高效液相色譜法檢測食用油中多環(huán)芳烴

多環(huán)芳烴（pahs）是環(huán)境中最危險的化學(xué)污染物之一，具有癌、遺傳毒性和環(huán)境毒性。食用油是我國居民烹調(diào)飲食的重要組成部分，有關(guān)多環(huán)芳烴在食用油中的報道較多，污染主要來源于原料、加工過程以及生產(chǎn)工藝，食物在烹調(diào)加工過程中也容易產(chǎn)生多環(huán)芳烴，因此食用油中多環(huán)芳烴污染越來越受到重視。為了降低多環(huán)芳烴對人類的危害，各國政府制定食用油中多環(huán)芳烴的限量標準。我國GB2762-2017《食品安全國家標準食品中污染物限量》食用油中多環(huán)芳烴的檢測技術(shù)主要采用高效液相色譜法1材料和方法1.1油、樹、料，測定總色譜物質(zhì)47種植物油樣品，包括大豆油(4)、玉米油(3)、花生油(9)、葵花籽油(3)、菜籽油(17)、油茶籽油(6)、米糠油(1)、亞麻籽油(2)、紅花籽油(1)、橄欖油(1)，采購于本地超市。標準物質(zhì)：GBW10162橄欖油中苯并[a]芘等四種多環(huán)芳烴成分分析標準物質(zhì)，中國計量科學(xué)研究院。16種多環(huán)芳烴標準溶液，200μg/mL，美國o2si公司；二氯甲烷，農(nóng)殘級，北京百靈威科技有限公司；正己烷，色譜純，賽默飛世爾科技有限公司；乙腈，色譜純，默克公司；MIP-PAHs固相萃取柱，500mg/6mL，上海安譜實驗科技股份有限公司；AthenaPAHs多環(huán)芳烴專用液相色譜柱，4.6mm×250mm，5μm，上海安譜實驗科技股份有限公司。1.2股份、液相色譜儀FotectorPlus-60高通量全自動固相萃取儀，?？萍瘓F股份有限公司；AutoEVA-60全自動氮吹濃縮儀，睿科集團股份有限公司；1260高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；WH-866漩渦混合器，華利達實驗設(shè)備有限公司。1.3所需國所需國所需國均正己烷清洗干稱取0.5g植物油樣品至15mL的玻璃管中，加入3mL正己烷溶解混勻，所需器具事先均經(jīng)過正己烷清洗晾干。將玻璃管按順序置于自動固相萃取儀的15mL上樣架中，運行已編輯好的自動固相萃取方法自動凈化，完成后將洗脫液轉(zhuǎn)移至全自動氮吹儀35℃吹至近干，1mL乙腈定容，超聲10min，過膜后上機檢測。1.4梯度洗脫條件1260高效液相色譜儀配熒光檢測器，采用梯度洗脫：流動相A：水，流動相B：乙腈，流速1.2mL/min，進樣量20μL，柱溫30℃，梯度洗脫條件見表1。全自動固相萃取儀萃取步驟見表2。2結(jié)果與討論2.1多環(huán)芳烴種類環(huán)境及使用容器耗材中容易存在著萘、苊、芴、菲等，由于輕質(zhì)多環(huán)芳烴不穩(wěn)定、易揮發(fā)，而且在實驗中發(fā)現(xiàn)，隨著淋洗溶劑正己烷洗脫量的增多，輕質(zhì)多環(huán)芳烴逐漸從固相萃取柱洗脫，導(dǎo)致回收率越來越低，故本研究將熒蒽、芘、苯并[a]蒽、?、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝和茚并[1,2,3-c,d]芘10種多環(huán)芳烴作為研究對象。2.2洗脫溶劑考察不同類型溶劑對食用油中多環(huán)芳烴組分的洗脫效率有區(qū)別，本研究選擇乙酸乙酯、丙酮、丙酮:乙酸乙酯（V/V1:1）及二氯甲烷對洗脫溶劑考察。通過圖1可見，使用二氯甲烷作為淋洗溶劑，多環(huán)芳烴的回收率73.3%~85.1%，乙酸乙酯50.7%~63.8%，丙酮25.6%~68.5%，丙酮:乙酸乙酯（V/V1:1）48.6%~59.6%，由此可見，二氯甲烷相對于其他溶劑回收率更好。2.3淋洗體積的確定食用油主要組成是甘油三酯，通過淋洗可以洗脫去大部分的油脂，避免雜質(zhì)等對多環(huán)芳烴組分產(chǎn)生干擾。本實驗選用正己烷作為淋洗劑，通過將0、1、2、3、4、5、6、7、8mL體積的正己烷淋洗，10種多環(huán)芳烴回收率見圖2，由圖可見，2mL和3mL正己烷淋洗，回收率分別為83.0%~99.0%和84.4%~94.0%，3mL~8mL隨著淋洗體積的增大，熒蒽和芘回收率越來越低，重質(zhì)多環(huán)芳烴回收率無較大變化，本實驗選擇2ml淋洗體積。2.4全自動固相萃取儀的優(yōu)化本實驗參照國家標準GB5009.265-2021《食品安全國家標準食品中多環(huán)芳烴的測定》全自動固相萃取儀的步驟設(shè)置見表1，更換多種口徑和厚度的密封圈，增強柱塞桿的密封性。通過多次實驗優(yōu)化柱塞桿下探深度、上樣及淋洗體積、洗脫速率等，提高不同孔間固相萃取柱處理的一致性和重復(fù)性。2.5方法驗證2.5.1檢出限和定量限10種多環(huán)芳烴的線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表3，由表可見，0.1~25.0μg/mL的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，以3倍和10倍信噪比（S/N）分別計算檢出限和定量限，檢出限0.1~1.3μg/kg，定量限0.3~4.0μg/kg。本方法靈敏度高，可以滿足日常的檢測需求。2.5.2準確度和精度2.5.2.標準物質(zhì)的測定采購中國計量院研制的GBW10162橄欖油中苯并[a]芘等四種多環(huán)芳烴成分分析標準物質(zhì)，按照“1.3樣品處理”，四種多環(huán)芳烴的檢測結(jié)果及標準物質(zhì)標準值和不確定度（標準物質(zhì)證書），見下表4，檢測結(jié)果均在證書不確定度范圍之內(nèi)。2.5.2.加標回收及方法取玉米油和花生油空白樣品用于加標回收率的測定，分別在低、中、高3個濃度水平加入多環(huán)芳烴標準混合溶液，每個加標水平做5次平行測定，添加回收率及相對標準偏差見表5和表6，10種多環(huán)芳烴在玉米油和花生油的加標回收率分別為80.8%~94.1%和79.2%~114.3%，相對標準偏差分別為0.4%~5.7%和0.4%~5.3%。2.5.3油脂及制品超標率利用建立的全自動固相萃取儀高效液相色譜法對市售47種食用油樣品進行檢測分析，見表7，從實際樣品的檢測上看，47種食用油樣品苯并[a]芘含量均有檢出，未超過GB2762-2017《食品安全國家標準食品中污染物限量》規(guī)定的油脂及其制品10μg/kg的限量。但按照歐盟(EC)No1881/2006對苯并[a]芘和PAH4的限量規(guī)定，統(tǒng)計47種食用油苯并[a]芘超標率為23.4%，PAH4超標率為21.3%。按食用油種類統(tǒng)計，9種花生油中苯并[a]芘和PAH4超標率均為33.3%，17種菜籽油中苯并[a]芘和PAH4超標率為23.5%和17.6%，3種葵花籽油中苯并[a]芘和PAH4總量超標率均為100%，大豆油、玉米油、亞麻籽油、橄欖油及紅花籽油均未超標，花生油、菜籽油、葵花籽油均有污染，且超標較為嚴重。3實際樣品的測定本研究基于分子印跡的原理，通過自動固相萃取儀和高效液相色譜儀，建立食用油中10種多環(huán)芳烴的檢測方法，減少了有機溶劑的消耗和使用，相對于國標液液萃取后再過柱的方法，本方法前處理自動化程度更高，能滿足高通量的檢測要求。本方法的加標回收率79.2%~114.3%，相對標準偏差0.4%~5.7%，方法準確度高，精密度好。通過對市場上采購的47種食用油實際樣品的檢測，苯并[a]芘全部有檢出，但均低于國家標準中規(guī)定的限量水平10μg/kg。按照歐盟對多環(huán)芳烴的限量規(guī)定，苯并[a]芘總體超標率為23.4%，PAH4總體超標率為21.3%，污染情況較為嚴重。47種食用油樣品中，花生油、葵花籽油的苯并[a]芘和PAH4超標率均為6.4%；菜籽油苯并[a]芘和PAH4超標率為8.5%和6.4%；米糠油苯并[a]芘超標率為