fame全自動(dòng)酶免處理系統(tǒng)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

微型自動(dòng)酶處理系統(tǒng)是由瑞士hamint公司生產(chǎn)的一個(gè)完全自動(dòng)化的酶標(biāo)準(zhǔn)處理系統(tǒng)。它可以執(zhí)行各種必要的elisa試驗(yàn)操作。此外，該機(jī)器還是一個(gè)開放系統(tǒng)，可以同時(shí)處理不同制造商的不同elisa試驗(yàn)項(xiàng)目。工作靈活、處理能力大、日常維護(hù)方便等特點(diǎn)。筆者參照國內(nèi)外最新的文獻(xiàn)報(bào)道和實(shí)際工作學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn),從FAME全自動(dòng)酶免分析儀的概況、發(fā)展、常見問題、檢測(cè)意義等幾個(gè)方面進(jìn)行綜述。1酶免實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化、網(wǎng)絡(luò)化的運(yùn)動(dòng),將給中國新醫(yī)療服務(wù)帶來新的利益酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA/EIA,簡(jiǎn)稱“酶免試驗(yàn)”)是一項(xiàng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)中基本的、常規(guī)的檢測(cè)技術(shù)。盡管在90年代初期,由于以聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)為代表的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展,人們預(yù)測(cè)酶免試驗(yàn)將被更高靈敏度、數(shù)百萬級(jí)信號(hào)放大的、病原體水平檢測(cè)的核酸放大試驗(yàn)所取代。但由于免疫標(biāo)志物具有無法替代的臨床意義,以及酶免試驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)便、技術(shù)可靠的特點(diǎn),尤其是90年代末期ELISA檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度和特異性以及檢測(cè)過程的自動(dòng)化得到顯著提高與完善,因此,酶免試驗(yàn)成為傳染病血清學(xué)標(biāo)志物、腫瘤標(biāo)志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)檢測(cè)的主導(dǎo)技術(shù)。應(yīng)當(dāng)指出,酶免試驗(yàn)結(jié)果在臨床上僅是醫(yī)生診斷的參考數(shù)據(jù);而在血站常規(guī)工作中,血液篩查實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將直接決定血液的安全性。以日本為代表的“全面實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化”(TLA)運(yùn)動(dòng),對(duì)于全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)產(chǎn)生了巨大的需求。90年代初期手工酶免試驗(yàn)操作曾經(jīng)成為TLA的主要障礙。目前,由于全面實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化具有標(biāo)準(zhǔn)化、高效率、高質(zhì)量的自動(dòng)化與網(wǎng)絡(luò)化特征,正成為臨床實(shí)驗(yàn)室發(fā)展的新趨勢(shì)。酶免實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化與標(biāo)準(zhǔn)化,是全面實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)(LAS)的一部分。實(shí)現(xiàn)酶免試驗(yàn)自動(dòng)化、網(wǎng)絡(luò)化,是涉及酶免加樣(前處理)設(shè)備、酶免分析(后處理)設(shè)備與醫(yī)學(xué)信息技術(shù)、實(shí)驗(yàn)室管理科學(xué)的嶄新系統(tǒng)集成技術(shù),是邁向全面實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化的重要基石。截止1999年底,在日本已有160多家醫(yī)院使用實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)(LAS),實(shí)現(xiàn)了全面實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化(TLA)。作為面向21世紀(jì)先進(jìn)、高度綜合的LAS,目前正向兩個(gè)方向發(fā)展,即用戶導(dǎo)向的開放系統(tǒng)和制造商一攬子的封閉系統(tǒng)。前者是建立在目前用戶已有設(shè)備基礎(chǔ)上,是模塊化的系統(tǒng)整合,但需要制造商建立并遵守標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)議。實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)是由樣本處理與傳遞技術(shù)、開放式實(shí)驗(yàn)室儀器和開放式實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(LIS)集成而至,并與醫(yī)院信息系統(tǒng)(HIS)聯(lián)網(wǎng)。實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)力將達(dá)到每天20萬次試驗(yàn)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)如生化、血凝、血液常規(guī)、輸血項(xiàng)目等在1h內(nèi)發(fā)報(bào)告,而檢測(cè)時(shí)間長的項(xiàng)目如酶免、病理也將在2h內(nèi)發(fā)出報(bào)告。高分析生產(chǎn)力的酶免分析系統(tǒng),快速發(fā)報(bào)告意味著快速診斷、快速治療,將給患者與醫(yī)院帶來雙重利益。實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化的目標(biāo)就是提高檢驗(yàn)的質(zhì)量,增收節(jié)支。可以預(yù)測(cè),作為一項(xiàng)醫(yī)療服務(wù)競(jìng)爭(zhēng)策略,酶免實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化、網(wǎng)絡(luò)化將給中國新醫(yī)療服務(wù)體制下的醫(yī)院酶免實(shí)驗(yàn)室?guī)硇碌膬?yōu)勢(shì)與利益。盡管只有少數(shù)全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)在硬件和軟件上,符合GMP/GLP規(guī)范,具備全過程控制(TPC)系統(tǒng),可以全自動(dòng)生成操作日志記錄(Traceability)和系統(tǒng)追溯記錄(Trackability),這些性能不但有助于建立信息化的質(zhì)量控制(QC)和質(zhì)量保障(QA)體系,而且在醫(yī)療糾紛舉證中,這些記錄證據(jù)可以闡明實(shí)驗(yàn)操作正確性和可靠性,以及試劑廠商是否應(yīng)承擔(dān)試劑質(zhì)量責(zé)任,便于糾紛的處理。2fame全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)FAME全自動(dòng)酶免分析儀是唯一獲FDA批準(zhǔn)使用的、符合醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室要求的酶免儀,集自動(dòng)加試劑、孵育、洗板、酶標(biāo)讀板于一身,全程采用電腦控制,實(shí)現(xiàn)了操作過程的自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化,克服了手工操作的局限性和繁瑣性,從而節(jié)省了人力和時(shí)間,將工作效率大大地提高。同時(shí),也避免了某些人為因素所造成的偶然誤差,使試驗(yàn)的精密度、重復(fù)性、靈敏度及特異性均有所提高。FAME采用完全模塊化設(shè)計(jì),并行工作模式,同時(shí),FAME根據(jù)其大小有不同的型號(hào),不同的型號(hào)有不同的試劑位、孵育位及洗板模塊,符合FDA體外診斷設(shè)備GMP規(guī)范及歐盟IVD指令,是高通量酶免自動(dòng)化的標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)裝備。本站目前使用的第3代全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)是哈美頓公司的FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)。FAME系統(tǒng)獨(dú)特品質(zhì)表現(xiàn)在:硬件上采用了綜合模塊化設(shè)計(jì),廣泛采用液體水平檢測(cè)(LLD)技術(shù)、體積與重量傳感、光學(xué)位置傳感等,實(shí)現(xiàn)真正全過程控制(TPC),特別是專利的洗板液體傳感器,確保了最佳洗板效果,是保障試驗(yàn)特異性的關(guān)鍵。在軟件與功能上,目前仍是唯一的全自動(dòng)GMP/GLP規(guī)范符合系統(tǒng),如全面的系統(tǒng)跟蹤記錄(Traceability)與系統(tǒng)追溯(Trackability),標(biāo)本/試劑加樣校驗(yàn)(Sampleverification)及“自由任務(wù)管理”可實(shí)現(xiàn)隨時(shí)增加檢測(cè)板。1997年FAME系統(tǒng)獲得美國FDA許可,用于血站篩查實(shí)驗(yàn)室,至今仍是唯一的特許全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)。酶免試驗(yàn)全過程自動(dòng)化的意義,并非僅限于降低勞動(dòng)強(qiáng)度、減少人為誤差。根據(jù)已發(fā)表的FAME評(píng)價(jià)研究報(bào)告,人們發(fā)現(xiàn):全自動(dòng)酶標(biāo)分析系統(tǒng)可以普遍地、顯著地提高酶免試驗(yàn)的特異性,如FAME系統(tǒng)可以提高乙肝表抗的特異性(由常規(guī)設(shè)備的87%到91%),丙肝抗體由常規(guī)設(shè)備的89.1%提高到97.4%。此外,多中心評(píng)價(jià)(Multi-centerClinicalTrail)實(shí)驗(yàn)證明,FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)也可以顯著提高國產(chǎn)試劑的靈敏度,如FAME系統(tǒng)可以將乙肝表抗的靈敏度由常規(guī)設(shè)備的92%提高到93%,丙肝抗體的靈敏度由常規(guī)設(shè)備的93.7%提高到98.7%。眾所周知,酶免試驗(yàn)過程具有反應(yīng)時(shí)間長、要求嚴(yán)格、步驟多而復(fù)雜的特點(diǎn)。因此,就一項(xiàng)具體的酶免試驗(yàn)而言,其試驗(yàn)過程與完成試驗(yàn)時(shí)間是不可改變和縮短的。但對(duì)于多項(xiàng)的批量處理(Massprocessing),總體試驗(yàn)時(shí)間將大大縮短。1996年中國血站系統(tǒng)開始使用FAME設(shè)備,至今狀態(tài)如新,性能可靠,已成為酶免實(shí)驗(yàn)室的主導(dǎo)設(shè)備。3影響fame測(cè)試效果的一般問題和分析3.1選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。3.2加樣過多造成加樣回箱擴(kuò)增慢(1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;(2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));(3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。3.3洗板的質(zhì)量控制(1)洗板機(jī)針頭堵塞,吸不干凈,導(dǎo)致洗板不好而致花板;(2)準(zhǔn)確配置洗液濃度,使用專項(xiàng)廠家的試驗(yàn)用洗液,不要混用;(3)反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。3.4服裝原因(1)顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;(2)加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。3.5停止原因加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。4fame的實(shí)驗(yàn)設(shè)備有利于提高檢測(cè)的精密度、重復(fù)性及靈敏度由于常規(guī)操作手法受主觀因素的影響,如孵育時(shí)間、洗板次數(shù)、酶分配量等,這種操作的不均一性,可造成試驗(yàn)結(jié)果的變異過大,假陽性或假陰性結(jié)果增高。為減少非特異性反應(yīng),必須給予相對(duì)較強(qiáng)的洗板條件,但洗板條件的增強(qiáng),使試驗(yàn)體系中的弱陽性標(biāo)本的反應(yīng)程度相應(yīng)降低,可能造成部分弱陽性標(biāo)本的漏檢。因此,常規(guī)操作程序由于人為因素的影響,限制了檢驗(yàn)水平的發(fā)揮。FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)克服了手工操作的局限性,避免了人為因素帶來的偶然誤差,使試驗(yàn)的精密度、重復(fù)性、靈敏度、特異性均有所提高。但在臨床檢驗(yàn)工作中,各實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況不盡相同,若對(duì)各實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,排除潛在的影響因素,可以最大限度地降低檢測(cè)的系統(tǒng)誤差。酶標(biāo)板在FAME中的處理過程按試劑盒說明書由微機(jī)編程,使酶聯(lián)免疫的各個(gè)步驟都在嚴(yán)格控制下進(jìn)行,每一塊酶標(biāo)板的實(shí)驗(yàn)條件幾乎一致,確保了操作的穩(wěn)定性,避免了手工法的人為誤差,提高了檢測(cè)的精確性和重復(fù)性,并可準(zhǔn)確反映出試劑盒所固有的靈敏度和特異性,既有利于弱陽性標(biāo)本的檢出,又可減少非特異性反應(yīng),降低了由輸血傳播疾病的危險(xiǎn),增加了輸血的安全系數(shù)。鑒于以上所述,FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)目前依然是全國血站系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的主導(dǎo)設(shè)備,對(duì)于ELASA常規(guī)項(xiàng)目的檢測(cè)具有重要意義。FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)全部