生物技術(shù)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及檢測(cè)第一頁(yè)，共40頁(yè)。SelectedBlockbusterProteinPharmaceuticals第二頁(yè)，共40頁(yè)。生物技術(shù)藥物重組蛋白多肽類(lèi)單克隆抗體及其片斷寡核苷酸疫苗制劑基因治療藥物（核酸制劑）干細(xì)胞藥物？第三頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物藥代動(dòng)力學(xué)吸收分布代謝與排泄第四頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物吸收小分子多肽：被動(dòng)吸收大分子多肽：水溶性：細(xì)胞間隙脂溶性：膜脂擴(kuò)散胞飲淋巴系統(tǒng)吸收：po干擾素；高度脂溶性？影響蛋白肽類(lèi)藥物吸收因素藥物穩(wěn)定性；細(xì)胞滲透性：MW1000，鼻粘膜》腸粘膜第五頁(yè)，共40頁(yè)。CorrelationbetweenMWandthecumulativerecoveryofscrINFalpha-2a,cytochromec,inulinand5-fluoro-2-deoxyuridine(FUDR)intheefferentlymphinsheep第六頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物吸收非腸道給藥(ParenteralRoute)：IV>M＝SC＝IP>鼻腔>肺>直腸>回腸>陰道>頰>口服鼻腔給藥(Intranasaladministration);Inhaleadministration;口服給藥(Oraladministration)Peroraladministration經(jīng)皮給藥(Transdermaladministration);其他給藥途徑:結(jié)腸、回腸、子宮、陰道、頰、眼睛等。第七頁(yè)，共40頁(yè)。IM和SC給藥生物利用度IMAdministrationDrugBioavailability(%)Alefacept63Interferonalpha-2a>80Triptorelin83SCAdministrationDrugBioavailability(%)Anakinra95Cetrorelix85Darbepoetin37Follitropin66Ganirelix91Interferonbeta-1b50Teriparatide95第八頁(yè)，共40頁(yè)。PharmacokineticsofIMADI-SSPEG20,000mwinhumanswithhepatocellularcarcinoma第九頁(yè)，共40頁(yè)。Intranasaladministration易給藥；鼻粘膜上皮細(xì)胞有大量的微絨毛和廣泛分布的血管淋巴管；無(wú)肝首過(guò)效應(yīng)；偽首過(guò)效應(yīng)(Pseudo－first－passeffect)；多肽、蛋白酶（主要是氨肽酶）；calcitonin,oxytoxin,LH-RH,growthhormone,interferone,vaccines；分子量upto2KDa:pharmacologicallyacitive；血腦屏障：IGF-1。第十頁(yè)，共40頁(yè)。InhalationadministrationEaseofadministrationlargesurfacearea(75m2)HighvascularityBypassoffirst-passmetabolismInsulinforTypeIIdiabetesDornase-alphaforcycticfibrosisProteasesinthelungLocaleffectsEffectofmolecularweight?第十一頁(yè)，共40頁(yè)。PlasmabioavailabilityoftherapeuticpeptidesversusMWafterpulmonaryadministration第十二頁(yè)，共40頁(yè)。OraladministrationGenerallynottherapeuticallyactive;Factorsforlackofsystemicbioavailability:highgastrointestinalenzymeactivitygastrointestinalmucosaasanabsorptionbarrier;cytochromeP4503Aandp-glycoproteinactivityAvailableoralforms:cyclosporine(30%)anddesmopressin(0.16%);Absorptionenhancers;encapsulationinmicroparticlesornanoparticles.第十三頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物的分布分布容積?。?.04-0.2L/kgvs.1-20L/kg(小分子);分子量大;水溶性大;蛋白結(jié)合率高？中央室（Vc):3-8L=plasmavolume和平衡室(Vss):14-20L<2x中央室;蛋白結(jié)合:reduceclearance;Site-specificandtarget-orientedreceptormediateduptake第十四頁(yè)，共40頁(yè)。第十五頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物分布：血腦屏障血腦屏障：缺乏特異轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)；存在蛋白分解酶；外排作用泵提高血腦屏障對(duì)蛋白多肽類(lèi)藥物攝取的方法：脂質(zhì)體鼻腔給藥；脊髓管灌注或泵連續(xù)輸注。第十六頁(yè)，共40頁(yè)。ZiconotidecerebrospinalCSFconcentrationasafunctionoftime第十七頁(yè)，共40頁(yè)。CSFZiconotidePharmacokineticResultsbyDoseGroup第十八頁(yè)，共40頁(yè)。小分子藥物代謝Drugbiotransformationisdividedintotwotypesofreactions:phaseI(hydrolysis,oxidation,andreduction)phaseIIreactions:conjugation((uridinediphosphoglucuronosyltransferase(UGT),N-acetyltransferase(NAT),glutathioneS-transferase(GST),andsulfotransferase(ST)).第十九頁(yè)，共40頁(yè)。小分子藥物代謝第二十頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物代謝與排泄（消除：elimination)蛋白水解酶（溶酶體、蛋白酶、組織蛋白酶、氨肽酶、二肽酶）:throughoutbodyProteosesPeptisases受體介導(dǎo)清除(receptor-mediatedendocytosis):t-PA－liver－lowdensitylipoproteinreceptor-mannose-asialogglycoproteinreceptor;insulin蛋白水解酶穩(wěn)定：環(huán)孢菌素－P450?第二十一頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物代謝與排泄腎臟腎小球：<30Kd,eg.,IFN,IL-2,腎小管近曲小管(proximaltubule)endocyticvesiclehydrolysisintopeptidefragments:IL-2,IL-11,growthhormone,insulinLuminalmembranes:hydrolysis:smalllinearpeptides:ANGI,ANGII,bradykinin,glucagon,LH-RHEndocytosedanddegradedinlysozymes:largerandmorecomplexproteinspeptidesPeritubularcapillaries:growthhormone肝臟:insulin,glucagon,epidermalgrowthfactor,antibodies,andt-PA膽道:血液:endo-oligopeptidase?腸道第二十二頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物特點(diǎn)及其應(yīng)用明顯的種族特異性：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇；免疫原性：ELISA;反復(fù)給藥產(chǎn)生抗被測(cè)試藥物的抗體；體內(nèi)有大量的蛋白肽類(lèi)物質(zhì)包括結(jié)合蛋白：生物樣品的前處理：LC-MS；被測(cè)試藥物尤其細(xì)胞因子給藥量極?。╪g-pg/ml):檢測(cè)靈敏度；存在被測(cè)試藥物的內(nèi)源性物質(zhì)：本底效應(yīng)；同位素法;suppressionviaphysiologicalregulationorfeedback,eg,infusingglucosetosuppressendogenousinsulin生物活性不僅取決于藥物的一級(jí)結(jié)構(gòu),而且與其二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)：生物檢定法；生物PD-PK模型第二十三頁(yè)，共40頁(yè)。蛋白肽類(lèi)藥物樣品檢測(cè)方法免疫測(cè)定法(Immunoassays)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-linkedimmunosobantassay,ELISA);放射免疫測(cè)定法(Radioimmunoassay,RIA);免疫放射定量法(IRMA);同位素標(biāo)記示蹤法(Isotopelabeltraceassay)生物檢定法(Bioassays);高效液相（HPLC）、液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法:comparablesensitivityhigherselectivity;eg,plasmabradykininpeptideantagonist;毛細(xì)血管電泳(CE)、高效毛細(xì)血管電泳(HPCE)和毛細(xì)血管電泳色普(CEC)；RealtimePCR、proteinchips第二十四頁(yè)，共40頁(yè)。ELISA法一抗（種族特異性）抗原（待測(cè)藥物）二抗（酶偶聯(lián)）顯色酶底物酶標(biāo)儀第二十五頁(yè)，共40頁(yè)。ELISA法優(yōu)點(diǎn)高度的靈敏度:ng－pg/ml;較高的特異性;易于操作、快速、不使用同位素、無(wú)輻射源,適用于批處理;試劑使用壽命長(zhǎng)；目前最常用的檢測(cè)方法。缺點(diǎn)待測(cè)蛋白多肽的免疫活性而非生物活性;不能區(qū)別具有抗原決定族的代謝物片斷；不能同時(shí)測(cè)定代謝物片斷;不同來(lái)源抗體結(jié)合性不一；受一些因素的干擾第二十六頁(yè)，共40頁(yè)。ELISA法的干擾因素具有抗原決定族的代謝物片斷；被測(cè)試藥物的內(nèi)源性物質(zhì)；基質(zhì)效應(yīng);被測(cè)試藥物的可溶性受體結(jié)合蛋白;低親活力結(jié)合蛋白高親活力結(jié)合蛋白反復(fù)給藥產(chǎn)生抗被測(cè)試藥物的抗體：中和性或非中和性長(zhǎng)期給藥；生物等量性實(shí)驗(yàn)第二十七頁(yè)，共40頁(yè)。ImmunogenicityofnativeADIandADI-SSPEGinmiceandrabbits

第二十八頁(yè)，共40頁(yè)。SC生長(zhǎng)激素（0.4IU/kg）后食蟹猴(n=7-8/組)的血清生長(zhǎng)激素濃度第二十九頁(yè)，共40頁(yè)。普通ELISA、高靈敏度ELISA（additional增色放大系統(tǒng)）和化學(xué)發(fā)光ELISA法(luminol/過(guò)氧化氫底物)靈敏度和線性范圍比較

(From湯仲明，2002）第三十頁(yè)，共40頁(yè)。放射免疫測(cè)定法和免疫放射定量法抗原，標(biāo)記抗原，抗體靈敏度高，尤其免疫放射定量法需同位素常用于激素濃度測(cè)定第三十一頁(yè)，共40頁(yè)。同位素標(biāo)記示蹤法在目標(biāo)蛋白多肽分子上標(biāo)記同位素,從而鑒別目標(biāo)蛋白多肽與內(nèi)源性蛋白多肽該法需將目標(biāo)蛋白多肽進(jìn)行同位素標(biāo)記,標(biāo)記方法有外標(biāo)法(化學(xué)聯(lián)接法)和內(nèi)標(biāo)法(摻入法)2種；外標(biāo)法：將標(biāo)記物如125I通過(guò)化學(xué)方法偶聯(lián)至完整蛋白中如蛋白中酪氨酸或賴氨酸等，常用的化學(xué)方法有氯胺T或Iodogen法內(nèi)標(biāo)法：可用即將標(biāo)記以3H,14C或35S等同位素的氨基酸加入生長(zhǎng)細(xì)胞或合成體系中,從而獲得含同位素的蛋白多肽分子,但因其操作復(fù)雜而少用；標(biāo)記后蛋白多肽表征：比放射性放射性純度標(biāo)記的蛋白多肽的生物活性。第三十二頁(yè)，共40頁(yè)。同位素標(biāo)記示蹤法優(yōu)點(diǎn)靈敏度高簡(jiǎn)便直觀檢測(cè)迅速尤其適用于蛋白肽類(lèi)藥物的組織分布缺點(diǎn)同位素標(biāo)記一般不能進(jìn)行人體藥物動(dòng)力學(xué)研究;可能引起藥物的生物活性及代謝行為發(fā)生變化；由于蛋白多肽進(jìn)入體內(nèi)會(huì)被降解代謝,或標(biāo)記氨基酸的生物再利用，或與其它蛋白質(zhì)結(jié)合,總的放射性不能代表藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程第三十三頁(yè)，共40頁(yè)。同位素標(biāo)記示蹤法與其他分析手段聯(lián)合應(yīng)用SDS三氯醋酸(TCA)沉淀法HPLC法第三十四頁(yè)，共40頁(yè)。生物檢定法利用被測(cè)蛋白多肽類(lèi)藥物某種特異生物反應(yīng),通過(guò)劑量(濃度)－效應(yīng)曲線對(duì)目標(biāo)蛋白多肽進(jìn)行定量測(cè)定的一種分析方法；分為離體分析法和在體分析法；離體分析法通常采用細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù),以細(xì)胞的增殖、分化或細(xì)胞毒性為基礎(chǔ),以細(xì)胞數(shù)目的增減