川白低聚物根脂溶性化學(xué)成分研究

《傳統(tǒng)中醫(yī)》是中國(guó)第一部藥物專著《神農(nóng)本草經(jīng)》中的重要藥物。它可以出版和散寒，治療感冒和損害太陽(yáng)和黑暗的頭痛。我國(guó)白芷的栽培歷史悠久,因產(chǎn)地不同而區(qū)分為川白芷Angelicadahuricavar.formosanacv.Chuanbaizhi、杭白芷A.dahuricavar.formosanacv.Hangbaizhi等1儀器、試藥和儀器BrukerAVIII400型核磁共振波譜儀(BrukerBioSpinAGFacilities,Fue562llanden,Switzerland),TMS為內(nèi)標(biāo);FinniganTRACE2000GC-MS質(zhì)譜儀(EI-MS,ThermoFinnigan,SanJose,CA,USA)和MDSSCIEXAPIQSTAR型質(zhì)譜儀(ESI-TOF-MS,AppliedBiosystems/MDSSciex.,FosterCity,CA,USA);LC3000半制備型高效液相色譜儀(HPLC,北京創(chuàng)新通恒科技有限公司,北京),配置P3050型二元泵,UV3000型UV檢測(cè)器,CXTH-3000工作站,PhenomenexProdigyODS柱(21.2mm×250mm,10μm);柱色譜硅膠(200~300目)和GF川白芷藥材于2012年7月采自四川遂寧銀發(fā)集團(tuán)川白芷規(guī)范化種植基地,經(jīng)北京大學(xué)楊秀偉教授鑒定為傘形科當(dāng)歸屬植物川白芷A.dahuricavar.formosanacv.Chuanbaizhi的干燥根,憑證標(biāo)本(201207CBZ)存放于北京大學(xué)天然藥物及仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。2氯甲烷-乙酸乙酯的色譜合成及藥物萃取川白芷干燥根粉末6.0kg,用3倍量的75%乙醇水溶液回流提取5次,第1次提取2h,以后每次1h,合并提取液,減壓濃縮,得濃縮液4900mL(取100mL濃縮液冷凍干燥,得干膏粉27.3252g,計(jì)算提取收率為22.32%),繼續(xù)濃縮至2500mL,用2倍量的環(huán)己烷、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇依次萃取3,5,5次,得環(huán)己烷萃取物87.4g(按投料生藥計(jì)算收率為1.46%,下同)、乙酸乙酯萃取物51.4g(收率0.85%)、正丁醇萃取物187.8g(收率3.13%)和殘留水層。取環(huán)己烷萃取物87.4g,經(jīng)硅膠柱色譜,環(huán)己烷-三氯甲烷、三氯甲烷、三氯甲烷-乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫,得到57個(gè)流分。三氯甲烷-乙酸乙酯流分分為2個(gè)部分。第1個(gè)部分經(jīng)硅膠柱色譜,用環(huán)己烷-乙酸乙酯(15∶1~1∶1)梯度洗脫,再反復(fù)經(jīng)硅膠柱色譜和半制備性HPLC(甲醇-水65∶35~70∶30)純化,得化合物1(0.4g)和2(0.2g);第2個(gè)部分經(jīng)硅膠柱色譜,用環(huán)己烷-乙酸乙酯(10∶1~1∶1)梯度洗脫,得化合物3(0.7g)。取乙酸乙酯萃取物51.4g進(jìn)行硅膠柱色譜,環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1~1∶1)、三氯甲烷-甲醇(30∶1~1∶1)梯度洗脫。環(huán)己烷-乙酸乙酯(4∶1)洗脫部分經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶(乙酸乙酯),得到化合物1(3g),其余組份經(jīng)TLC檢識(shí),與環(huán)己烷萃取物相同或類似的流分合并,得到6個(gè)組分(Fr.1~Fr.6)。Fr.2(8.5g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜,環(huán)己烷-乙酸乙酯(40∶1~1∶1)梯度洗脫得化合物4(2g)和Fr.2-1。Fr.2-1再經(jīng)半制備性HPLC(甲醇-水64∶36)分離、純化,得化合物5(10mg,tFr.3(4.4g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜和半制備性HPLC(甲醇-水64∶36)純化,得化合物13(40mg,tFr.4(7.6g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜和半制備性HPLC(甲醇-水55∶45)純化,得化合物17(30mg,tFr.5(6.0g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜,三氯甲烷-甲醇(80∶1~30∶1)洗脫,得化合物20(2.5g),Fr.5-1,Fr.5-2。Fr.5-1經(jīng)半制備性HPLC(乙腈-水35∶65)純化,得化合物21(10mg,tFr.6(9.2g)經(jīng)硅膠柱色譜,三氯甲烷-甲醇(30∶1~1∶1)梯度洗脫,得化合物24(1g),Fr.6-1~Fr.6-4,25(50mg)。Fr.6-1經(jīng)硅膠柱色譜,三氯甲烷-甲醇(30∶1~15∶1)梯度洗脫,然后經(jīng)半制備性HPLC(乙腈-水30∶70)純化,得化合物26(10mg,t3meoh-etoac化合物2和29經(jīng)IR,NMR,MS測(cè)試并與對(duì)照品共薄層色譜分析,分別鑒定為β-谷甾醇和尿嘧啶(uracil)?；衔?無(wú)色針晶(乙酸乙酯);EI-MSm/z270[M]化合物3無(wú)色針晶(乙酸乙酯);EI-MSm/z270[M]化合物4白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z216[M]化合物5白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z230[M]化合物6白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z216[M]化合物7淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z246[M]化合物8淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z258[M]化合物9淡黃色粉末(MeOH);ESI-MSm/z301[M+H]化合物10淡黃色粉末(MeOH);EI-MSm/z270[M]化合物11白色粉末(MeOH);EI-MSm/z230[M]化合物12淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z270[M]化合物13淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z202[M]化合物14白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z286[M]化合物15淡黃色結(jié)晶(無(wú)水乙醇);EI-MSm/z270[M]化合物16淡黃色粉末(MeOH);EI-MSm/z270[M]化合物17淡黃色針晶(EtOAc);EI-MSm/z232[M]化合物18淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z318[M]化合物19無(wú)色針晶(CHCl化合物20白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z334[M]化合物21白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z246[M]化合物22白色粉末(MeOH-EtOAc);ESI-MSm/z247[M+H]化合物23白色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z304[M]化合物24淡黃色粉末(MeOH-EtOAc);EI-MSm/z30