組織脂質(zhì)過氧化物A性TBARS光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）主要用途組織脂質(zhì)氧化物（MD）活性TS光通過TBS（反，即采用光度法測定組織樣品中總丙二醛含量，來評(píng)價(jià)組織樣品脂質(zhì)過氧化程度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物組織（人體、動(dòng)物、昆蟲等）中脂質(zhì)過氧化程，。景＋（dproxiatin；LPO）是動(dòng)物和植物細(xì)胞損傷的一種機(jī)制，也是評(píng)價(jià)細(xì)胞和組織氧化應(yīng)急的標(biāo)志。含有兩個(gè)或以上雙鍵（doublebond）的多聚不飽和脂肪酸（PolyunsaturatedFattyd）對(duì)自由及活族敏導(dǎo)生氧基O（dperoxyll使脂類氧（lipidoxidation。脂質(zhì)過氧化自由基LOO＋同時(shí)通過攻擊分子內(nèi)雙鍵，經(jīng)環(huán)化、裂解形成環(huán)狀內(nèi)過氧化物（cyclicendoperoxide，例如丙二醛（malondialdehyd；MDA。作為脂質(zhì)過氧化性低分子量終端產(chǎn)物之一的丙二醛，廣泛用于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的指標(biāo)。在丁羥甲苯（ButylatedHydroxytoluene；BHT）和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類氧化的情況下，丙二醛與硫代巴比妥酸（thiobarbituricd醛雙（MDA－TB2，通過分光光度儀532n波長）來定量分析丙二醛的含量，來評(píng)價(jià)樣品脂質(zhì)過氧化程度。其反應(yīng)方式為：＋malondialdehyde + 2thiobarbituricaid → MD－TB2產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液t） 0升（ReagentB）5毫升（ReagentC）1毫升萃取液（RegentD）.5毫升反液（ReagentE）5管補(bǔ)充液（RegentF）5毫升稀釋液（Regent）3毫升產(chǎn)品說書 1份保存方式保存在4℃冰箱，（tC和（tE；（tD證6月備115毫升錐形離心：用于制樣品的容器1.5毫升離心管用于樣操作的器超聲儀：于裂解織（微型）式離心：用于品操作恒溫水槽用于反孵育96孔板：用于光度的容器酶標(biāo)儀：用于樣品光度分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前將試劑盒中的E）置槽取50微升G到反E里渦混記為反應(yīng)工作（0為25℃：長532n。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備1．手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定500毫克組織重量2．（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升形心管3．（擇）入3毫升）4．去A）5．管6．夜7．：凍）8．個(gè)15毫升錐形離心管9．加入置于冰槽里的500微升B）10．強(qiáng)渦蕩5秒，充勻11．在冰里于200瓦超聲下功率50％，猝擊5秒12．轉(zhuǎn)到的1.5毫離管13．強(qiáng)渦蕩15秒14進(jìn)℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心0為g或6M如5）15．取50微升上清液新的冷的1.5毫升心管－16．（選步）取10微升進(jìn)行蛋白定量測定，并調(diào)整蛋白濃度為20至50毫克/注：使蛋白質(zhì)度定試劑盒GS000.1）－17．即－7℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作二、光度測定1．準(zhǔn)備10個(gè)1.5毫升心，做應(yīng)記背對(duì)和品2．分移取280微升A）3．入20微升C）4．分加入100微升F）或待測樣品（注意：總量為1至2）5．勻6．入50微升（D）27．用槍頭混勻8．分別加入50微升反應(yīng)工作液9．蓋上蓋子，上下傾倒數(shù)次，混勻10進(jìn)60℃恒溫水槽，孵育0鐘11．放進(jìn)槽卻2分鐘12進(jìn)4心5為10000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）13．取20微升到96孔板的相應(yīng)孔里（注意上清須澄）14．放進(jìn)標(biāo)測15．樣品際（樣品讀數(shù)－背景對(duì)照讀數(shù)）三、計(jì)算樣品總濃度[樣品實(shí)際讀數(shù)X樣稀數(shù)X0.25（體系容量；毫升][0.0（樣品容量；毫升X156（毫摩爾吸光系數(shù)X0.6（光徑距；米）]＝微摩爾/毫升（品蛋濃）毫克/毫升微摩爾/毫克注意事項(xiàng)1．本產(chǎn)為50次6孔作2．操套3．用織（30秒）處代超聲理4．）具有蝕，操安全5．E）為固體避室下置配，效期1周6．（C）和E）避免照并封7．本品測感可達(dá)0.5微摩二醛8．50微摩爾的過氧化氫會(huì)干擾檢測（使丙二醛減少13％；而糖和果則不響檢測9．如果樣含有高的蛋成分建議進(jìn)樣品蛋白處理10．可使沸10分代應(yīng)0鐘11．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)