idh1、ercc1和mgm在腦膠質瘤中的表達及其相關性研究

腦膠原瘤是核電站腦腫瘤中發(fā)病率最高、預后最差的腫瘤，對人類健康構成了重大威脅。約占核電站腦腫瘤的35.26%60.69%（平均44.69%）。1數(shù)據(jù)和方法1.1膠質瘤的診斷收集2012年2月-2013年2月云南省腫瘤醫(yī)院手術中切除的84例經病理學診斷為膠質瘤的腫瘤標本組織。84例患者中,男46例,女38例,年齡35~63歲,平均年齡44.6歲,病程2周至6個月。按照WHO關于中樞神經系統(tǒng)腫瘤分類法:Ⅰ級20例、Ⅱ級22例、Ⅲ級20例、Ⅳ級22例。1.2免疫藥物的免疫組織化學所有標本均經過10%中性福爾馬林處理固定,常規(guī)石蠟包埋,切片厚度4μm,進行HE染色,顯微鏡下觀察并選取細胞形態(tài)良好的切片,進行目的蛋白的免疫組織化學SP法染色。濃縮型鼠抗人IDH1單克隆抗體購自廣東深達生物公司,濃縮型鼠抗人ERCC1單克隆抗體購自云南晨綠生物公司,濃縮型鼠抗人MGMT單克隆抗體購自北京中山金橋生物公司。用已知陽性標本作陽性對照,以PBS代替一抗作陰性對照。1.3沒有同時細胞發(fā)揮表達IDH1陽性表達以細胞核出現(xiàn)黃褐至藍褐染色者為準,ERCC1陽性表達以細胞核出現(xiàn)棕黃色者為準,MGMT陽性表達以細胞漿出現(xiàn)淡黃至棕褐染色者為準;陽性率(陽性細胞總數(shù)與腫瘤細胞總數(shù)之比)≥20%為陽性表達,<20%則為陰性。1.4基因表達與病理分級的相關性采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理,基因的表達在病理分級方面的差異性比較采用秩和檢驗,相關性采用Spearman相關分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1ercc1、memt突變陽性表達在細胞內的表達圖1可見IDH1突變陽性表達主要位于細胞核內,免疫組化呈棕黃色。圖2可見ERCC1突變陽性表達主要位于細胞核內,免疫組化亦呈棕黃色染色。圖3可見MGMT突變陽性表達主要位于胞漿內,免疫組化呈棕黃色或棕褐色。以上陽性細胞呈均呈局灶性或分散性不均勻分布。2.2ercc1基因表達在病理分級和表1IDH1基因在Ⅰ級表達4例、Ⅱ級表達10例、Ⅲ級表達12例、Ⅳ級表達18例,IDH1基因的表達在病理分級方面差異有統(tǒng)計學意義;ERCC1基因在Ⅰ級表達2例、Ⅱ級表達10例、Ⅲ級表達14例、Ⅳ級表達18例,ERCC1基因的表達在病理分級方面差異有統(tǒng)計學意義;MGMT基因在Ⅰ級表達6例、Ⅱ級表達10例、Ⅲ級表達12例、Ⅳ級表達14例,MGMT基因的表達在病理分級方面差異無統(tǒng)計學意義(表1)。2.3idh1、memt基因表達與ercc1的相關性IDH1和ERCC1同時表達30例,同時不表達26例,經Spearman相關檢驗,γ=0.332,P=0.032,IDH1基因的表達與ERCC1基因的表達之間具有相關性(表2)。IDH1和MGMT同時表達32例,同時不表達30例,經Spearman相關檢驗,γ=0.477,P=0.002,IDH1基因的表達與MGMT基因的表達之間具有相關性(表3)。ERCC1和MGMT同時表達32例,同時不表達30例,經Spearman相關檢驗,γ=0.477,P=0.064,ERCC1基因的表達與MGMT基因的表達之間無相關性(表4)。3idh1、ercc1的基因表達與膠質瘤的關系最近發(fā)現(xiàn)的異檸檬酸脫氫酶1(IDHI)是體內重要的有脫羧作用的氧化還原酶,是三羧酸循環(huán)的關鍵酶之一。IDH1突變后會出現(xiàn)催化還原型輔酶Ⅱ(NADPH)依賴性的還原反應的能力,將α-酮戊二酸還原為2-羥基戊二酸,2-羥基戊二酸作為IDH突變后生成的代謝廢物,一般在人體細胞中含量很低,如果大量累積,會直接抑制包括人體內組蛋白去甲基化酶與DNA去甲基化酶在內的多個重要雙加氧酶的活力,改變細胞的增殖和生長方式,進而誘發(fā)腫瘤ERCC1基因位于人類染色體19q13.2,其作為核苷酸切除修復途徑的關鍵基因,其高表達在腫瘤化療耐藥的產生中扮演了重要角色MGMT基因位于10q26,在DNA損傷的修復中起著極其重要的作用,主要通過不可逆地將烷化基團從O6-MG轉移到MGMT蛋白145位的半胱氨酸殘基上而保護細胞免受烷化劑的損傷本研究對IDH1突變與ERCC1進行經Spearman相關檢驗,表明IDH1突變和ERCC1在膠質瘤中的表達相關。結果提示IDH1、ERCC1在膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展中有著相互作用、相互調節(jié)的關系,可作為一個潛在的早期診斷的分子標志。臨床診療過程中可通過聯(lián)合IDH1、ERCC1的檢測判斷神經膠質瘤惡性程度,可作為預測及早期診斷膠質瘤的潛在指標,并且可以將其作為判斷預后的重要指標。本研究對IDH1突變與MGMT進行經Spearman相關檢驗,結果表明IDH1突變和MGMT在膠質瘤中的表達相關。結果提示IDH1突變、MGMT的表達在膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展中可能有相互調節(jié)的作用;臨床診療過程中可以通過聯(lián)合檢測IDH1突變、MGMT的表達來判斷膠質瘤患者的預后及制定個性化治療方案。在進行兩個耐藥基因ERCC1與MGMT間經Spearman相關檢驗,未發(fā)現(xiàn)有相關性,說明其耐藥通過不同途徑發(fā)揮作用,但通過聯(lián)合檢