免疫學檢測方法中的干擾因素及注意的問題組員：吳聰聰王澤成沈楊包銀偉高迪呂林發(fā)言人：包銀偉PPT制作：吳聰聰免疫學檢測方法中的干擾因素及注意的問題組員：吳聰聰王澤成

背景介紹1

干擾因素2

注意事項3了解一下背景介紹1背景簡介

免疫學檢測就是利用抗原和抗體高度特異性結(jié)合的原理而檢測分析微量物質(zhì)的方法。從20世紀50年代美國學者Berson和Yallow發(fā)明了放射免疫測定技術(shù)檢測胰島素起，免疫學檢測技術(shù)經(jīng)歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測到全自動化；從單個標本檢測到高通量檢測等一系列長足的進步。背景簡介免疫學檢測就是利用抗原和抗

隨著基礎(chǔ)免疫學研究的深入和現(xiàn)代免疫學理論的建立，使大量免疫學檢測技術(shù)被不斷地創(chuàng)新、發(fā)明；在臨床疾病診治的應(yīng)用中也不斷地推陳出新。要保證實驗結(jié)果的正確性和可靠性，必須對實驗整個過程中各個環(huán)節(jié)中的干擾因素有比較清楚的掌握和了解。返回隨著基礎(chǔ)免疫學研究的深入和現(xiàn)代免免疫學檢測-干擾因素標本自身及前處理所造成的干擾因素:類風濕因子（RF）嗜異性抗體自身抗體補體纖維蛋白溶血或黃疸交叉反應(yīng)物質(zhì)外源性物質(zhì)免疫學檢測-干擾因素標本自身及前處理所造成的干擾因素:類風濕因子

患者體內(nèi)存在的類風濕因子能顯著干擾許多免疫學檢測方法。RF對不同檢測系統(tǒng)的干擾程度有所差異，影響程度并不與RF的濃度成正比。目前，在臨床工作中使用的免疫檢測試劑盒大部分均沒有很好地防止RF干擾的措施，國外著名公司要好于國內(nèi)公司。類風濕因子患者體內(nèi)存在的類風濕因子能顯著干擾嗜異性抗體

嗜異性抗體通常是指與其他種類動物的免疫球蛋白產(chǎn)生反應(yīng)的人類抗體，具有廣泛的種特異性。嗜異性抗體干擾的程度、頻率與患者的疾病狀態(tài)、年齡、性別等無關(guān)。嗜異性抗體嗜異性抗體通常是指與其自身抗體嗜靶抗原的自身抗體，如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，能與靶抗原結(jié)合形成復合物，在免疫檢測系統(tǒng)中均可對靶抗原的測定結(jié)果造成負性干擾。判斷嗜靶抗原的自身抗體對檢測的負干擾，因緊密結(jié)合患者的疾病診斷、病史、其他實驗檢查的結(jié)果綜合分析。如甲亢、甲低、I型糖尿病等。自身抗體嗜靶抗原的自身抗體，如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島補體

免疫檢測系統(tǒng)中捕獲抗體在向固相包被中和標記抗體的標記過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)而可能造成假陽性。一些公司為了增加檢測的敏感性，使用鏈霉親和素包被固相，將捕獲抗體用親和素標記，此過程也可引起捕獲抗體的構(gòu)象發(fā)生改變，造成假陽性或假性升高。補體免疫檢測系統(tǒng)中捕獲抗體在向固相包被中和標記纖維蛋白臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時或未完全凝固時即強行離心分離血清，此時血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在免疫檢測過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果，尤其是在使用ELISA檢測時。纖維蛋白臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常溶血或黃疸

各種人為原因引起的標本溶血，導致紅細胞的破壞，血紅蛋白以及細胞碎片和蛋白質(zhì)等釋放出來。溶血對免疫檢測的作用不僅是游離血紅蛋白的影響，更多的是細胞碎片和蛋白質(zhì)等其他溶血產(chǎn)物；血紅蛋白具有過氧化物酶活性，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色。溶血因測定方法的不同可導致對免疫學檢測的正向或負向干擾，且影響大小也有所差異。溶血或黃疸各種人為原因引起的標本溶血，導致紅細交叉反應(yīng)物質(zhì)

待檢標本中存在類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是一些與檢測的靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多克隆抗體測定抗原時對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。交叉反應(yīng)物質(zhì)待檢標本中存在類地高辛、類AFP外源性物質(zhì)

外源性物質(zhì)常常是由于用于免疫測定的血標本采集、貯存等不當所致。標本受細菌污染：因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，被細菌污染的標本在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

外源性物質(zhì)外源性物質(zhì)常常是由于用于免疫測定的血標本管中添加物質(zhì)的影響：抗凝劑、酶抑制劑及分離血清的分離膠等均對免疫檢測有一定干擾作用。標本保存不當：在冰箱中保存過久的標本，會造成假陽性；有時抗原或抗體免疫活性減弱，也會出現(xiàn)假陰性。標本管中添加物質(zhì)的影響：抗凝劑、酶抑制劑及分離血清操作流程不當－造成結(jié)果的改變

對HBV血清標志物五項指標僅抗-HBc總抗體單陽性的血清實行了嚴格的復檢措施，發(fā)現(xiàn)初、復檢結(jié)果的符合率＜50%。偏差如此之大是無法用實驗人員操作不當解釋的。抗-HBc總抗體采用競爭抑制ELISA法檢測,日常工作中無論標本多少，必然是先加完血清標本后再加抗-HBc-HRP。這樣，血清中的抗-HBc與抗-HBc-HRP存在著明顯的“不公平競爭”。操作流程不當－造成結(jié)果的改變對HBV血清標54(57.4)

43

18

12

21

3037(39.3)

21

17

18

38

2019(20.2)

10

12

16

56

1010(10.6)

6

8

15

65

5

7(7.4)

6

7

13

68

2

0

6

3

10

75

0

臨界值－標本A450nm＜0.30.3~0.7＞0.7陰性標本數(shù)放置時間（min）加樣后放置時間對檢測結(jié)果的影響假陽性

（％）54(57.4)43181221放置時間min

A450nm1.25~1.61.61~2.02.01~2.5＞2.5

-

+

-

+

-

+

-

+

0

25

0

20

0

17

0

13

0

2

18

7

20

0

17

0

13

0

5

16

9

19

1

17

0

13

0

10

9

16

18

2

16

1

13

0

20

2

23

12

8

12

5

12

1

30

0

25

416

7

10

10

3

在加樣放置時間改變后陰性標本A450nm與結(jié)果的關(guān)系

放置時間min放置時間min陰性標本數(shù)臨界值－標本A450nm假陽性(%)假陰性(%)＜0.30.3~0.7＞0.7

0

75

10

3

6

0

0

10

74

11

3

61(1.0)

0

20

75

10

3

6

0

0

30

76

9

3

6

01(1.0)

40

74

11

3

61(1.0)

0

加樣同時加入抗-HBc-HRP放置不同時間對檢測結(jié)果的影響放置時間min陰性標本數(shù)臨界值－標本A450nm假陽操作不當－交叉污染目前的全自動加樣系統(tǒng)，不管是一次性加樣針還是永久性加樣針，均難以避免樣本的污染問題。特別是當遇到高濃度的抗原或抗體，沿加樣方向被污染的甚至可能不止1個孔。為了排除這種污染造成的假陽性，建議當同一行/列上（沿加樣方向）出現(xiàn)連續(xù)陽性，并經(jīng)復查仍為陽性時，應(yīng)同時采取新鮮標本進行檢測來加以證實。返回操作不當－交叉污染目前的全自動加樣系統(tǒng)，不管免疫檢測中值得注意的問題1、鉤狀效應(yīng)：由于待檢標本中抗原濃度的顯著升高,而致捕獲抗體不足所造成的檢測結(jié)果假陰性或假低測定值。這種現(xiàn)象可以出現(xiàn)在任何免疫學檢測中，一步法檢測更易見。2、檢測使用