畢業(yè)設(shè)計(jì)作品題目：飼料中粗蛋白的檢測(cè)方案及誤差預(yù)防畢業(yè)設(shè)計(jì)類別□產(chǎn)品設(shè)計(jì)類?方案設(shè)計(jì)類□工藝設(shè)計(jì)類學(xué)生姓名：學(xué)號(hào)：專業(yè)：食品藥品監(jiān)督管理指導(dǎo)老師姓名：目錄內(nèi)容摘要 1一、 選題背景 2二、飼料中粗蛋白的檢測(cè) 內(nèi)容摘要粗蛋白質(zhì)檢測(cè)是判斷飼料質(zhì)量最常見的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)檢測(cè)。本文通過(guò)選取魚粉這種實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)樣品進(jìn)行了粗蛋白的檢測(cè)，并對(duì)在飼料粗蛋白檢測(cè)中容易出現(xiàn)的檢測(cè)誤差進(jìn)行了分析總結(jié)。關(guān)鍵詞：誤差；粗蛋白；分析飼料中粗蛋白的檢測(cè)方案及誤差預(yù)防選題背景隨著時(shí)代不斷發(fā)展，人們對(duì)食物的要求變得越來(lái)越高，購(gòu)買力也有了很大的提高。對(duì)可食用動(dòng)物更是供不應(yīng)求，所以商家在養(yǎng)殖可食用動(dòng)物時(shí)會(huì)傾向于飼料養(yǎng)殖。而在喂養(yǎng)可食用動(dòng)物時(shí)，所采用的飼料也會(huì)間接影響人們的身體健康，這致使人們對(duì)于飼料檢測(cè)更加關(guān)注。飼料工業(yè)的快速發(fā)展，使各種飼料生產(chǎn)制造企業(yè)不斷涌現(xiàn)。在實(shí)際操作中，常常會(huì)因?yàn)椴僮鞑划?dāng)或沒有注意細(xì)節(jié)等現(xiàn)象，而造成誤差。本文總結(jié)了在粗蛋白檢測(cè)操作過(guò)程中有可能出現(xiàn)的誤差和問(wèn)題。作者實(shí)習(xí)的公司是從事飼料檢測(cè)生產(chǎn)銷售的公司，而作者是從事飼料檢驗(yàn)工作，其中做的最多的就是飼料中粗蛋白的檢驗(yàn)。在學(xué)校學(xué)習(xí)時(shí)做過(guò)食品類粗蛋白的檢驗(yàn)，這對(duì)我在工作中進(jìn)行檢驗(yàn)工作很有幫助，通過(guò)近一年的實(shí)習(xí)讓我對(duì)粗蛋白有了更深的了解。在本文中，作者總結(jié)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能造成誤差的幾種情況，希望能對(duì)從事飼料中粗蛋白檢驗(yàn)工作的人起到參考作用。二、飼料中粗蛋白的檢測(cè)凱氏定氮法測(cè)定樣品，即在催化劑作用下，用濃硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)換成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氮?dú)庖莩?，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測(cè)出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計(jì)算出粗蛋白質(zhì)含量。本文內(nèi)容參照《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》（GB/T6432—1994）。（一）儀器與設(shè)備①實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。②分樣篩：孔徑0.45mm(40目)。③分析天平：感量0001g。④消煮爐或電爐。⑤滴定管:酸式，10、25mL。⑥凱氏燒瓶：250ml⑦凱氏蒸餾裝置⑧錐形瓶：150ml、250ml容量瓶：100ml⑨消煮管：250ml⑩定氮儀（二）試劑與溶液沒有特別要求時(shí)，使用確認(rèn)為分析純的試劑，試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中三級(jí)水的規(guī)定。①硫酸（用作脫水劑氧化劑）：化學(xué)純，含量為98%，無(wú)氮。②混合催化劑：0.4g硫酸銅，6g硫酸鉀或硫酸鈉，需要磨碎混勻。③氫氧化鈉溶液：40%。④硼酸溶液：2%。（吸收氮?dú)猓?。⑤混合指示劑：溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，甲基紅0.1%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，貯存在陰涼處，3個(gè)月有效期。⑥鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：0.1mol/L、0.02mol/L。⑦硫酸銨：270℃烘箱烘干至恒重。⑧硼酸吸收液（三）測(cè)定方法與步驟1、電爐；2、水蒸氣發(fā)生器；3、螺旋夾a；4、小漏斗及棒狀玻璃塞（樣品入口處）；5、反應(yīng)室；6、反應(yīng)室外層；7、橡皮管及螺旋夾b；8、冷凝管；9、蒸餾液接收瓶。1.樣品消化稱取樣品約2.000g（±0.001g），移入干燥的100mL凱氏燒瓶中，加入0.2g硫酸銅和6g硫酸鉀，稍搖勻后瓶口放一小漏斗，加入20mL濃硫酸，將瓶以45°角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上，使用萬(wàn)用電爐，在通風(fēng)櫥中加熱消化，開始時(shí)用低溫加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫停止后，再升高溫度保持微沸，消化至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，繼續(xù)加熱0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，無(wú)損地轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中加水定容至刻度，混勻備用，即為消化液。有機(jī)含氮物與濃硫酸混合加熱消化，使有機(jī)含氮物全部分解，其中含有的碳氧化成CO2逸散，所含的氮生成NH3，并與H2SO4化合成（NH4）2SO4，殘留于消化液中，反應(yīng)式如下：有機(jī)物+H2SO4→CO2↑+（NH4）2SO4+H2PO4+SO2↑上述有機(jī)物含氮物質(zhì)反應(yīng)進(jìn)行得很慢，消化需要費(fèi)很長(zhǎng)的時(shí)間，為了加速反應(yīng)，常加催化劑：硫酸銅0.4g和硫酸鉀6g，兩者混合使用起來(lái)可以促進(jìn)有機(jī)物分解的作用，加速氧化。2.試劑空白試驗(yàn)取與樣品消化相同的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸，按以上同樣方法進(jìn)行消化，冷卻，加水定容至100mL，得試劑空白消化液3.定氮裝置的檢查與洗滌檢查訂單裝置是否裝好。在蒸汽發(fā)生瓶?jī)?nèi)裝水約三分之二，加甲基紅指示劑和硫酸，使水呈酸性，在加入3-4粒玻璃珠或者沸石防止爆沸。測(cè)定前應(yīng)將定氮裝置洗滌2-3次。洗滌方法：從樣品進(jìn)口出加適量水（約占反應(yīng)管體積三分之一）通入蒸汽煮沸，產(chǎn)生的蒸汽沖洗冷凝管，數(shù)分鐘后關(guān)閉夾子a，使反應(yīng)管中的廢液倒吸流入反應(yīng)室外層，打開夾子b由橡皮管排出。4.蒸餾取硼酸試劑20mL于三角瓶中，加入混合指示劑2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夾a關(guān)閉，螺旋夾b開啟的狀態(tài)下，準(zhǔn)確吸取10.0mL樣品消化液，由小漏斗流入反應(yīng)室，并以10mL蒸餾水洗滌進(jìn)樣口流入反應(yīng)室，棒狀玻塞塞緊。使10mL氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室，用少量水沖洗立即將玻塞蓋堅(jiān)，并加水于小玻杯以防漏氣，開啟螺旋夾a，關(guān)閉螺旋夾b，開始蒸餾。通入蒸汽蒸騰10min后，移動(dòng)接收瓶，液面離開凝管下端，再蒸餾2min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，準(zhǔn)備滴定同時(shí)吸取10.0mL試劑空白消化液按上法蒸餾操作。消化所得到的硫酸銨與濃氫氧化鈉作用，分解出NH4OH，用水蒸氣將NH2蒸到一定量，一定濃度，至含有批示劑的H3BO4溶液中，H3BO4吸收NH3后，溶液中H﹢濃度降低，指示劑變色，反應(yīng)式如下：（NH4）2SO4+2NaOH→2NH4OH+Na2SO4NH4OH→NH3↑+H2ONH3+H3BO4→（NH4）H2BO45.滴定以0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至灰色為終點(diǎn)。用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)酸滴定，使H3BO4吸收液恢復(fù)到原來(lái)H﹢的濃度，然后根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)算的當(dāng)量數(shù)計(jì)算出特測(cè)物中的總氮量，反應(yīng)式如下：（NH4）H2BO4+HCl→NH4Cl+H3BO46.數(shù)據(jù)記錄項(xiàng)目第一次第二次第三次樣品消化液（ml）滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml）消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液平均值（ml）7.結(jié)果計(jì)算計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字X——樣品蛋白質(zhì)含量（g/100g）；V1——樣品滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；V2——空白滴定消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積（ml）；c——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度（mol/L）m——樣品的質(zhì)量（g）；二、飼料中粗蛋白檢測(cè)的誤差分析食品工業(yè)、飼料分析、生化研究測(cè)定含氮量經(jīng)常使用的較為準(zhǔn)確的方法是凱氏定氮法[1]。在經(jīng)過(guò)多次粗蛋白檢測(cè)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，盡管微量凱氏定氮法步驟簡(jiǎn)單，精確度高，但在操作過(guò)程中存在諸多的影響因素，極易產(chǎn)生誤差。（一）樣品粉碎度對(duì)粗蛋白測(cè)定的影響在粗蛋白檢測(cè)中，要求被測(cè)樣品粉碎至40目，粉碎必須完全。如果被測(cè)樣品只取部分進(jìn)行粉碎，檢測(cè)結(jié)果將出現(xiàn)偏差；如果被測(cè)樣品粉碎不完全，測(cè)定結(jié)果是粗蛋白的含量偏高[2]。（二）硼酸吸收液的調(diào)節(jié)對(duì)粗蛋白測(cè)定的影響消化的時(shí)候一般選用無(wú)氮蔗糖做空白樣品，為了使實(shí)際樣品和空白樣品的酸度一致，且空白樣品消耗鹽酸的量應(yīng)該以0.05-0.15ml為宜。如果空白樣品的吸收液不變色或者空白樣品消耗鹽酸的量為0，則需要調(diào)節(jié)硼酸吸收液來(lái)獲得正的空白值，可以通過(guò)調(diào)節(jié)硼酸pH值的大小來(lái)調(diào)節(jié)空白值[3]。為了防止出現(xiàn)空白吸收液不變色的現(xiàn)象國(guó)標(biāo)GB/T6432-94中規(guī)定吸收液中加堿，但是如果空白本身就已經(jīng)得到非常合適的滴定值，吸收液中加堿反而不利于精密度的提高。實(shí)驗(yàn)中硼酸吸收液中加適量的堿對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不大，但是會(huì)使空白值增大，因?yàn)槲找核釅A度對(duì)空白樣品的作用和試樣是相同的，所以可以相減扣除。（三）消化對(duì)粗蛋白測(cè)定的影響消化是粗蛋白測(cè)定的第一個(gè)主要步驟。消化的溫度和時(shí)間控制對(duì)測(cè)定結(jié)果起著關(guān)鍵的作用。1）在消化之前，為了防止爆沸，應(yīng)該在凱氏瓶中加入幾粒玻璃珠。在消化過(guò)程中，要嚴(yán)格控制消化的時(shí)間和火力的大小。剛開始消化時(shí)，為了使樣品焦化，同時(shí)產(chǎn)生大量泡沫，要用小火加熱。此時(shí)火力要控制在能使燒瓶?jī)?nèi)的反應(yīng)物沸騰，但不能沖到瓶頸。待20分鐘左右泡沫消失，蒸汽和SO2均勻放出時(shí)，可稍微加大火力15-20分鐘，消化液變綠后，為了加速完成消化，可以再加大火力。消化時(shí)380℃較好，要控制好試樣溫度。溫度過(guò)低消化時(shí)間長(zhǎng)，且消化不完全；過(guò)高會(huì)造成氮的損失。如果消化過(guò)程中不控制火力的大小，剛開始就用大火加熱，就會(huì)使反應(yīng)液往瓶口上沖，上升到燒瓶頸部，使反應(yīng)物粘在瓶頸，從而影響測(cè)定結(jié)果。由于電爐不容易控制溫度，最好是使用可以調(diào)節(jié)的電爐。2）在做飼料中粗蛋白的測(cè)定時(shí)，消化時(shí)間尤為重要。消化時(shí)間過(guò)短會(huì)造成飼料中的氮不能充分轉(zhuǎn)化成氨，會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低；消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成氨損失，也會(huì)引起測(cè)定結(jié)果偏低[4]。實(shí)習(xí)期間經(jīng)過(guò)對(duì)樣品的測(cè)試，所發(fā)現(xiàn)被測(cè)樣品的消化時(shí)間對(duì)粗蛋白測(cè)定的影響為：試樣變綠后消化0.5h粗蛋白含量減少，隨著消化時(shí)間的不斷增加，粗蛋白含量開始逐漸的增長(zhǎng)。從2h開始，粗蛋白含量緩慢增長(zhǎng)，2h的和5h的蛋白含量在允許在1%誤差范圍，可知樣品的消化時(shí)間應(yīng)控制在試樣變綠后2h以后，對(duì)于一般的試樣，3-4h的消化時(shí)間已經(jīng)足夠，粗蛋白含量的提高與過(guò)長(zhǎng)的消化時(shí)間沒有什么特別的關(guān)系。（四）空白試驗(yàn)對(duì)粗蛋白檢測(cè)的影響在粗蛋白檢測(cè)中，空白實(shí)驗(yàn)對(duì)誤差的消除也起著至關(guān)重要的作用，根據(jù)公式：粗蛋白質(zhì)（%）=（其中V1表示空白試驗(yàn)時(shí)，滴定空白溶液所需要的HCl標(biāo)準(zhǔn)液的消耗體積）粗蛋白的含量受空白試驗(yàn)時(shí)的HCl標(biāo)準(zhǔn)液滴定數(shù)值的影響，所以為了減少誤差空白試驗(yàn)應(yīng)力求精確，最好在蒸餾待測(cè)樣品前進(jìn)行。（五）蒸餾對(duì)粗蛋白的檢測(cè)的影響1）凱氏定氮法蒸餾過(guò)程中，應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)密閉性的檢查，整套裝置應(yīng)呈密閉狀態(tài)，所以在蒸餾前應(yīng)檢查整個(gè)蒸餾裝置各連接處的玻璃管與玻璃管是否對(duì)接吻合，連接處橡皮管大小是否合適。要確定系統(tǒng)的密閉性、試劑的使用以及蒸餾的步驟是否有誤，蒸餾試樣前先做回收率。以免產(chǎn)生泄露而或誤差而影響實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。蒸餾裝置還要有良好的氣密性，防止倒吸造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。2）凱氏定氮法蒸餾的過(guò)程中，應(yīng)注意冷凝水要在蒸餾開始時(shí)就開啟。如果蒸餾一段時(shí)間發(fā)現(xiàn)未開啟蒸餾水，要立即停止加熱，待冷凝裝置冷卻后再開通冷凝水，否則會(huì)發(fā)生爆炸。3）在加樣液之前，先把蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有吸收液的錐形瓶?jī)?nèi)，然后將50ml的NaOH加入小燒杯里，再使小燒杯里的NaOH緩緩流下，堿液尚未流完時(shí)，加3-5ml水，一半作為水封，一半流入反應(yīng)室。在加堿液的時(shí)候，整個(gè)反應(yīng)室其余裝置都應(yīng)該保持密封，除了冷凝管路浸在吸收液里，以防止生成的氨氣揮發(fā)。蒸餾完成后用水沖洗冷凝管的末端，洗液均流入錐形瓶?jī)?nèi)。（六）滴定對(duì)粗蛋白檢測(cè)的影響由于普通酸式滴定管管口較大，一滴的量多，為0.08ml，在滴定H3BO4吸收液由藍(lán)綠到灰紅的終點(diǎn)過(guò)程中，極易滴定過(guò)量。過(guò)量后，繼續(xù)滴加HCl標(biāo)準(zhǔn)液，H3BO4吸收液作對(duì)比，其中一瓶滴定過(guò)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：滴定精確的終點(diǎn)顏色和終點(diǎn)顏色差別不大。由此可見，在滴定過(guò)程中如果使用普通酸式滴定管滴定很容易導(dǎo)致滴定過(guò)量[5]。同樣一組平行樣，其滴定所用的HCl標(biāo)準(zhǔn)液量偏差較大。另外，在滴定中，不同的操作者對(duì)滴定終點(diǎn)顏色的判斷有所不同，滴定過(guò)程中顏色的不斷的變化會(huì)引起滴定結(jié)果的誤差，盡管只有半滴的誤差也會(huì)使測(cè)定結(jié)果達(dá)到1%以上的偏差。滴定前應(yīng)將溶劑瓶上下?lián)u動(dòng)幾次，保證溶液濃度均勻一致。滴定時(shí)為了確保滴定結(jié)果準(zhǔn)確，應(yīng)注意排空滴定管底部的氣泡。滴定用的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液必須準(zhǔn)確。三、結(jié)論飼料中粗蛋白測(cè)定受很多因素影響，本文總結(jié)了六種對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響的因素?？偠灾畤?yán)格按照檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，做好原料和成品飼料的分樣，正確使用檢測(cè)儀器，不放過(guò)每一個(gè)小細(xì)節(jié)，注意每一個(gè)小細(xì)節(jié)，注意每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目需要注意的問(wèn)題，就可以準(zhǔn)確、公正、無(wú)誤的給出飼料分析鑒定檢測(cè)結(jié)果，為公司企業(yè)把好產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)，更好地為人民服務(wù)。參考文獻(xiàn)[1]陳福華，鄧世林，肖明俐，吳禮龍飼料中粗蛋白檢測(cè)不確定度的建立[J].微量元素與健康研究.2009（5）：86-87[2]邢磊，王仁華.飼料中粗蛋白含量不同檢測(cè)方法的比較[J].江西飼料.2015（6）：123-124[3]李曉華.飼料分析中粗蛋白檢測(cè)的誤差分析[J].龍巖師專學(xué)報(bào).2015（5）：65-66[4]李建武.生物化學(xué)[M].北京：北京大學(xué)出版社，1990[5]揚(yáng)勝.飼料分析及飼料質(zhì)量檢驗(yàn)技術(shù)[M].北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1993，