課前背誦1、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的概念、原理、意義？

動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的概念、原理、意義？2、植物原生質(zhì)體融合的方法？動(dòng)物細(xì)胞融合的方法？3、傳統(tǒng)方法制備的抗體有什么缺點(diǎn)？單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)？4、“滅活”指的是？在單克隆抗體的制備過程中：5、給小鼠用特定的抗原進(jìn)行免疫的目的？6、進(jìn)行了幾次篩選？目的分別是？7、獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞后，如何操作再制備大量單克隆抗體？分別從哪提取單克隆抗體？2.2.3動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物2017年，中國(guó)的科學(xué)家將這一幕變成了現(xiàn)實(shí)，他們利用體細(xì)胞核移植技術(shù)成功克隆出兩只獼猴“中中”和“華華”?！緦W(xué)習(xí)目標(biāo)】1.闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)的概念和原理。2.以文字和圖示表述體細(xì)胞核移植的過程。3.說明體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景。一、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1.概念：2.原理：動(dòng)物(體)細(xì)胞核的全能性無性生殖4.哺乳動(dòng)物核移植分類種類難易程度原因胚胎細(xì)胞核移植

體細(xì)胞核移植相對(duì)容易十分困難5.非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物體細(xì)胞核移植的困難原因①供體細(xì)胞的細(xì)胞核在去核卵母細(xì)胞中不能完全恢復(fù)其分化前的功能狀態(tài)，這導(dǎo)致了胚胎發(fā)育率低。②對(duì)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物胚胎進(jìn)行操作的技術(shù)尚不完善。將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入去核的卵母細(xì)胞中，使這個(gè)重新組合的細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。3.涉及的生殖方式:分化程度低，全能性容易表現(xiàn)分化程度高，全能性較難表現(xiàn)一、體細(xì)胞核移植技術(shù)3.過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）思考卵母細(xì)胞選擇卵母細(xì)胞去核2.體細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？保證后代的遺傳物質(zhì)幾乎來自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物（供體）1.為什么選卵母細(xì)胞作為細(xì)胞核的受體細(xì)胞？①體積大，營(yíng)養(yǎng)多、易操作；②細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在激發(fā)細(xì)胞核全能型表達(dá)的物質(zhì)；核移植操作重構(gòu)胚的激活與移植供體細(xì)胞選擇與培養(yǎng)卵母細(xì)胞選擇與去核獲得克隆動(dòng)物卵母細(xì)胞選擇與去核去除卵母細(xì)胞核的方法：顯微操作去核采集到的卵母細(xì)胞要在體外培養(yǎng)到減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）一、體細(xì)胞核移植技術(shù)3.過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）供體高產(chǎn)奶牛從供體高產(chǎn)奶牛身體的某一部位（如耳）上取體細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)核移植操作重構(gòu)胚的激活與移植供體細(xì)胞選擇與培養(yǎng)獲得克隆動(dòng)物卵母細(xì)胞選擇與去核供體細(xì)胞選擇與培養(yǎng)3.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，這是為什么？

因?yàn)楫?dāng)傳代至10～50代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。3.過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）4.在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞核移植操作時(shí)，注入卵母細(xì)胞的是供體細(xì)胞還是其細(xì)胞核？為什么？

注入卵母細(xì)胞的是供體細(xì)胞；這種方法操作簡(jiǎn)便，對(duì)卵母細(xì)胞損傷較小。一、體細(xì)胞核移植技術(shù)供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞融合5.激活重構(gòu)胚的方法有哪些？

用物理或化學(xué)方法(如電刺激、Ca2+載體、乙醇和蛋白酶合成抑制劑等)激活重構(gòu)胚。核移植操作重構(gòu)胚的激活與移植供體細(xì)胞選擇與培養(yǎng)卵母細(xì)胞選擇與去核獲得克隆動(dòng)物核移植操作重構(gòu)胚的激活與移植激活重構(gòu)胚使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育3.過程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）一、體細(xì)胞核移植技術(shù)核移植操作重構(gòu)胚的激活與移植供體細(xì)胞選擇與培養(yǎng)卵母細(xì)胞選擇與去核獲得克隆動(dòng)物將胚胎移入受體（代孕）母牛體內(nèi)生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同的犢牛獲得克隆動(dòng)物7.核移植技術(shù)中選用的核供體應(yīng)為具有優(yōu)良性狀的個(gè)體,提供卵母細(xì)胞的個(gè)體和代孕受體必須是同種奶牛嗎？

不是，提供卵母細(xì)胞的個(gè)體和代孕受體只需為同一物種的健康雌性個(gè)體即可。6.重構(gòu)胚激活后是否直接進(jìn)行移植？

激活的重構(gòu)配必須完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程,形成早期胚胎才能進(jìn)行胚胎移植。閱讀P53圖2-18，思考下列問題：1.選擇卵母細(xì)胞作為核移植受體細(xì)胞的原因？2.從卵巢中獲得的卵是否可以直接作為核的受體?若不可以，需要如何處理?

3.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？4.通過體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%復(fù)制嗎？為什么？5.建構(gòu)克隆高產(chǎn)奶牛的流程？該過程用到哪些技術(shù)手段？是否證明了動(dòng)物細(xì)胞具有全能性？

6.體細(xì)胞核移植技術(shù)與誘導(dǎo)iPS細(xì)胞相比，有什么相似或不同之處？①體積大、營(yíng)養(yǎng)多、易操作②含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)不可以，需培養(yǎng)到減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）保證后代的遺傳物質(zhì)幾乎來自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物（供體）。不是①克隆動(dòng)物絕大部分DNA來自供體動(dòng)物的細(xì)胞核，但線粒體中的DNA（細(xì)胞質(zhì)中的DNA）同時(shí)來自供體細(xì)胞和受體卵母細(xì)胞。②環(huán)境也會(huì)影響克隆動(dòng)物的性狀，其環(huán)境與供體不完全相同。③可能發(fā)生基因突變、染色體變異等可遺傳變異。3.建構(gòu)克隆高產(chǎn)奶牛的流程？該過程中應(yīng)用到的技術(shù)手段有哪些？是否證明了動(dòng)物細(xì)胞具有全能性？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植胚胎移植早期胚胎培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合性別與供體一致動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性4.體細(xì)胞核移植技術(shù)與誘導(dǎo)iPS細(xì)胞相比，有什么相似或不同之處？

利用體細(xì)胞核移植技術(shù)和誘導(dǎo)iPS細(xì)胞都能獲得干細(xì)胞，但它們的過程是完全不同的。通過體細(xì)胞核移植技術(shù)可以獲得帶有核供體細(xì)胞遺傳物質(zhì)的胚胎干細(xì)胞;誘導(dǎo)iPS細(xì)胞需要在細(xì)胞中表達(dá)幾個(gè)關(guān)鍵基因，將細(xì)胞逆轉(zhuǎn)到類似胚胎干細(xì)胞的狀態(tài)。體細(xì)胞核移植技術(shù)對(duì)核供體細(xì)胞有較高要求，一般情況下體細(xì)胞的分化程度越高，它重編程轉(zhuǎn)化為干細(xì)胞的成功率就越低;可誘導(dǎo)成為iPS細(xì)胞的細(xì)胞來源相對(duì)廣一些，研究表明成纖維細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞等都可以誘導(dǎo)成為iPS細(xì)胞。體細(xì)胞核移植技術(shù)涉及采集卵母細(xì)胞、去核、融合等復(fù)雜的操作;誘導(dǎo)iPS細(xì)胞的技術(shù)流程相對(duì)簡(jiǎn)單，可能更適合用于生產(chǎn)實(shí)踐。目前科學(xué)家還在研究由這兩種技術(shù)獲得的干細(xì)胞在基因表達(dá)、DNA甲基化等方面的差異，這些研究成果也將直接影響它們今后的應(yīng)用。二、體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景及存在的問題1.應(yīng)用前景（1）畜牧業(yè)：加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育。（2）醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域A.建立轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞系，再利用此技術(shù)培育的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物可作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白。乳腺生物反應(yīng)器（2）醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域B.治療人類疾病時(shí)，轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官，可作為異種移植的供體。治療性克隆C.患者的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)分化，能形成相應(yīng)的細(xì)胞、組織或器官可用于移植以避免免疫排斥反應(yīng)。（3）科學(xué)研究領(lǐng)域A.研究克隆動(dòng)物可使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程；B.克隆一批遺傳背景相同的動(dòng)物，可通過對(duì)比來分析致病基因；C.

克隆特定疾病模型的動(dòng)物，能為研究該疾病的致病機(jī)制和開發(fā)相應(yīng)的藥物提供幫助。（4）保護(hù)瀕危物種：

有望增加瀕危物種的存活數(shù)量中華眼鏡蛇黑草黃弄蝶二、體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景及存在的問題1.應(yīng)用前景（1）該技術(shù)的成功率非常低，各個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步改進(jìn)。（2）相對(duì)于技術(shù)研究，核移植的理論研究較為滯后，需要與發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子遺傳學(xué)等學(xué)科更深層次的理論研究相結(jié)合。（3）絕大多數(shù)克隆動(dòng)物存在健康問題，表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大、異常肥胖、發(fā)育困難、臟器缺陷和免疫失調(diào)等。P55【練習(xí)與應(yīng)用】二、拓展應(yīng)用2.一些研究者認(rèn)為，克隆動(dòng)物的端粒比較短，基因表達(dá)不正常，早衰是一種必然現(xiàn)象。另一些研究者則認(rèn)為，克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)是正常的，目前發(fā)現(xiàn)的早衰跡象是在克隆過程中的一些技術(shù)問題造成的;或者克隆動(dòng)物在發(fā)育過程中出現(xiàn)了變異，早衰只是偶然現(xiàn)象。二、體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景及存在的問題2.存在的問題【課堂小結(jié)】用物理或化學(xué)方法激活重構(gòu)胚通過顯微操作去核1.

假設(shè)世界上最后一頭野驢剛死亡，以下使它"復(fù)生"的方案中可行的是（

）A.

將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育出新個(gè)體B.

將野驢的體細(xì)胞取出，利用組織培養(yǎng)培育出新個(gè)體C.

將野驢的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育出新個(gè)體D.

將野驢的體細(xì)胞核移植到家驢的去核卵母細(xì)胞中,經(jīng)孕育培育出新個(gè)體D練習(xí)與應(yīng)用

一、概念檢測(cè)課本P552.

2017年，某國(guó)批準(zhǔn)了首例使用細(xì)胞核移植技術(shù)培育"三親嬰兒"的申請(qǐng)。其培育過程可選用如下技術(shù)路線。據(jù)圖分析下列敘述錯(cuò)誤的是（

）CA.該技術(shù)涉及動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植等操作B.

該技術(shù)可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代C.卵母細(xì)胞捐獻(xiàn)者攜帶的紅綠色盲基因能夠遺傳給"三親嬰兒"D.

"三親嬰兒"同時(shí)擁有自己父親、母親及卵母細(xì)胞捐獻(xiàn)者的部分基因練習(xí)與應(yīng)用

一、概念檢測(cè)課本P551.大熊貓是我國(guó)的國(guó)寶。盡管我國(guó)政府采取了許多保護(hù)措施，但由于大熊貓的繁殖能力低，幼仔成活率也低，它的數(shù)量仍然非常少。有科學(xué)家嘗試采用體細(xì)胞核移植技術(shù)來克隆大熊貓。請(qǐng)你結(jié)合本節(jié)所學(xué)內(nèi)容并搜集相關(guān)資料了解這方面的研究進(jìn)展。也有人不贊成進(jìn)行克隆大熊貓的研究，認(rèn)為保護(hù)大熊貓的最好措施就是保護(hù)現(xiàn)有大熊貓及其生存環(huán)境,對(duì)此你有什么看法?

提示：是否贊成克隆大熊貓，只要言之有理；

無論贊成還是反對(duì)克隆大熊貓的研究，都應(yīng)該保護(hù)好大熊貓的生存環(huán)境，否則即使成功克隆了大熊貓，它們沒有適宜的生存環(huán)境，也可能走向滅絕。練習(xí)與應(yīng)用

二、拓展應(yīng)用課本P55

2.

2003年，世界上第一只用體細(xì)胞克隆的動(dòng)物——多莉，因患有嚴(yán)重的肺部疾病被實(shí)施了安樂死。它只活了7歲，而普通綿羊的平均壽命在12歲左右。多莉的死亡引發(fā)了關(guān)于克隆動(dòng)物是否早衰的爭(zhēng)論。一些研究者認(rèn)為，克隆動(dòng)物的端粒比較短，基因表達(dá)不正常，早衰是一種必然現(xiàn)象。另一些研究者則認(rèn)為，克隆動(dòng)物的遺傳物質(zhì)是正常的，目前發(fā)現(xiàn)的早衰跡象是在克隆過程中的一些技術(shù)問題造成的;或者克隆動(dòng)物在發(fā)育過程中出現(xiàn)了變異，早衰只是偶然現(xiàn)象。請(qǐng)你搜集資料，尋找支持各方觀點(diǎn)的研究證據(jù)。你也可以調(diào)查克隆動(dòng)物存在的其他問題，并說明科學(xué)家是如何解決這些問題的。

提示：在搜集證據(jù)的過程中，要注意證據(jù)的來源及其真實(shí)性和可靠性，雖然目前對(duì)克隆動(dòng)物的早衰問題存在爭(zhēng)論，但這樣的爭(zhēng)論有利于人類進(jìn)一步了解生命現(xiàn)象，也有利于克隆技術(shù)更好地應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)牧業(yè)等領(lǐng)域。練習(xí)與應(yīng)用

二、拓展應(yīng)用課本P551．如圖為體細(xì)胞克隆猴“中中”和“華華”的培育流程，為建立人類疾病的動(dòng)物模型、研究疾病機(jī)理帶來光明前景。下列敘述正確的是(

)A．過程①將成纖維細(xì)胞注射到去核的卵母細(xì)胞中，體現(xiàn)細(xì)胞膜的選擇透過性B．過程②在培養(yǎng)基中加入的動(dòng)物血清含有激發(fā)成纖維細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)C．“中中”“華華”與過程③中代孕母猴性狀最相似D．與模型小鼠相比，模型猴更適合于研究人類疾病的發(fā)病機(jī)理、研發(fā)診治藥物D2.(不定項(xiàng))某研究團(tuán)隊(duì)成功用親代貓的腿部皮膚細(xì)胞培育了克隆貓“大蒜”。它與親代貓除在花紋上的幾處細(xì)微差異外幾乎完全相同。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．用Ca2＋載體法可以促進(jìn)皮膚細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞融合B．“大蒜”與親代貓的細(xì)微差異只能是受細(xì)胞質(zhì)基因的影響C．不直接用皮膚細(xì)胞進(jìn)行克隆是由于該細(xì)胞的全能性受到限制D．皮膚細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞后需核重編程以使重構(gòu)胚正常發(fā)育AB3.下圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得克隆奶牛的流程圖。下列敘述錯(cuò)誤的是()。A.過程①除去的是卵母細(xì)胞中的紡錘體—染色體復(fù)合物B.過程②需要對(duì)供體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)C.過程③可用電刺激技術(shù)處理D.過程⑤要求代孕母牛具有較多的優(yōu)良性狀D4.科學(xué)家利用核移植技術(shù)克隆出了多種動(dòng)物。下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)的敘述，正確的是()。A.胚胎細(xì)胞核移植的難度明顯大于成熟體細(xì)胞的核移植B.在核移植過程中，可通過顯微操作去除卵母細(xì)胞中紡錘體-染色體復(fù)合物C.核移植時(shí)，提供細(xì)胞核和去核卵母細(xì)胞的動(dòng)物都應(yīng)為雌性D.通過核移植方法培育的克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)全部來自供體細(xì)胞核B5.“三親嬰兒”的培育過程可選用如下技術(shù)路線。據(jù)圖分析,下列敘述不正確的是()A.“三親嬰兒”的出生屬于有性生殖B.選擇捐獻(xiàn)者的卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植,其中原因之一是卵母細(xì)胞體積比較大,易于進(jìn)行顯微操作去核C.使用該技術(shù)可使母親細(xì)胞質(zhì)中的致病基因不會(huì)傳遞給后代D.該技術(shù)可避免母親