動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞融合單克隆抗體制備細(xì)胞核移植動物細(xì)胞工程技術(shù)動物細(xì)胞工程的根底第一頁，共四十二頁。動物細(xì)胞的培養(yǎng)和核移植技術(shù)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)第二頁，共四十二頁?！惨弧?、概念是指從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖?！捕?、原理細(xì)胞分裂增殖第三頁，共四十二頁?！踩尺^程幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理單個細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)第四頁，共四十二頁。動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液接觸抑制局部細(xì)胞“癌變〞，無限傳代10代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：〔大多死少不死〕〔大多死少不死〕第五頁，共四十二頁。強(qiáng)調(diào)一：細(xì)胞貼壁過程■細(xì)胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁?！雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：外表光滑、無毒、易于帖附。第六頁，共四十二頁?！霎?dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到外表相互接觸時,細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二：接觸抑制第七頁，共四十二頁。有關(guān)概念:原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。第八頁，共四十二頁。有關(guān)概念細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大局部細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有局部細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第九頁，共四十二頁。動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液接觸抑制局部細(xì)胞“癌變〞，無限傳代10代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：〔大多死少不死〕〔大多死少不死〕第十頁，共四十二頁。思考題：1、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？2、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？因?yàn)檫@些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細(xì)胞靠在一起限制了細(xì)胞的生長和增殖，且細(xì)胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。第十一頁，共四十二頁。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？催化蛋白質(zhì)水解。細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。4、細(xì)胞膜的主要成份是什么？蛋白質(zhì)和磷脂5、胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？能第十二頁，共四十二頁。6、既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動物組織分散成單個細(xì)胞要注意什么問題呢？7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？注意時間的控制

不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近第十三頁，共四十二頁。3.總結(jié)：動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細(xì)胞懸浮液剪碎用胰蛋白酶處理10代細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶40-50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細(xì)胞加培養(yǎng)液稀釋傳代10代以內(nèi)，遺傳物質(zhì)不改變，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，增長緩慢以至于完全停止，局部細(xì)胞核型可能發(fā)生變化〔遺傳物質(zhì)可能改變〕為什么用胰蛋白酶處理？原代培養(yǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少局部細(xì)胞獲得不死性，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細(xì)胞。原代培養(yǎng)第十四頁，共四十二頁。歸納過程取

的組織、器官細(xì)胞懸浮液

酶

細(xì)胞貼壁、接觸抑制

培養(yǎng)10代細(xì)胞

培養(yǎng)細(xì)胞株無限傳代細(xì)胞系單個細(xì)胞加

液遺傳物質(zhì)

改變遺傳物質(zhì)

改變動物胚胎或幼齡動物胰蛋白培養(yǎng)原代傳代未已50代細(xì)胞第十五頁，共四十二頁。討論對于多細(xì)胞生物來說，細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的知識，認(rèn)為體外培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該需要什么樣的條件？第十六頁，共四十二頁。4.動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件:1〕無菌無毒的環(huán)境：適宜的溫度：人和哺乳動物細(xì)胞最適溫度為36.5±0.5℃。適宜的酸堿度：PH：7.2-7.4液體合成培養(yǎng)基：〔糖、氨基酸〕、促生長因子、〔無機(jī)鹽、微量元素〕等；通常還需參加血漿、血清等天然成分。4〕氣體環(huán)境：2〕營養(yǎng)：3〕溫度和pH：“95％空氣+5％CO2〞的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；定期更換培養(yǎng)液以去除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細(xì)胞造成危害。第十七頁，共四十二頁。5.動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體、基因工程技術(shù)、檢測有毒物質(zhì)、醫(yī)學(xué)應(yīng)用等。第十八頁，共四十二頁。植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較全能性增殖蔗糖動物血清細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞第十九頁，共四十二頁。2、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是〔〕

A．獲得不死性的細(xì)胞B．10代以內(nèi)細(xì)胞C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞1、動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底是〔〕

A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

AD課堂反響練習(xí)第二十頁，共四十二頁。3、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)表達(dá)中正確的選項(xiàng)是：〔〕A、動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B、動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細(xì)胞分散C、細(xì)胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中D、培養(yǎng)至50代后傳代細(xì)胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變B第二十一頁，共四十二頁。4、一般說來，動物細(xì)胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件〔〕①無毒的環(huán)境②無菌的環(huán)境③培養(yǎng)基需要參加血清④溫度與動物體溫相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥

D、①②③④⑥D(zhuǎn)第二十二頁，共四十二頁。5、動物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)〔〕①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③細(xì)胞分化④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥原代培養(yǎng)一般傳1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D(zhuǎn)、③④⑤⑥A第二十三頁，共四十二頁。6、以下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的根本過程示意圖。請據(jù)此答復(fù)：〔1〕容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自______________________。〔2〕容器A中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是，然后用酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來，這樣做的目的是。動物胚胎或幼齡動物剪碎胰蛋白使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)第二十四頁，共四十二頁?！?〕培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行，瓶中的培養(yǎng)基成分有________________等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細(xì)胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第代?！?〕為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用處理，然后配置成，再分裝。`動物血清10胰蛋白酶細(xì)胞懸浮液第二十五頁，共四十二頁。

概念：將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植〔難度高〕受體細(xì)胞減數(shù)第二次分裂中期的卵母細(xì)胞二、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易第二十六頁，共四十二頁。卵細(xì)胞C母綿羊子宮Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎多利羊分娩卵裂融合后的卵細(xì)胞細(xì)胞拆合技術(shù)妊娠多莉羊的培育過程無性生殖第二十七頁，共四十二頁。克隆羊培育過程黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利第二十八頁，共四十二頁。１、動物的克隆與植物克隆一樣嗎？２、用動物體細(xì)胞進(jìn)行克隆的過程,其實(shí)際操作過程是什么？動物克隆過程的實(shí)際是細(xì)胞核移植不一樣思考題第二十九頁，共四十二頁。1.體細(xì)胞核移植的過程〔以高產(chǎn)奶牛為例〕體細(xì)胞培養(yǎng)甲牛乙牛MⅡ卵母細(xì)胞去除核去核卵母細(xì)胞重組細(xì)胞卵裂重組胚胎代孕母牛丙移植體細(xì)胞群克隆牛細(xì)胞核移植胚胎移植物理或化學(xué)方法激活體細(xì)胞注入細(xì)胞融合第三十頁，共四十二頁。供體細(xì)胞〔供核〕細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞〔MⅡ中期：供質(zhì)〕去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳根底相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作3.嚴(yán)格來說新個體有卵巢母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個親本的性狀核移植過程細(xì)胞培養(yǎng)第三十一頁，共四十二頁。１、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植動物的遺傳物質(zhì)全部來自有利用價值的動物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變思考題第三十二頁，共四十二頁。3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？不是，克隆動物絕大局部DNA來自供體細(xì)胞核，但核外還有少局部DNA〔如線粒體DNA〕來自受體卵母細(xì)胞思考題第三十三頁，共四十二頁。4、比照多莉羊和課本高產(chǎn)奶牛的克隆過程，找出操作過程的不同點(diǎn)？多莉克隆過程的受體細(xì)胞是去核卵細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過程的受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞；多莉克隆過程是將供體細(xì)胞核注入受體細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過程是將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞。5、討論分析上述哪一種措施更科學(xué)？并說明理由？卵母細(xì)胞當(dāng)中的細(xì)胞周期蛋白含量、活性比卵細(xì)胞高，用它作受體更容易成功，將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞，使克隆動物更像供體動物，操作也方便。思考題第三十四頁，共四十二頁。胚胎移植技術(shù)試管動物〔嬰兒〕培養(yǎng)過程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵胚胎新個體母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出第三十五頁，共四十二頁。2.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改進(jìn)進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加存活數(shù)量3、克隆動物作為生物反響器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植第三十六頁，共四十二頁。3.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：〔1〕成功率仍然非常低?！?〕絕大多數(shù)克隆動物還存在健康問題。許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等?！?〕對克隆動物食品的平安性問題存有爭議。第三十七頁，共四十二頁。1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------〔〕A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的根底是----〔〕A.動物細(xì)胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細(xì)胞培養(yǎng)

AD課堂反響：第三十八頁，共四十二頁。3、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞〔〕

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強(qiáng)D第三十九頁，共四十二頁。4.動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于-------------------------〔〕A.培養(yǎng)基不同；B.動物細(xì)胞