǒng)，必須借助宿主細胞的蛋白合成體系合成病毒蛋白。35/25/2023病毒的增殖過程5/25/20234成熟脫殼早期蛋白DNA復制核酸游離晚期蛋白吸附穿入釋放裝配一、病毒增殖吸附——病毒與細胞接觸，依賴病毒吸附點，通過包膜表面或表面的配體蛋白與相應(yīng)的受體結(jié)合；穿入——融合（有包膜）、吞飲（無包膜）、直接穿入；脫殼——宿主細胞溶酶體作用下，衣殼破裂、釋放核酸；生物合成——隨核酸類型而異(復制、轉(zhuǎn)錄、翻譯)；裝配——子代病毒核酸和結(jié)構(gòu)蛋白組裝成病毒核衣殼。核內(nèi)裝配、核外裝配；釋放——離開宿主細胞，出芽、擠破、細胞分裂。5/25/20235一、病毒增殖脊椎動物病毒繁殖1.吸附:病毒通過刺突與細胞受體特異結(jié)合吸附到寄主細胞上2.侵入:病毒被吞噬到囊泡中,囊膜破裂,病毒核酸被釋放到細胞質(zhì)。3.脫殼和生物合成:在病毒基因控制下,細胞合成新病毒的基本成分，核酸、衣殼粒蛋白和刺突蛋白。4.成熟裝配:刺突蛋白整合到形成病毒囊膜的細胞膜中,核酸和衣殼粒蛋白裝配成核衣殼。5.釋放:有囊膜病毒以出芽方式離開細胞膜,攜帶著含刺突的囊膜。成熟的病毒粒子具侵染性。5/25/20236動物接種病毒通過注射、口服等途徑進入易感動物體內(nèi)并大量繁殖，使動物產(chǎn)生特定反應(yīng)。要求：被接種的實驗動物健康。血清中無相應(yīng)的病毒抗體。用途：病原學檢查、傳染病的診斷、抗血清制造及疫苗效力檢驗。缺點：實驗動物難于管理、成本高、個體差異大。5/25/20237二、病毒人工培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)法病毒接種于雞胚后，觀察病毒的增值情況，可根據(jù)雞胚的病變和病毒抗原檢測等方法進行判斷。要求：雞胚健康、不含特異性病毒抗體、SPF雞胚。接種途徑：絨毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊等用途：病毒的分離、鑒定、病毒復制、制備抗原和疫苗。5/25/20238二、病毒人工培養(yǎng)細胞培養(yǎng)法在體外利用離體的活細胞進行病毒培養(yǎng)的方法。能導致細胞病變（變形）或者出現(xiàn)血細胞吸附和血凝現(xiàn)象。細胞：原代細胞、二倍體細胞株、傳代細胞。用途：病毒的分離、增值，病毒抗原疫苗制備，中和試驗、病毒空斑測定、克隆純化等。優(yōu)點：離體活細胞不容易受機體免疫力影響，病毒易于生長；可人工選擇多種敏感細胞供病毒生長，病毒產(chǎn)量高；易于觀察病毒的生長特征；便于收集病毒做進一步檢查。5/25/20239二、病毒人工培養(yǎng)動物微生物應(yīng)用技術(shù)教師：XXX項目二：病毒任務(wù)一：病毒的形態(tài)學檢查技術(shù)11非洲豬瘟——非洲豬瘟病毒；狂犬病——狂犬病毒；流感——流感病毒；

AIDS——HIV病毒。5/25/202312一、病毒概述病毒:是在19世紀末才被發(fā)現(xiàn)的一類微小病原體。是一種個體微小，結(jié)構(gòu)簡單，只含一種核酸(DNA或RNA)，必須在活細胞內(nèi)寄生并以復制方式增殖的非細胞型的微生物。5/25/202313第一個記載的植物病毒病當屬郁金香碎色花病，至今荷蘭阿姆斯特丹的博物館還保存著一張1619年荷蘭畫家的一幅得病的郁金香靜物畫。一枚得病的郁金香球莖可換來一頭牛、一頭豬或羊，甚至成噸的谷物或上千磅的奶酪。5/25/202314一、病毒概述1886年，A.Mayer發(fā)現(xiàn)具有傳染性的煙草花葉病1892年，D.Ivanovsky煙草花葉病病原體能通過細菌濾器：一種能通過細菌濾器的“細菌毒素”或“極小的細菌”5/25/202315一、病毒概述1898年，MWBeijerinck對煙草花葉病病原體的研究結(jié)果：

能通過細菌濾器；可被乙醇沉淀而不失去其感染性；能在瓊脂凝膠中擴散；用培養(yǎng)細菌的方法不能被培養(yǎng)出來，推測只能在植物活細胞中生活。1935年：美國斯壇萊從煙草花葉病病葉中提取出了病毒結(jié)晶，又證實了結(jié)晶中含核酸和蛋白質(zhì)兩種成分，而只有核酸具感染和復制能力，并因此而或諾貝爾獎。1952年：Hershey和Chase證實噬菌體的遺傳物質(zhì)僅僅是DNA,開創(chuàng)了病毒分子生物學。1971年后：陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了各種亞病毒——類病毒、朊病毒和擬病毒。5/25/202316個體微小，以nm為測量單位，在電子顯微鏡下才能看見。結(jié)構(gòu)簡單，不具有細胞結(jié)構(gòu)，具有一般化學大分子的特征。一種病毒的毒粒內(nèi)只含有一種核酸，DNA或者RNA。嚴格的活細胞內(nèi)寄生，沒有個體生長，也不進行二均分裂，必須依賴宿主細胞進行自身的核酸復制，形成子代。大部分病毒沒有酶或酶系極不完全，不含催化能量代謝的酶，不能進行獨立的代謝作用。對大多數(shù)抗生素不敏感，對干擾素敏感。在離體條件下，能以無生命的生物大分子狀態(tài)存在，并可長期保持其侵染活力。病毒的特點：5/25/202317金黃色葡萄球菌立克次體衣原體流感病毒痘苗病毒脊髓灰質(zhì)炎病毒嗜菌體腺病毒二、病毒的大小與形態(tài)病毒大小5/25/202318球形蝌蚪狀桿狀子彈狀19病毒形態(tài)5/25/2023二、病毒的大小與形態(tài)病毒體結(jié)構(gòu)模式病毒結(jié)構(gòu)5/25/202320包膜子粒包膜殼粒核衣殼包膜子粒包膜核酸衣殼殼粒核衣殼包膜子粒包膜三、病毒的結(jié)構(gòu)與化學組成核酸——單一核酸構(gòu)成（DNA或RNA）線形或環(huán)狀；雙鏈或單鏈DNA/RNA、分節(jié)段RNA作用——攜帶病毒全部的遺傳信息，決定病毒的形態(tài)、增殖、遺傳變異和感染性。21

衣殼核酸核衣殼核衣殼5/25/2023三、病毒的結(jié)構(gòu)與化學組成衣殼——包裹在核酸外的蛋白質(zhì)，組成殼微粒。作用：保護病毒核酸；與易感C上的受體結(jié)合，輔助受體細胞對易感C的感染；抗原性，誘導機體免疫應(yīng)答；病毒的鑒別和分類。核衣殼22衣殼核酸

核衣殼5/25/2023三、病毒的結(jié)構(gòu)與化學組成

殼粒的排列方式螺旋對稱20面體對稱復合對稱235/25/2023三、病毒的結(jié)構(gòu)與化學組成

包膜包繞在核衣殼外的一層膜樣結(jié)構(gòu)。由特殊蛋白、類脂、多糖。作用：保護作用；刺突與易感細胞結(jié)合；高度抗原性；吸附；致熱；包膜滅活。245/25/2023三、病毒的結(jié)構(gòu)與化學組成動物微生物應(yīng)用技術(shù)教師：XXX任務(wù)三：病毒的特性和致病性一、干擾現(xiàn)象和干擾素干擾現(xiàn)象：當兩種病毒感染同一細胞或機體時，一種病毒抑制另一種病毒的進入或復制，稱病毒的干擾現(xiàn)象。先進入細胞的病毒干擾后進入的病毒；死的干擾活的；缺陷病毒干擾完整病毒。干擾現(xiàn)象的機制：誘導干擾素的產(chǎn)生，抑制被干擾病毒的生物合成；占據(jù)表面受體或改變宿主細胞代謝途徑；競爭干擾，病毒增值時，消耗了宿主細胞的原料等。275/25/2023任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性一、干擾現(xiàn)象和干擾素干擾現(xiàn)象的意義：阻止、中斷病毒病的發(fā)生；是機體非特異免疫的一部分，若給機體注射病毒的活疫苗，可以阻止毒力較強的病毒感染；應(yīng)用兩種或兩種以上的疫苗時，注意避免干擾現(xiàn)象的發(fā)生，以免影響疫苗的效果。285/25/2023任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性

干擾素誘生機理活化翻譯動物體內(nèi)干擾素基因干擾素mRNA干擾素干擾素誘生劑295/25/2023任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性一、干擾現(xiàn)象和干擾素干擾素：當機體活細胞受病毒感染或干擾素誘生劑刺激后產(chǎn)生的能干擾病毒復制的一種小分子蛋白質(zhì)。

干擾素抗病毒機理30非直接滅活病毒

誘生抗病毒蛋白(AVP)，抑制病毒蛋白在細胞內(nèi)合成；增強自然殺傷細胞（NK細胞）、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，增強抗病毒能力；5/25/2023一、干擾現(xiàn)象和干擾素任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性廣譜抗病毒作用；調(diào)節(jié)免疫作用?？勺饔糜赥、B淋巴細胞和NK細胞以增強其活性；抑制細胞分裂；抗腫瘤作用；抑制腫瘤細胞生成以及調(diào)節(jié)機能的免疫機能。

干擾素的作用315/25/2023一、干擾現(xiàn)象和干擾素任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性

干擾素引起的不良反應(yīng)：發(fā)熱、寒戰(zhàn)、肌肉酸痛、全身不適；白細胞、血小板下降、甲亢；精神紊亂、疲勞、無力、嗜睡、胃口欠佳自身免疫性疾?。?25/25/2023一、干擾現(xiàn)象和干擾素任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性能與雞、豚鼠的紅細胞表面受體結(jié)合，出現(xiàn)紅細胞凝集現(xiàn)象。用于診斷雞新城疫、禽流感、流行性乙型腦炎、減蛋綜合征、細小病毒、牛瘟、狂犬病等。5/25/202333二、病毒的血凝現(xiàn)象任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性耐干燥，耐低溫，怕熱；紫外線敏感；氧化劑、強酸、強堿敏感；包膜病毒對脂溶劑敏感；耐甘油；5/25/202334三、病毒的抵抗力任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性病毒遺傳的特點：遺傳方式簡單；受宿主細胞影響；易產(chǎn)生突變。病毒變異的類型：突變；重組；重配；表型混合。病毒基因組研究的意義：保護性表位的研究；高變區(qū)的研究；毒力相關(guān)基因的研究、耐藥性的研究。5/25/202335四、病毒的遺傳與變異任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性36隱性感染：指無明顯臨床癥狀的短暫病毒感染。顯性感染：病毒感染后出現(xiàn)明顯的臨床癥狀。水平感染——病毒主要通過皮膚、粘膜或呼吸道、消化道或泌尿生殖道傳播，但在特定條件下可直接進入血循環(huán)(如輸血、機械損傷、昆蟲叮咬等)而感染機體。垂直感染——指經(jīng)胎盤或產(chǎn)道將病毒由孕婦親代傳播給子代的方式(如HIV及乙肝病毒等)。5/25/2023五、病毒的致病性——感染途徑任務(wù)三：病毒的其他特性和致病性37急性感染：一般病程較短，病毒常隨疾病的痊愈而被消滅或自體內(nèi)排除。持續(xù)感染：病毒在體內(nèi)較長時間存在，在一定時期內(nèi)無明顯癥狀。（1）慢性感染（2