核酸類制品的分離純化方法核酸（nucleicacid）分為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。DNA主要存在細胞核的染色體中，RNA主要存在于細胞質(zhì)中。RNA按結(jié)構(gòu)和功能又分為核糖體RNA、信使RNA、轉(zhuǎn)運RNA。

磷酸D-2-脫氧核糖核酸核苷酸戊糖

核苷D-核糖堿基嘌呤

嘧啶核酸：核酸及其衍生物類藥物屬于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的一類天然大分子生物制品常采用生物材料為原料，再經(jīng)預(yù)處理、提取和純化等工藝制造而成；而對于部分衍生物，他們屬于小分子，并且結(jié)構(gòu)簡單的化合物，可采用化學(xué)合成的方法；對于某種單核苷酸，目前最常用的方法是通過微生物發(fā)酵法來生產(chǎn)。核酸類藥物可分為兩類：一類是具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類藥物，這類藥物有助于改善機體的物質(zhì)代謝和能量平衡，修復(fù)受損的組織，所以廣泛用于放射病、血小板減少癥、白細胞減少癥、急慢性肝炎和肌肉萎縮等疾病。另一類核酸藥物為天然核酸的類似物或衍生物，這類藥物具有干擾腫瘤、干擾病毒代謝的功能。因此在治療艾滋病和腫瘤方面有一定的療效。提取核酸的一般原則：先用各種方法破碎細胞、提取核蛋白，使其與其他細胞成分分離；然后除蛋白（苯酚、去垢劑—十二烷基磺酸鈉或蛋白酶），重復(fù)幾次后獲得的核酸溶液，再用乙醇等使其沉淀。制備具有生物活性的大分子核酸的要求：必須采取溫和的制備條件，避免過酸、過堿的反應(yīng)環(huán)境和劇烈的攪拌，以及防止核酸酶的作用，并要求在低溫下進行操作。分離：苯酚法氯仿-異戊醇法SDS法將蛋白質(zhì)變性，使核酸與蛋白質(zhì)分開苯酚法：優(yōu)點：操作條件比較溫和、能迅速使蛋白質(zhì)變性并同時抑制核酸酶的活性、可得到具有生物活性的高聚合度的核酸缺點：操作步驟較為繁瑣，去除蛋白質(zhì)需要反復(fù)進行多次，費時，而且得到的核酸仍有部分降解。苯酚法提取酵母RNA1、取1g活性干酵母在研缽中研碎，加10mLSDS-緩沖液使成勻漿，洗入各Eppendorf管（略少于管容積的一半），加溶菌酶0.1mL，混勻，室溫靜置10min,再加等體積飽和酚液，室溫下劇烈振蕩5min。2、置冰浴中分層，在0~4℃低溫環(huán)境下，10000r/min離心10min.吸出上層清液，轉(zhuǎn)入新的Eppendorf管，加等體積氯仿-異戊醇，室溫下劇烈振蕩2.5min，然后10000r/min離心5min。3、吸出上層清液，轉(zhuǎn)入另一新Eppendorf管，加2倍體積95%乙醇（含2%乙酸鉀），在冰浴中放置30min，使RNA沉淀。4、再以10000r/min離心5min，棄上清液，沉淀用少許無水乙醇和乙醚各洗一次，即加乙醇或乙醚，迅速離心各1min，保留沉淀。5、傾去乙醚后，減壓真空干燥，準(zhǔn)確稱重，記錄。6、RNA制品純度的測定及RNA提取率的計算與濃鹽法相同。1.鹽析法及沉淀法2.離心法3.膜分離法純化：把這兩種方法結(jié)合起來使用，一般是在起始的分離中。優(yōu)點：設(shè)備簡單、應(yīng)用范圍廣、沉淀易過濾。例：在RNA制備中，一般是先搗碎組織，然后制成勻漿，待用氯化鈉溶液提取出核糖核蛋白后，再調(diào)節(jié)到Ph4.5以沉淀各種核蛋白，而后用乙醇沉淀法、鹽酸胍和去污劑提取法、酚抽提法分離蛋白質(zhì)和RNA。鹽析法及沉淀法：廣泛應(yīng)用于核酸類生物制品的分離方法。例：在胞二磷膽堿的提取中，需要離心出去菌體，而在生產(chǎn)轉(zhuǎn)移因子時，以離心法除去細胞碎片。分離法：此法包括透析、微孔過濾和超濾等。膜的孔徑有很多種，一般在0.0001~1