SZDB/ZSZDB/ZSZDB/Z238—2017短串聯(lián)重復序列基因分型法鑒定人源細胞系技術(shù)規(guī)范2017-04-01發(fā)布2017-05-01實施深圳市市場監(jiān)督管理局發(fā)布I Ⅲ 2 2 3 3 5 5 5 6 7 8 9在我國現(xiàn)行技術(shù)指導文件基礎(chǔ)上，我們參考美國國家標準與技術(shù)研究院（National1下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅GB/T27025-2008檢測和校準ANSI/ATCCASN-0002-2011AuthenticationofHumanCellLines:Standard短串聯(lián)重復序列ShortTande2指利用生物學檢測方法測定個體DNA序列，并將其與其他個體的DNA序列或參考DNATCC：美國模式培養(yǎng)物保藏所（AmericanTypeCDSMZ：德國微生物菌種保藏中心（DeutscheSammlungvonMikroorganismenund5.1.4細胞樣本包裝：使用1mL無鈣、鎂離子的PBS重懸細胞，保存于2mL細胞凍存管中，35.2.2DNA樣本包裝：基因組DNA應保存于含有DNA儲存液的1.5mL離心管中，采用石蠟封口擴增，也可采用經(jīng)過質(zhì)量檢驗合格的商業(yè)化STR細胞鑒定試劑盒，按照試劑盒說明書進行4b)PCR擴增過程設(shè)置陰性對照組、樣本檢測組和陽性對照組。陰性對照組采用無菌水c)準備標準上樣體系：將a)中的各組PCR擴增產(chǎn)物及DNA片段標準品分別加入b)的分裝混合將毛細管電泳基因分析儀檢測所得的STR遺傳圖譜數(shù)據(jù)與國際細胞系認證委員會推薦的ATCC（美國模式培養(yǎng)物保藏所：/STR_Database.aspx）的人源細胞系注：國際細胞系認證委員會推薦可參考的其他人源S本JCRB細胞庫：http://cellbank.nibiohn.go.jp/legacy/cgi-bin2/str2/str_searchf生物信息學研究所：http://web.expasy.ora)根據(jù)相對分子質(zhì)量內(nèi)標獲得PCR擴增產(chǎn)物大?。▔A基數(shù)計算出每個b)當STR位點的兩個等位基因含有相同的重復次數(shù)時，圖譜僅出現(xiàn)1個等位基因峰；不同的重復次數(shù)時，圖譜出現(xiàn)2個等位基因峰；此外，當陰性對照組無等位基因峰出現(xiàn)，陽時經(jīng)過重復檢測試驗排除PCR擴增體系或引物結(jié)合區(qū)點突變等的干擾因素，判定受檢細胞系a)在檢測有效的前提下，受檢細胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應的標準STR基因分型5數(shù)據(jù)進行比對，若兩者的匹配率不低于80b)在檢測有效的前提下，受檢細胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應的標準STR基因分型c)在檢測有效的前提下，受檢細胞系的STR位點基因分型數(shù)據(jù)與其對應的標準STR基因分型10.1檢測技術(shù)人員應由具備分子生物學、細胞生物學教育背景，10.2檢測技術(shù)人員的職責是接收到樣本后，按要求對樣本進行分類標注，遵循GB/T10.3檢測實驗過程設(shè)立陰性、陽性對照，確保每次檢測的質(zhì)量。6細胞基因4DNA樣本細胞基因4DNA樣本細胞系樣否是否符合接收要求<>否是否符合接收要求質(zhì)量控制細胞系樣質(zhì)量控制細胞系樣細胞基因DNA樣本要求要求STR基因位點PCR擴增STR基因分型STR遺傳圖譜分型檢測報告7一、基本信息二、檢測結(jié)果…n%…7X…2.根據(jù)細胞研究應用對細胞系鑒定精度的8二、客戶信息（以下*為必填內(nèi)容，請您填寫完整，以便我們及時與您聯(lián)系溝通三、細胞系鑒定信息*為必填內(nèi)容，請您填寫完整）備注9[1]ChatterjeeR.,C[2]NeimarkJ.,Lineofattack.Science,2015.347(622[3]ZhaoM.,etal.,Assemblyandinitialcharacterizationofapanelof85genomicelllinesfromdiverseheadanyprojectusinghumancelllines.MethodsM[5]Announcement:Timetotacklecells’mistakenid[6]ANSI/ATCC,AuthenticationofHumanCellLineASN-0002-2011.[7]MastersJR.,etal.,Shorttandemrepeatprofilingprovidesanforhumancelllines.ProcNatlAcadSciUSA,2001.98(14):p.8012-7.A.S.N.,Celllinemisidentification:thebeginningoftheend.NatR[9]RonaldJ,DuffyKJ,etaLocusCommonlyUsedforHumanDNAIdentification.JournalofForensi