紫菀的毒性部位研究

紫草是科植物紫草。11.1動物昆明種小鼠,雄性,體質(zhì)量18～22g,由南京青龍山實驗動物中心提供。1.2提取溶劑及色譜分析紫菀購自河北省安國市藥材市場,經(jīng)中國藥科大學生藥學研究室張勉教授鑒定,憑證標本保存于中國藥科大學生藥學研究室。提取溶劑為市售90%工業(yè)酒精;石油醚、醋酸乙酯、甲醇、氯仿均為市售分析純;薄層色譜硅膠及柱色譜硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)。谷丙轉氨酶測定試劑盒(ALT),批號:20091112,谷草轉氨酶測定試劑盒(AST),批號:20091112,血清總膽紅素測定試劑盒(TBIL),批號:20091112,均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.3產(chǎn)品來源則采用氣調(diào)使用旋轉蒸發(fā)儀,瑞士Buchi實驗儀器公司產(chǎn)品,型號:R-2000;數(shù)顯恒溫水浴鍋,國華電器有限公司產(chǎn)品,型號:HH-4;電子天平,型號:PL303,Matter-ToledoGroup;醫(yī)用數(shù)控超聲儀,型號:KQ-250DE,昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品。高速冷凍離心機,型號:TLG-16,湘儀集團;1500酶標儀,ThermoElectrom公司產(chǎn)品。22.1紫芹醋酸乙酯類紫菀藥材粉碎成粗粉,分別用10,8,8倍量90%乙醇回流提取3次,每次1h,合并提取液,減壓回收乙醇至無醇味的稠膏狀,加水混懸,依次用石油醚和醋酸乙酯萃取,得到紫菀醋酸乙酯部位。取醋酸乙酯部位浸膏,采用硅膠柱層析,氯仿-甲醇梯度洗脫,各流分根據(jù)薄層色譜結果合并,得到A-1、A-2、A-3三個部分,各部分均以1g/kg(浸膏量)給藥,給藥體積0.2ml/10g,進行急性毒性實驗。取A-2部位浸膏,采用硅膠柱層析,氯仿-甲醇梯度洗脫,收集各極性段的流分根據(jù)薄層色譜結果合并,得到Fr1、Fr2、Fr3三個部分。各部分均以0.4g/kg(浸膏量)給藥,給藥體積0.2ml/10g,進行急性毒性實驗。2.2試驗總劑量和多次給藥健康昆明種雄性小鼠,隨機分組,每組10只。實驗前禁食12h,不禁水,灌胃給予相應的藥物,一次給藥;空白組給以相同體積的0.5%CMC-Na。給藥0.5h后開始觀察小鼠的中毒體征。連續(xù)7d觀察小鼠死亡情況,隨時取出死亡小鼠,記錄死亡時間。2.3紫草毒性部位的小鼠ld由預實驗測得紫菀毒性部位的LD2.4肝“4+2+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++健康昆明種雄性小鼠,隨機分組,每組10只。灌胃給予LD健康昆明種雄性小鼠,隨機分組,每組10只。灌胃給予LD組織病理學檢查判斷標準:根據(jù)病變程度,記為“-”“+”“++”“+++”?！?”表示無明顯病變;“+”表示肝小葉內(nèi)肝細胞水腫或肝細胞脂肪變性的細胞約占25%,肝細胞點狀壞死,肝小葉內(nèi)或匯管區(qū)少量的炎細胞浸潤及肝細胞增生;“++”表示肝小葉內(nèi)肝細胞水腫或肝細胞脂肪變性的細胞約占50%,細胞碎片狀壞死,小葉內(nèi)或匯管區(qū)中等量的炎細胞浸潤;“+++”表示肝小葉內(nèi)肝細胞水腫或肝細胞脂肪變性的細胞數(shù)約占75%或以上,橋接狀壞死或大片壞死,肝小葉內(nèi)或匯管區(qū)大量的炎細胞浸潤或淋巴濾泡形成。33.1急毒實驗結果小鼠經(jīng)灌胃給藥后,A-2組小鼠活動明顯減少,精神萎靡,被毛蓬松潮濕,雙目緊閉,尾巴、爪子呈現(xiàn)烏青色,不自主顫抖等現(xiàn)象,呼吸先快后慢,直至呼吸停止。給藥后3～6h為死亡高峰期,死亡現(xiàn)象均發(fā)生在24h內(nèi)。尸體解剖后,肉眼觀察肝顯黃色或白色斑點,表現(xiàn)為明顯的肝中毒;其他組小鼠反應正常。急毒實驗結果(表1)顯示,A-2組小鼠給藥后全部死亡,其他組未出現(xiàn)死亡,確定A-2有毒性。A-2細分的3組灌胃給藥后,Fr2組小鼠體征表現(xiàn)同A-2組,急毒實驗結果(表2)顯示,Fr2給藥小鼠全部死亡,其他組未出現(xiàn)死亡,故確定Fr2部位為紫菀的毒性部位。3.2紫草毒性部位的小鼠ld紫菀毒性部位不同劑量灌胃給藥后,小鼠死亡分布情況見表3,經(jīng)計算得紫菀毒性部位LD3.3紫草毒性部位對大鼠血清生化指標的影響LD3.4紫草毒性部位對大鼠肝臟組織的形態(tài)影響LD4農(nóng)本草經(jīng)疏紫菀始見于《神農(nóng)本草經(jīng)》,歷代本草專著記載很多,但均未對其毒性有記