程的制作過程1．取材組織取材的方法是制作切片的一個(gè)重要程序，根據(jù)教學(xué)、科研及外檢的具體要求取自人體(外科手術(shù)切除標(biāo)本、活檢標(biāo)本、尸檢標(biāo)本)或動(dòng)物，并確定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)的基本理論知識(shí)，還要掌握實(shí)際操作技術(shù)，每個(gè)組織器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取組織作為制片材料，不然，無法達(dá)到教學(xué)、科研和臨床診(2)組織塊的大?。核〗M織塊較理想的體積為2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而檢、科研切片，其組織塊可以薄取0.1~0.2cm即可，這樣可以縮短固定脫水透明的時(shí)間，若制作教學(xué)切片厚取0.3~0.5cm，這樣可以同一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。縮現(xiàn)象，有時(shí)甚至完全變形。為固定劑中進(jìn)行固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為1:4~20，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為2.0cm×2.0cm×0.3cm。應(yīng)在血3．脫水透明標(biāo)本經(jīng)過固定和沖洗后，組織中含有較多的水分，必須將組織塊內(nèi)的水分置換出的乙醇。丙酮也是一種脫水能力很強(qiáng)的脫水劑，但因其脫水能力很強(qiáng)，對(duì)組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學(xué)切片時(shí)一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經(jīng)過一個(gè)能溶于石蠟的溶劑有二甲苯、三氯甲烷、水楊酸甲酯等。浸蠟、包埋(2)準(zhǔn)備好切片用具：切片刀、毛筆、眼科鑷子(彎)、漂烘溫控儀緊固螺絲旋緊，使切片時(shí)不產(chǎn)(5)切片的厚度：切片機(jī)的厚度調(diào)節(jié)器上刻有0~50μm或0~25μm，可任意選擇其厚度，石蠟切片的厚度一般在4~6μm。(7)鋪片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在40~45℃的水面上，借水的張力和水的溫度，將略展平。的余水，置入60~65℃恒溫箱內(nèi)或切片漂烘溫控儀的烘箱內(nèi)烤片15~30分鐘，脫去溶化組織間和封片常用的染色方法是蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin)染色法，簡稱H.E染色染藍(lán)色，如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等；伊紅是一種酸性染料，可使組織英、美國家的一些實(shí)驗(yàn)室則采用焰紅(phloxine),此外也有用桔黃G(OrangeG)、比布里希猩紅(Biebrichscarlet)、波爾多紅取材時(shí)，首先要有一把鋒利的取材刀，在切割組織拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般厚度以0.2~0.3cm為適，較容易發(fā)脆材中還應(yīng)十分注意組織內(nèi)是否有縫線或骨組織，如碰到不可避免的行走向切取為佳。的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。固定腐敗，防止了細(xì)胞內(nèi)的酶對(duì)蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各好而中央固定不到的現(xiàn)象。通過實(shí)踐，本人認(rèn)為以酸性12~15％的福爾馬林最佳。大標(biāo)本(2cm12~15％酸性福爾馬林也可以(每100毫升12~15％福爾馬林液內(nèi)加5毫升冰醋酸)。骨髓、結(jié)固定液；少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫，以便適應(yīng)各種特固定后水洗(10~20分鐘)，通常被很多人所忽視，而水洗不徹底，容易造成脫片和染色不織，更不應(yīng)當(dāng)忽視。福爾馬林不利于組織塊內(nèi)抗原的保存的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過度(原因是組織在純酒精內(nèi)時(shí)間過久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化)容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫(溫度超過酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等等。一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃水，組織如果在低濃度酒精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去便加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標(biāo)觀點(diǎn)很片面，在常溫下，如果不是時(shí)間過長(超過24小時(shí)以上)二甲苯并不會(huì)引起組織過份發(fā)較質(zhì)韌的組織：比如子宮肌瘤等相當(dāng)好切)，但是當(dāng)二甲苯溫度超 于此溫度范圍時(shí)，組織容易脫水，可適當(dāng)縮短脫水時(shí)間；而室溫低于該溫度范圍時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長脫水時(shí)間(如能保證在一個(gè)恒定的溫度下最佳)。更換試劑，應(yīng)以否則，至少會(huì)有2~3批組織切片不好。根組織透明后，在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。用其他浸透劑(如火棉膠、明膠等)滲入56~58℃左右。(第一道也可用硬脂酸石蠟1：3混合浸蠟，不僅可軟組織，而且由于硬脂酸是弱酸性的，對(duì)細(xì)胞核有媒染作用，核漿比鮮明，但容易脫片；同時(shí)對(duì)疏松組織容易散片)。有條件的可以每天打開第一道石蠟的蓋蠟如有雜質(zhì)盡可能過濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受常用的是石蠟包埋法。包埋的關(guān)鍵一是平整，二是方去兩邊的余蠟(所謂的兩邊，指切片時(shí)與切片刀垂直的兩側(cè))。包埋時(shí)還應(yīng)注意有無縫線，紙標(biāo)本，不能按一般的規(guī)律取最大包埋面，應(yīng)采取窄面豎起包的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同，但都要求用力均勻，使刀口和在刀口上，而不是在刀背上。切片刀應(yīng)用一次磨一次，每次僅間的磨刀，容易把已經(jīng)磨出的鋒刃磨掉，檢查切片刀是否鋒利，用手試摸能證明切片刀是否真正鋒利，而且容易損害刀口，最簡單的辦下。每次磨好刀后，應(yīng)將磨刀石用蓋子蓋好，以防灰塵掉在磨錯(cuò)，但由于磨刀的角度和時(shí)間不易精確掌握，故效果并不理很難用機(jī)器磨出來。一次性刀片在很大程度上解決了這個(gè)問。切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在50~100微米左右，質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進(jìn)行細(xì)切。細(xì)切至組織塊表面均勻一致，無白點(diǎn)后，織塊一致，切片的不完整，常會(huì)將重要病變遺漏，導(dǎo)致誤應(yīng)注意組織包埋的方向，組織的層次，纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切在上面，如皮膚的表皮，腫塊的包膜，胃腸道的漿膜等，這樣可以片機(jī)時(shí)應(yīng)用力均勻，避免用力過重。對(duì)脫鈣組織、骨髓，以及已知口，以減少其他部位出現(xiàn)缺口的可能性。在使用毛筆展片時(shí)要防止切到一根筆絲，就會(huì)增加一個(gè)缺口。切片厚度一般為4~6微米，有人認(rèn)為：只要切片機(jī)刻度標(biāo)著幾個(gè)微米，切出來的片子就是幾個(gè)微米。其實(shí)不然，當(dāng)切片刀不鋒利，過高，并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)(5)厚薄不均：可能是刀、刀座及蠟塊未組織，放入加熱水浴的丙酮內(nèi)(80℃)，30~60分鐘，再進(jìn)行透明浸蠟包埋切片，也許會(huì)好一，片子上的皺摺就無法再展開，這有二個(gè)方法可以解決：第一、可以，這樣的片子就會(huì)非常平整，放到熱水里就會(huì)自然展開，比較方便快開，然后再將切片移到熱水，這樣的片子會(huì)較薄;如酒精濃度過高，容易引脂肪之類細(xì)胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會(huì)散開，故不能用此苯放入溫箱內(nèi)預(yù)熱(37℃左右)脫蠟，最高不得超過60℃。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來水藍(lán)化，并充分水洗(流水沖洗5分鐘以上)，以防鹽