第六章

紫外-可見分光光度法6.4.1普通分光光度法6.4.2示差分光光度法6.4.3雙波長分光光度法6.4.4導數(shù)分光光度法第四節(jié)

分光光度

定量測定方法6.4.1

普通分光光度法1.單組分的測定

通常采用A–c

標準曲線法定量測定。2.多組分的同時測定

⑴若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長處分別進行測定。這本質上與單組分測定沒有區(qū)別。

⑵若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出各組分的含量。Aλ1=κaλ1bca＋κbλ1bcb

Aλ2=κaλ2bca＋κbλ2bcb

6.4.2

示差分光光度法

普通分光光度法一般只適于測定微量組分，當待測組分含量較高時，將產(chǎn)生較大的誤差，需采用示差法，即提高入射光強度，并采用濃度稍低于待測溶液濃度的標準溶液作參比溶液。為什么呢？設：待測溶液濃度為cx，標準溶液濃度為cs(cs<cx)。則

Ax=κb

cx

As=κb

csΔＡ＝Ａx－Ａs=κb(cx－cs）=κbΔc

測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差ΔＡ。

示差分光光度法（示差法）

ΔA＝Ax－As=κb(cx－cs）=κbΔc

測得的吸光度相當于普通法中待測溶液與標準溶液的吸光度之差ΔA

。示差法測得的吸光度與Δc呈直線關系。由標準曲線上查得相應的Δc值，則待測溶液濃度cx

cx=cs+Δc

示差法是如何提高測量準確性的呢？示差法標尺擴展原理：普通法：cs的T=10%；cx的T=5%

示差法：cs

做參比，調(diào)T=100%

則：cx的T=50%

；標尺擴展10倍6.4.3

雙波長分光光度法

不需空白溶液作參比；但需要兩個單色器獲得兩束單色光(λ1和λ2)；以參比波長λ1處的吸光度Aλ1作為參比，消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復雜試樣時顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測量精密度等方面都比單波長法有所提高。

ΔA

＝Aλ2－Aλ1＝(κλ2－κλ1)bc

兩波長處測得的吸光度差值ΔA與待測組分濃度成正比。κλ1和κλ2分別表示待測組分在λ1和λ2處的摩爾吸收系數(shù)。關鍵問題:測量波長λ2和參比波長λ1的選擇與組合以兩組分x和y的雙波長法測定為例：設：x為待測組分，y為干擾組分，二者的吸光度差分別為

ΔAx和ΔAy，則該體系的總吸光度差ΔAx+y為

ΔAx+y=ΔAx+ΔA

y

如何才能使ΔA

y=0？以消除干擾？如何選擇波長λ1、λ2有一定的要求。選擇波長組合λ1、λ2的基本要求

⑴選定的波長λ1和λ2處干擾組分應具有相同吸光度，即

可采用作圖法選擇符合上述兩個條件的波長組合。

⑵在選定的兩個波長λ1和λ2處待測組分的吸光度應具有足夠大的差值。故此時，測得的吸光度差ΔA只與待測組分x的濃度呈線性關系，而與干擾組分y無關。若x為干擾組分，則也可用同樣的方法測定y組分。6.4.4

導數(shù)分光光度法

導數(shù)分光光度法在多組分同時測定、渾濁樣品分析、消除背景干擾、加強光譜的精細結構以及復雜光譜的辨析等方面，顯示了很大的優(yōu)越性。

利用吸光度(或透光度)對波長的導數(shù)曲線來進行分析：

Ｉ＝Ｉ0e-κbc假定入射光強度Ｉ0在整個波長范圍內(nèi)保持恒定：

dI

0/dλ＝0則

dI/dλ＝-Ｉ0

bc

dκ/dλ導數(shù)分光光度法dI/dλ＝－Ｉ0

bc

dκ/dλ

基本吸收曲線及1階到4階導數(shù)曲線示意圖

（a）基本吸收曲線及1階到4階導數(shù)（b）兩個不等高曲線疊加（c）疊加的基本吸收曲線及1階到4階導數(shù)一階導數(shù)信號與試樣濃度呈線性關系；基本曲線的拐點在奇階導數(shù)中產(chǎn)生極值而在偶階導數(shù)中通過零點?；厩€隨著導數(shù)階數(shù)的增加，由微分產(chǎn)生的譜峰數(shù)目增加（n階微分產(chǎn)生n+1個峰，即出現(xiàn)精細結構）而寬度變小（信號變尖銳，使分