【實驗原理】

顯微鏡的主要部分是目鏡和物鏡，為兩組凸透鏡。物鏡的焦距短，目鏡的焦距較長。當被觀察物體AB放在物鏡前方的1～2倍焦距之間，光線通過物鏡在鏡筒中形成一個倒立的放大實像A′B′，這個實像恰好位于目鏡的焦平面之內，通過目鏡后形成一個放大的倒立虛像A′′B′′。通過調焦裝置使A′′B′′落在人眼睛的明視距離（25mm）內，眼睛看到的物體最清晰。A′′B′′的視角比眼睛直接看AB的視角大得多，因此我們可以用顯微鏡看清非常微小的物體。普通光學顯微鏡成像原理圖

顯微鏡的分類

現(xiàn)代顯微鏡可以分為兩大類：一類是光學顯微鏡，另一類是非光學顯微鏡。這兩類顯微鏡又可根據(jù)不同的情況分成若干類型。

普通光學顯微鏡的基本結構普通光學顯微鏡的構造可分為兩部分：一為機械裝置，二為光學系統(tǒng)。機械裝置由鏡座、鏡筒、物鏡轉換器、載物臺、推動器、粗調節(jié)螺旋和微調節(jié)螺旋等部件組成。光學系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、光圈等組成。普通光學顯微鏡基本構造

顯微鏡的光路光源→光圈→聚光鏡→通光孔→標本（一定要透明）→物鏡→鏡筒→目鏡→眼。1.取鏡和安放

置顯微鏡于平穩(wěn)的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約為3~4cm。鏡檢者姿勢要端正。

（取、放顯微鏡時應一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或紀錄。）顯微鏡的使用

2.低倍鏡的操作置顯微鏡于固定的桌上，接通電源，打開光源。將標本片放在載物臺上，用標本夾夾住，調節(jié)推動器，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調節(jié)粗調螺旋，使物鏡（10×）與標本靠近，眼睛在側向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開雙眼向物鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細準焦螺旋，至目的物清晰為止。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部分，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄所觀察到的結果。

3.高倍鏡的操作使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。旋動轉換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，這說明原來低倍鏡并沒有調準，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點模糊，調節(jié)細準焦螺旋，直到視野清晰。調節(jié)細準焦螺旋時要注意旋轉方向與載物臺上升或下降的關系，防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或載玻片。4.油鏡的操作如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中，緩慢調節(jié)粗調螺旋使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。然后再用細準焦螺旋微微向上調（切忌不用粗準焦螺旋）即可。油鏡觀察完畢，用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。（應特別注意不要在下降鏡頭時用力過猛，或者調焦時誤將粗調節(jié)螺旋向反方向轉動而損壞鏡頭及載玻片）5.換片觀察完一個標本后，如果想要再觀察另一標本時，需先將高倍物鏡（或油鏡）轉回到低倍物鏡，取出標本，按放片的方法換上新片，即可觀察。千萬不可在高倍物鏡（或油鏡）下?lián)Q片，以防損壞鏡頭。6顯微鏡使用后的整理

觀察結束后，調節(jié)光源到最小再關掉電源開關。調節(jié)粗調螺旋，使載物臺下降到最低，取下玻片，擦干凈鏡體，罩上防塵罩，然后放回原處。顯微鏡的保養(yǎng)及注意事項（1）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再取一張擦鏡紙，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一張新擦鏡紙將鏡頭上殘留的二甲苯擦凈。否則粘固透鏡的膠質會被二甲苯溶解，日久鏡片易移位脫落。（2）下降聚光器，打開光圈，使反光鏡垂直于鏡座，以免積聚灰塵。（3）用綢布將鏡身擦拭干凈（切不可用手擦拭），除去灰塵、油污、水汽，以免生銹長霉。（4）使顯微鏡的各部件恢復回原位，下降鏡筒，使物鏡呈“八”字形置于載物臺上，然后將顯微鏡送回鏡箱中。（5）顯微鏡應存放在干燥陰涼的地方，不要放在強烈的日光下暴曬，霉雨季節(jié)應在顯微鏡箱內放置干燥劑（硅膠），如長時間不用，則光學部分應卸下放在干燥器中，以免受潮生霉。（6）顯微鏡應嚴禁與揮發(fā)性藥品或腐蝕性藥品放在一起，如碘片、鹽酸、硫酸等藥品。操作練習

觀察人染色體、核仁組織區(qū)、染色體帶型切片。先在低倍鏡下觀察，選擇染色體分散良好，無重疊的分裂中期細胞（此時已看不到細胞膜與核膜）。然后轉至高倍鏡下仔細觀察分析，最后換油鏡觀察。首先計數(shù)該細胞染色體總數(shù)，再注意觀察染色體的形態(tài)大小，每條染色體含有兩條染色單體，兩染色單體連接處為著絲粒，注意每條染色體的大小和著絲粒的位置。區(qū)分中央著絲粒染色體、亞中央著絲粒染色體、亞端著絲粒染色體和端著絲粒染色體。觀察核仁組織區(qū)在染色體上的位置，在染色體組中的分布。觀察染色體帶型特征。

向培養(yǎng)物中加入適量的秋水仙素，使紡錘體微管解聚，這樣細胞停留在中期，可以獲得大量的分裂細胞。用低滲鹽溶液（一般是0.075mol/L的KCl）處理，使其中的紅細胞及分裂相細胞膜和一部分細胞質除去，最后以氣干法制片，可獲得較好的染色體標本。

核仁組織區(qū)（NOR）就是染色體上編碼5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA的基因（rDNA）所在的部位。染色質上具有轉錄活性或已轉錄過的rRNA基因部位伴有豐富的酸性蛋白，含有SH基團和二硫鍵，可將AgNO3中的Ag+還原成黑色的Ag顆粒，銀染強度與rRNA的轉錄活性有關。

G-顯帶：

Giemsa染料使染色體的不同區(qū)段出現(xiàn)亮暗相間帶紋。DNA上含高比例二硫鍵的氧化態(tài)蛋白質區(qū)域，經(jīng)過一系列處理后顯示暗帶，而另一些含巰基的還原態(tài)蛋白質區(qū)域，為親水性蛋白質，對染料的親和力低，所以不易顯色，為明帶區(qū)。人類染色體人類染色體人類染色體染色體帶型圖譜secondaryconstriction(次縊痕)：染色體上除主縊痕外的縊縮部位。Nucleolarorganizingregion(NOR,核仁組織區(qū))：細胞核特定染色體的次縊痕處，含有rRNA基因的一段染色體區(qū)域，與核仁的形成有關。satellite(隨體)

：位于染色體末端、圓形或圓柱形的染色體片段，通過次縊痕與染色體的主要部分相連。Telomere(端粒)Functions:ForthecompletereplicationofchromosomeProtectthechromosomesfromnucleaseinfluencePreventtheendsofchromosomesfromfusingHumanmitoticchromosomesandkaryotype(核型)andbandingpattern(帶型)Chromosomepainting=multicolorFISH實驗報告格式一、實驗項目名稱二、實驗目的三、實驗原理四、主要儀器設備及耗材五、實驗步驟六、實驗數(shù)據(jù)及處理結果七、思考討論題或體會或對改進實驗的建議顯微結構圖的繪制

生物繪圖中繪出的圖要清楚，并正確的表示出形態(tài)構造的特點，繪圖注意事項如下：(1)繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。(2)圖的大小及在紙上分布的位置要適當。一般畫在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名稱的線條。各引出線條要整齊平列，各部名稱寫在線條右邊。圖的下方寫圖的名稱及放大倍數(shù)（目鏡倍數(shù)×物鏡倍數(shù)）?！咀鳂I(yè)】1．繪制中期人染色體圖，顯示染色體的大小、數(shù)目和形態(tài)。2．記錄染色體總數(shù)，具有核仁組織區(qū)的染色體數(shù)。3．說明G-顯帶原理。4．概述顯微鏡使用的注意事項。(3)畫圖時先用輕淡小點或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準