大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的研究進(jìn)展

大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是一種14、15和16環(huán)內(nèi)酯類抗生素。它主要用于特定的革蘭氏陽性細(xì)菌、革蘭氏陰性細(xì)菌、厭氧菌、軍團(tuán)菌、支氣管炎和抗生素。20世紀(jì)50年代初發(fā)現(xiàn)了紅霉素A(erythromycinA),后來發(fā)現(xiàn)紅霉素及其衍生物不僅對某些日益流行的致病原(如支原體、衣原體、軍團(tuán)菌、彎曲桿菌)有效,而且對一些棘手的新致病原(如弓形體、分枝桿菌、包柔螺旋體)也有活性。后來針對紅霉素A酸性失活的化學(xué)修飾,產(chǎn)生了第二代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,如羅紅霉素(roxithromycin)、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地紅霉素(dirithromycin)和氟紅霉素(flurithromycin)。第二代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的抗菌譜有所擴(kuò)大,抗菌活性增強(qiáng),而且口服吸收好、體內(nèi)分布廣、組織濃度高、半衰期長、不良反應(yīng)少,因而獲得了廣泛的臨床應(yīng)用。近10年獲得了第三代對耐藥菌有效的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,如:酮內(nèi)酯類的泰利霉素(telithromycin)。第三代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對大環(huán)內(nèi)酯敏感菌、耐藥呼吸道病原體(如肺炎鏈球菌,金葡菌,流感桿菌,釀膿鏈球菌,肺炎支原體等)均有很好的活性,已成為當(dāng)前抗生素新藥研發(fā)的重點。近年來在獸藥中也開發(fā)出獸醫(yī)專用品種如泰樂菌素、替米考星、愛樂新及獸醫(yī)專用劑型,如水溶性粉劑等,大大拓展了傳統(tǒng)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物在獸醫(yī)臨床的應(yīng)用范圍,提高了其在抗感染治療中的地位。1抑制離子型肉毒活性和轉(zhuǎn)位大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物為一類蛋白質(zhì)合成抑制劑,通過選擇性的與病原菌70s核糖體的80s亞基結(jié)合,抑制核糖體中肽鏈轉(zhuǎn)移酶的活性和轉(zhuǎn)位,通過阻斷轉(zhuǎn)肽作用和mRNA位移,使病原微生物的蛋白質(zhì)合成受阻,達(dá)到抗菌作用。大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物為生長期抑菌劑,僅對增殖期的細(xì)菌有抑制作用,而對靜止期的細(xì)菌無效,但在極高濃度(為常規(guī)劑量的10～20倍)時,亦可顯示出殺菌作用。2不同途徑和不同體系的激素對糖液的抗菌作用自20世紀(jì)50年代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素———紅霉素開始在臨床上使用以來,紅霉素病原菌耐藥性問題就不斷地出現(xiàn)。由于耐藥性病原菌數(shù)量不斷增加,紅霉素在臨床上的使用也大大受到影響。細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的分子機(jī)理很多,但總的來說主要是通過3個途徑影響紅霉素與核糖體的結(jié)合而抵制其抗菌作用:(1)影響紅霉素在胞內(nèi)的積累(大環(huán)內(nèi)酯的外排機(jī)制);(2)破壞紅霉素的結(jié)構(gòu)使其失去抗菌作用;(3)改變或修飾紅霉素在核糖體上的結(jié)合作用位點。隨著大環(huán)內(nèi)酯類抗生素臨床研究的不斷深入和擴(kuò)展,使以紅霉素為代表的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素越來越受到重視,尤其是新近出現(xiàn)的酮內(nèi)酯,很大程度上拓寬了該類抗生素的抗菌譜,提高了抗菌活性,降低了耐藥性,增強(qiáng)了療效。但是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的發(fā)展仍面臨許多難題,如今尚無一個大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能夠很好地抑制臨床分離的耐金色葡萄球菌、化膿鏈球菌,而且細(xì)菌的耐藥性將由大環(huán)內(nèi)酯向酮內(nèi)酯滲透,多重耐藥問題仍然難以避免。因此加大研發(fā)力度,尋找新的高活性實體,是一項長期的任務(wù),任重而道遠(yuǎn)。3其他大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留檢測大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是利用放線桿菌或小單孢菌生產(chǎn)的具有大環(huán)狀內(nèi)酯環(huán)的抗生素的總稱,其共有的特征是抗革蘭氏陽性菌活性、抗支原體活性和低毒性,廣泛用于畜禽細(xì)菌性和支原體感染的化學(xué)治療,且還是重要的生長促進(jìn)劑,然而過量或不當(dāng)使用會造成獸藥殘留。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及其代謝產(chǎn)物在動物的組織及器官內(nèi)蓄積達(dá)到一定濃度可造成動物前庭和耳蝸神經(jīng)的損害,導(dǎo)致眩暈和聽力減退,嚴(yán)重者造成肝腎的損害。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素通過食物鏈進(jìn)入人體,將對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此,大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在動物性食品中的殘留監(jiān)測和控制已受到許多國家包括我國政府的高度重視,并紛紛采取各種措施進(jìn)行殘留控制和檢測。歐盟和我國對林可酰胺類及大環(huán)內(nèi)酯類藥物的最大殘留限量規(guī)定為40～1500μg/kg。我國農(nóng)業(yè)部于1999年頒布標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定泰樂霉素的最大殘留限量:動物肌肉和內(nèi)臟11mg/kg,奶為105mg/kg。有關(guān)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的分析方法主要有薄層色譜法(TLC)、氣質(zhì)聯(lián)用法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)等,其中HPLC(包括LC-MS)是應(yīng)用最廣泛且最實用高效的分析方法等。國內(nèi)外對大環(huán)內(nèi)酯藥物殘留建立的檢測方法主要是針對牛、豬和家禽的肌肉、腎臟、肝臟,牛奶、蛋、蜂蜜等動物產(chǎn)品,對替米考星、泰樂霉素、螺旋霉素、交沙霉素、紅霉素、竹桃霉素,羅紅霉素、伊維菌素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物進(jìn)行多殘留檢測[11,12,13,14,15,16]。法國CNEVA中心的Delepine等采用離子束液相色譜質(zhì)譜法(PB-LC-MS)方法檢測牛肌肉中的5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的方法,對每種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素檢測限為50μg/kg。獸醫(yī)藥物殘留歐盟參考實驗室Juhel等建立了高效液相色譜同時檢測豬、牛和家禽的肌肉中替米考星、泰樂霉素、螺旋霉素和他們的主要代謝產(chǎn)物的方法,對替米考星和泰樂霉素的檢測限為15μg/kg,對螺旋霉素的檢測限為30μg/kg,對新螺旋菌素(neospiramycin)的檢測限為25μg/kg。Leal等利用液相色譜分離動物性食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,該法適合于同時檢測5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留的檢測。Dubois等建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測各種組織(肌肉、腎臟和肝臟)和蛋中5種大環(huán)內(nèi)酯內(nèi)藥物(泰樂霉素、替米考星、螺旋霉素、交沙霉素和紅霉素)方法,該方法具有足夠特異性、定量性和可重復(fù)性(精確性,80%～110%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差,2%～13%)。Horie等采用乙腈提取牛肌肉中14種β-內(nèi)酰胺和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,對牛肌肉在0.1mg/kg添加水平的回收率為63%,定量檢測限為0.04mg/kg。Garcia等建立了快速、簡單和靈敏的液相色譜UV二極管檢測同時測定羊奶中7種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(紅霉素、竹桃霉素、羅紅霉素、交沙霉素、螺旋霉素、泰樂霉素和伊維菌素)殘留,該法成功應(yīng)用于牛奶中多藥物殘留(法定最高濃度水平以下)的檢測。Benetti等建立了液相色譜同時檢測蜂蜜中林肯霉素和5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留技術(shù)。國內(nèi)有蜂蜜、水產(chǎn)品、豬、牛等動物性食品大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留的檢測方法和檢測標(biāo)準(zhǔn)。鈕偉民等對動物性食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的殘留的高效液相色譜分離檢測方法及其進(jìn)展給予了綜合評述。王敏等采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測動物性食品中泰樂霉素、交沙霉素、柱晶白霉素、螺旋霉素、替米考星和紅霉素6種大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留,該方法靈敏、檢出限低、實用性強(qiáng)。岳振峰等建立了動物組織樣品中潔霉素、氯潔霉素、紅霉素、螺旋霉素、交沙霉素、泰樂菌素、竹桃霉素等7種酰胺類及大環(huán)內(nèi)酯類藥物多殘留的液/質(zhì)聯(lián)用確證方法,該方法簡便、快速、準(zhǔn)確,各項技術(shù)指標(biāo)滿足國內(nèi)外法規(guī)的要求,可用于動物組織樣品中林可酰胺類及大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留的確證檢測。謝麗琪等建立了牛奶樣品中潔霉素、氯潔霉素、紅霉素、螺旋霉素、交沙霉素、泰樂菌素、竹桃霉素等7種林可酰胺類及大環(huán)內(nèi)酯類藥物殘留量的確證方法,該方法各項技術(shù)指標(biāo)滿足國內(nèi)外法規(guī)的要求,可用于牛奶樣品中林可酰胺類及大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留量的確證檢測。徐錦忠等建立了水產(chǎn)品中大環(huán)內(nèi)酯和林可胺類的液相色譜在線凈化-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法,該法簡單、靈敏、特異性強(qiáng),適用于各種水產(chǎn)品中大環(huán)內(nèi)酯類殘留的分析確證。我國也頒布了適用于肉類、水產(chǎn)品、動物內(nèi)臟、雞蛋和牛奶中大環(huán)內(nèi)酯類獸藥篩選檢測,陽性結(jié)果應(yīng)用其他方法進(jìn)行確證的動物源食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留檢測方法和適用于肉內(nèi)組織、內(nèi)臟和水產(chǎn)品中動物源食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留檢測方法的商檢標(biāo)準(zhǔn)以及適用于蜂王漿中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰樂菌素、紅霉素、羅紅霉素、交沙霉素進(jìn)出口蜂王漿中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留量的檢測方法。3抗菌藥物的殘留對人類健康的影響大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物是一類毒副作用小、使用方便、價格便宜的在獸醫(yī)臨床中對支原體感染防治上具有極為重要的一類必不可少的藥物。由于在飼料中長期大量使用抗菌藥物,或其添加量超過亞劑量水平,造成動物