第2節(jié)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)（第2課時(shí)）

------、必備知識?落實(shí)基礎(chǔ)性/--

一、單選題

1.用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測出樣品

中的活菌數(shù)，原因是（）

A.菌落中的細(xì)菌數(shù)目是固定的

B.平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌

C.通過此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)與活菌的實(shí)際數(shù)目相同

D.平板上的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌

【答案】D

【分析】稀釋涂布平板法將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培

養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一

個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約

含有多少活菌，D正確,ABC錯(cuò)誤。

2.由于石油等不可再生資源供應(yīng)日趨緊張，開發(fā)各種再生纖維素纖維成為獲取新型紡織原

料的主要渠道，而纖維素分解菌在轉(zhuǎn)化可再生纖維素方面具有巨大的應(yīng)用價(jià)值。下列相關(guān)敘

述錯(cuò)誤的是（）

A.富集纖維素分解菌時(shí)，應(yīng)用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)

B.分離纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基中應(yīng)加入適量的剛果紅

C.可用平板劃線法對纖維素分解菌進(jìn)行純化培養(yǎng)

D.培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，接種后的培養(yǎng)基需倒置

【答案】A

【分析】1、篩選纖維素分解菌應(yīng)用以纖維素為唯一碳源的擇選培養(yǎng)基。

2、剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，纖維素分解茵產(chǎn)生的纖維素酶可以水解纖維素而

使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，所以可以用剛果紅染液鑒別纖維素分解菌。

【詳解】A、在分離出纖維素分解菌之前，需對微生物進(jìn)行富集培養(yǎng)，此時(shí)應(yīng)用液體培養(yǎng)基，

利于培養(yǎng)液與微生物充分接觸，加速微生物繁殖，A錯(cuò)誤；

B、在分離纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基以纖維素作為唯一碳源，且應(yīng)加入剛果紅染液，B正確；

C、對纖維素分解菌進(jìn)行純化培養(yǎng)時(shí)，可采用平板劃線法或稀釋涂布平板法，C正確；

D、接種后，為防止皿蓋上凝結(jié)的水珠滴落在培養(yǎng)基上造成培養(yǎng)基污染，應(yīng)將培養(yǎng)基進(jìn)行倒

置培養(yǎng)，D正確。

故選A。

3.如圖為分離和純化分解甲醛的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)過程，其中LB培養(yǎng)基能使菌種成倍擴(kuò)增，以下

說法正確的是()

____________冠.

①制取②LB培③無機(jī)液④無機(jī)固體侖

菌懸液養(yǎng)基，振體培養(yǎng)基培養(yǎng)基+甲⑤無機(jī)液體培養(yǎng)基

蕩培養(yǎng)+甲醛，振醛，恒溫+甲醛，振蕩培養(yǎng)

A.需要對活性污泥作滅菌處理

B.②中LB培養(yǎng)基只能以甲醛為唯一碳源

C.目的菌種異化作用類型為厭氧型

D.經(jīng)⑤處理后，應(yīng)選擇瓶中甲醛濃度最低的一組進(jìn)一步純化培養(yǎng)

【答案】D

【分析】據(jù)圖分析：在分離和純化分解甲醛的細(xì)菌的過程中，通過①過程制取各種菌的懸濁

液，②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量；③中

的培養(yǎng)基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的細(xì)菌能夠存活，通過③過程可以篩選出

能分解甲醛的微生物；④過程可以獲得單個(gè)菌落，獲得單個(gè)菌落過程中常用的接種方法是平

板劃線法或者稀釋涂布平板法，為避免水滴污染培養(yǎng)基，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿須

倒置；經(jīng)過⑤過程后，取樣測定甲醛濃度，選出甲醛濃度最低的培養(yǎng)瓶，再分離、培養(yǎng)菌株。

【詳解】A、該實(shí)驗(yàn)是從活性污泥中分離和純化能分解甲醛的細(xì)菌，故不需要對活性污泥作

滅菌處理，A錯(cuò)誤；

B、②過程用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)后，可以獲得大量微生物，從而增加目的菌的菌群數(shù)量，故②

中LB培養(yǎng)基不是以甲醛為唯一碳源；③過程可以篩選出能分解甲醛的微生物，需要以甲醛

為唯一碳源的培養(yǎng)基，R錯(cuò)誤；

C、圖示分解甲醛的細(xì)菌是在培養(yǎng)皿中進(jìn)行的，故目的菌種異化作用類型屬于需氧型細(xì)菌，

C錯(cuò)誤；

D、經(jīng)⑤處理后，瓶中甲醛濃度降低，甲醛濃度最低的一組中分解甲醛的細(xì)菌純度最高，可

進(jìn)一步純化培養(yǎng)，D正確。

4.某生物學(xué)興趣小組嘗試對土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離并計(jì)數(shù)，相關(guān)敘述正確的是

()

A.制備選擇培養(yǎng)基時(shí)，需加入尿素、瓊脂、葡萄糖、硝酸鹽等物質(zhì)

B.用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)結(jié)果，活菌的實(shí)際數(shù)目往往比統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)低

C.服酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH降低，加入酚紅指示劑后變紅

D每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量;某一稀釋倍數(shù)下至少3個(gè)培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)+菌液稀

釋液體積X稀釋倍數(shù)

【答案】D

【分析】1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，

經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落，稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇30-300的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2、間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）的原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)

菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌.通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約

含有多少活菌。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c+V）xM,其中c代表某一稀釋度下平

板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋倍數(shù)。

3、如果要分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基；在以尿素為

唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，細(xì)菌合成的服酶將尿素分解為氨，PH增高，使指示

劑變紅色

【詳解】A、分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基中要有尿素、瓊脂、葡萄糖，尿素給分解

尿素的細(xì)菌提供氮源，不能加硝酸鹽，否則無法起到選擇出尿素分解菌的作用，A錯(cuò)誤；

B、用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)結(jié)果時(shí)，有的活菌在培養(yǎng)過程中會死亡，而有的菌落是由多個(gè)活

菌共同形成的，故活菌的實(shí)際數(shù)目往往比統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)高，B錯(cuò)誤；

C、服酶將尿素分解成氨使培養(yǎng)基的pH升高，加入酚紅指示劑后變紅，C錯(cuò)誤；

D、根據(jù)活菌計(jì)數(shù)法的計(jì)數(shù)公式可知，每毫升菌液中微生物細(xì)胞的數(shù)量二某一稀釋倍數(shù)下至

少3個(gè)培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)+菌液稀釋液體積x稀釋倍數(shù)，D正確。

【點(diǎn)睛】本題考查了微生物的分離和培養(yǎng)的有關(guān)知識?？忌R記和掌握利用培養(yǎng)基對土壤

中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行選擇和鑒定的方法和原理，利用分析與綜合的科學(xué)思維，結(jié)合所學(xué)的

知識準(zhǔn)確答題。

5.在“果醋制作過程”中，獲得較多的醋酸桿菌菌種的最簡便方法是（）

A.不必人為加入菌種，在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸桿菌

B.從變酸的葡萄酒表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離

C.從泡菜壇蓋邊沿的水槽中的表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離

D.從土壤中分離提取

【答案】B

【分析】參與果醋制作的菌種是醋酸桿菌，醋酸桿菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足的時(shí)

候/能進(jìn)行旺盛的生理活動(dòng)。變酸的酒的表面觀察的菌膜就是醋酸桿菌在液面上大量繁殖而

菌落在平板上劃線，據(jù)此可判斷該實(shí)驗(yàn)中將土壤浸出液接種到培養(yǎng)基的方法為稀釋涂布平板

法，A錯(cuò)誤；

B、圖示中是將土壤浸出液接種到無氮培養(yǎng)基上選擇自生固氮菌的過程，該培養(yǎng)基屬于固體

培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；

C、自生固氮微生物屬于異養(yǎng)微生物，沒有碳源不能生長，所以為了保證自生固氮菌的生長

培養(yǎng)基中應(yīng)添加碳源，C錯(cuò)誤；

D、由于自生固氮菌可以利用空氣中氮?dú)鉃榈矗渌荒芄痰奈⑸锊荒芾玫獨(dú)庾?/p>

氮源，所以在無氮的培養(yǎng)基上可以篩選出自生固氮菌，故圖示中使用了無氮培養(yǎng)基，D正確。

8.高濃度的錢鹽對池塘養(yǎng)殖的對蝦有一定的毒害作用，硝化細(xì)菌是一種好氧菌，可有效凈

化水體中鏤鹽，降低對蝦的死亡率?？蒲腥藛T擬從當(dāng)?shù)貙ξr養(yǎng)殖池塘中篩選出對鉉鹽降解率

高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株,操作流程如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

檢

接

測

種

并

一

接

比

離

種

較

心

一

鏤

一

接

鹽

種

一

濃

度

候選菌含鉉鹽培養(yǎng)液

A.從對蝦死亡率低的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率

B.純化菌種時(shí)，若按圖中所示的接種方法接種，接種環(huán)需要灼燒5次

C.在錐形瓶中培養(yǎng)硝化細(xì)菌時(shí)需要振蕩培養(yǎng)，目的是增加硝化細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)、溶解氧的

充分接觸

D.可選擇鉉鹽濃度減小得最多的一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)

【答案】B

【分析】1、微生物常見的接種的方法：

⑴平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。

在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形

成單個(gè)菌落。

⑵稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后

可形成單個(gè)菌落。

2、振蕩培養(yǎng)：提供充足氧氣、并使細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸.擴(kuò)大培養(yǎng)。

【詳解】A、本題想要篩選出對鐵鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，那么從對蝦死亡率低

的養(yǎng)殖池塘中取樣，能提高篩選的成功率，A正確；

B、純化菌種時(shí)，采用圖示方法接種時(shí)，每次劃線前后都要灼燒接種環(huán)，共有5個(gè)劃線區(qū)域,

因此接種環(huán)需要灼燒6次，B錯(cuò)誤；

C、已知硝化細(xì)菌是好氧性細(xì)菌，則擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)需要振蕩的目的是增加硝化細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)、

溶解氧的充分接觸，C正確；

D、對鐵鹽降解率越高，培養(yǎng)基中鍍鹽濃度減小得越多，所以可選擇鐵鹽濃度減小得最多的

一組候選菌進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)，D正確。

9.甲、乙、丙是三種微生物，下表I、II、川是用來培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙

都能在III中正常生長繁殖；甲能在I中正常生長繁殖,而乙和丙都不能；乙能在II中正常生

長繁殖，甲、丙都不能。下列說法正確的是（）

粉狀蔗糖)

K2HPO.1FeSO4(NH42SO.1H2OMgSO.?CaCh

硫10g4g0.5g10g0.4g100ml9.25g0.5g

1++++-+++

II+++-++++

III++++++++

A.甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物

B.甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物

C.甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物

D,甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物

【答案】D

【分析】據(jù)表分析：I培養(yǎng)基的特點(diǎn)是缺氮，能在這樣的涪養(yǎng)基上存活的只能是固氮微生物；

II培養(yǎng)基的特點(diǎn)是沒有有機(jī)碳源，是培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基；III培養(yǎng)基是適宜異養(yǎng)微生物

生長的培養(yǎng)基。根據(jù)表格分析，甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能，而I培養(yǎng)基缺

氮,說明中能夠自身固氮，屬于固氮微生物；乙能在II中正常生長繁殖，而甲和乙都不能，

II培養(yǎng)基中沒有有機(jī)碳源，說明丙能夠合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)微生物；而丙不能在I培養(yǎng)基

中生長，說明不能固氮；又不能在II培養(yǎng)基中生長，說明不能合成有機(jī)物，只能在III培養(yǎng)基

中生長，說明丙屬于異養(yǎng)微生物。

【詳解】根據(jù)表格分析，甲能在I中正常生長繁殖，而乙和丙都不能，而I培養(yǎng)基缺氮，說

明甲能夠自身固氮，屬于固氮微生物；乙能在II中正常與長繁殖，而甲和乙都不能，II培養(yǎng)

基中沒有有機(jī)碳源，說明丙能夠合成有機(jī)物，屬于自養(yǎng)微生物；而丙不能在I培養(yǎng)基中生長，

說明不能固氮；又不能在II培養(yǎng)基中生長，說明不能合成有機(jī)物，只能在川培養(yǎng)基中生長,

說明丙屬于異養(yǎng)微生物，D正確。

、關(guān)鍵能力?提升綜合性/

10.利用農(nóng)作物秸稈等纖維質(zhì)原料生產(chǎn)的乙醇，經(jīng)加工可制成燃料乙醇，從而減少了對石

油資源的依賴，下圖為生產(chǎn)燃料乙醇的簡要流程，據(jù)圖分析錯(cuò)誤的一項(xiàng)是（）

A.要得到微生物A,最好選擇富含纖維素的土壤采集土樣

B.圖中②過程常用的微生物B是酵母菌

C.微生物A和微生物B可利用的碳源相同

D.可用纖維素酶制劑代替微生物A起作用

【答案】C

【分析】土壤中存在著大量纖維素分解酶,包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維

素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進(jìn)一步分解為葡萄糖使微生

物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他

微生物則不能生長。

【詳解】A、據(jù)圖分析可知，微生物A可以產(chǎn)生纖維素酶，所以要得到微生物A,最好選擇

富含纖維素的土壤采集土樣，A正確；

B、酒精發(fā)酵產(chǎn)生乙醇常用的菌種（微生物B）是酵母菌，B正確；

C、微生物A和微生物B可利用的碳源分別是纖維素和葡萄糖，C錯(cuò)誤；

D、生物A之所以能利用纖維質(zhì)原料是因?yàn)槠浜欣w維素酶，故可用纖維素酶制劑代替微生

物A起作用，D正確。

11.將大腸桿菌接種到適宜的細(xì)菌培養(yǎng)基上，加蓋后，以不同的方式處理，并放置在不同

的溫度環(huán)境中，培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察所得結(jié)果列表如下。

編

處理方法溫度結(jié)果

□

A接種大腸桿菌40C°全表面呈渾濁

接種大腸桿菌并函蓋一吸有抗生素X紙片周圍呈現(xiàn)一片清晰區(qū)，其余表面

B40C°

的圓紙片呈渾濁

接種大腸桿菌并覆蓋一吸有抗生素Y

C40C°全表面呈渾濁

的圓紙片

D接種大腸桿菌，表面全被醋覆蓋40C°全表面清晰

E接種大腸桿菌0C°全表面清晰

F未接菌種40C°全表面清晰

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果所作出的下列判斷中，錯(cuò)誤的是（；A.編號A和F比較可知，有大腸

桿菌的培養(yǎng)基表面會變渾濁

B.根據(jù)編號B和C的觀察結(jié)果，可知抗生素Y比抗生素X的殺菌能力強(qiáng)

C.將編號E和A的結(jié)果比較可知，0C。的環(huán)境不適合大腸桿菌生長

D.若揭開編號F的蓋子，24小時(shí)后可觀察到培養(yǎng)基表面會出現(xiàn)渾濁

【答案】B

【分析】分析表格：表中表示將大腸桿菌接種到適宜的細(xì)菌培養(yǎng)基上，加蓋后，以不同的方

式處理，并放置在不同的溫度環(huán)境中，培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察所得的結(jié)果。比較A和F可知

有大腸桿菌培養(yǎng)基的表面會變渾濁；比較B和C可知抗生素X比抗生素Y的殺菌能力強(qiáng)；

比較E和A可知0C。不適合大腸桿菌生長。

【詳解】A、根據(jù)對照原貝J,A、F的區(qū)別在于是否接種了大腸桿菌，比較A、F的觀察結(jié)果,

有大腸桿菌培養(yǎng)基的表面會變渾濁，A正確；

B、含有抗生素的紙片覆蓋在大腸桿菌的培養(yǎng)基上，可根據(jù)培養(yǎng)基表面的渾濁程度判定此種

抗生素對大腸桿菌的殺菌能力，即抗生素X比抗生素丫的殺菌能力強(qiáng)，B錯(cuò)誤；

C、E、A形成對照，其自變量是溫度,可知0C。不適合大腸桿菌生長，C正確；

D、F暴露在空氣中后，會自然接種菌種，形成菌落，使培養(yǎng)基表面出現(xiàn)渾濁，D正確。

12.丙草胺（G5H22C1NO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生

長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對其計(jì)數(shù)（如下圖

所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

168個(gè)

06菌落

廠「175個(gè)

S菌落

口J

10gS菌落

土樣

A.將培養(yǎng)基調(diào)至酸性時(shí)，有利于降解菌的生長繁殖

B.利用該方法計(jì)數(shù)結(jié)果往往比顯微鏡直接計(jì)數(shù)法偏小

C.以丙草胺為唯一氮源培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)可提高降解菌的濃度

D.5號試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7x10'個(gè)

【答案】A

【分析】1、微生物常見的接種的方法：

(1)平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培

養(yǎng)。在劃線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可

能形成單個(gè)菌落；

(2)稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)

后可形成單個(gè)菌落。

2、在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的

培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基＞

【詳解】A、培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，應(yīng)該將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，A錯(cuò)誤；

B、該計(jì)數(shù)方法為稀釋涂布平板法，由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只

是一個(gè)菌落，故計(jì)數(shù)結(jié)果比顯微鏡直接計(jì)數(shù)法偏小，B正確；

C、若以丙草胺作為唯一氮源，則只有具有降解能力的降解菌能夠存活，故可以提高降解菌

的濃度，C正確；

D、根據(jù)5號試管的數(shù)據(jù)可知，每克土壤中菌株數(shù)為(168+175+167)-3-O.lxlO6=1.7xlO9

個(gè)，D正確。

13.酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量，研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌

株，進(jìn)行了如圖I所示實(shí)驗(yàn)，甲、乙、丙、丁錐形瓶內(nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基，下列

說法錯(cuò)誤的是()

偷的灑過濾液稀壁】?！?1mL1X105

9mL無菌水口腹中泗精濃度/%

①前萄酒■的中活菌數(shù);出⑹個(gè)UM

的制作分別取接種無菌水A甲B

C.lmL

菌落個(gè)數(shù)a菌落個(gè)數(shù)港

涂布在乙

62空白培f金6挑選不同洋

二

養(yǎng)基上的菌落丙

687包

生丁

務(wù)」

747->

②平板涂布③發(fā)醉產(chǎn)酒精一

I

A.葡萄酒發(fā)酵過程中，缺氧酸性環(huán)境、酵母菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物酒精等可抑制雜菌的繁

殖

B.用稀釋涂布平板法計(jì)算出葡萄酒過濾液的活菌數(shù)為6.8x109個(gè)/L,此數(shù)值可能低于實(shí)際的

活菌數(shù)

C.對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法，菌種接種過程中的試管口、瓶口等需灼燒

滅菌

D.由圖II可知，丙瓶培養(yǎng)基渾濁的原因是培養(yǎng)基滅菌不徹底，丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙

強(qiáng)

【答案】D

【分析】果酒制作過程中的相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作：材料的選擇和處理T滅菌T榨汁一發(fā)酵。利用葡

萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的環(huán)境下發(fā)酵產(chǎn)酒精。若對菌液計(jì)數(shù)，需選取菌落數(shù)處干

30-300的培養(yǎng)皿計(jì)數(shù)。平均菌落數(shù)除以涂布體積乘上稀釋倍數(shù)求的是每毫升發(fā)酵液的微生

物數(shù)量，還應(yīng)該再乘10算每升發(fā)酵液的微生物數(shù)。

【詳解】A、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的環(huán)境下發(fā)酵產(chǎn)酒精。次生代謝不是生物

生長所必需的，產(chǎn)生的酒精不是酵母菌生長所必需的物質(zhì)，所以是次生代謝物。大多數(shù)雜菌

在缺氧、有酒精的環(huán)境下無法繁殖，A正確；

B、若對菌液計(jì)數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30~300的培養(yǎng)皿計(jì)數(shù)。平均菌落數(shù)除以涂布體積乘

上稀釋倍數(shù)求的是每毫升發(fā)酵液的微生物數(shù)量，還應(yīng)該再乘10算每升發(fā)酵液的微生物數(shù)，

故先求平均菌落數(shù)為（62+68+74）-3=68,除以涂布體積01mL后等于680個(gè)/mL,稀釋

倍數(shù)為1x10”,再乘10：最后為6.8x109個(gè)/L,計(jì)數(shù)過程中兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞連在一起，

平板上生長出一個(gè)菌落，所以數(shù)目偏小，B正確；

C、培養(yǎng)基滅菌采用高壓蒸汽滅菌，玻璃器皿、接種用具可采用干熱滅菌，接種時(shí)的玻璃瓶

口等都需在酒精燈火焰處進(jìn)行灼燒滅菌，C正確；

D、乙、丙、丁挑取不同的菌落培養(yǎng)，丙瓶與乙、丁瓶相同條件培養(yǎng)，但培養(yǎng)液沒有酒精產(chǎn)

生，且瓶內(nèi)活菌數(shù)量不低，推測丙瓶是通氣培養(yǎng)；甲接種無菌水，瓶中無菌，說明培養(yǎng)基滅

菌徹底，無菌操作正常，丁組的活菌數(shù)比乙組少，但是產(chǎn)生的酒精和乙組一樣多，所以丁組

產(chǎn)生酒精能力比乙強(qiáng)，D錯(cuò)誤。

14.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)

生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用

苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如下圖0所示,①為土壤祥品。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

?A

<

0

①②

A.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源

B.如果要測定②?中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法

C.若圖中④為對照實(shí)驗(yàn)，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一的誠源

D.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落

【答案】C

【分析】1、從土壤中篩選目的微生物的流程一般為：土壤取樣一樣品的稀釋一涂布培養(yǎng)一

挑選能生長的菌落一鑒定，

2、微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平

板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的

延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)

過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】A、由題干信息分析可知，該實(shí)驗(yàn)的目的是從土壤中篩選獲得只能降解利用苯酚的

細(xì)菌菌株，故圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為唯一碳源，以增加目的菌

的濃度，A正確；

B、如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法，B正確；

C、④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別是④的培養(yǎng)基不加入苯酚作碳源，⑤的培養(yǎng)基加入苯酚作碳源,

這樣才能形成對照，C錯(cuò)誤；

D、平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能在培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落，D正確。

二、綜合題

15.測定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測定大腸桿菌的數(shù)目。流程如圖所示,

濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測水樣一＞水樣中的細(xì)菌留在濾膜上一將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美

藍(lán)的培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上培養(yǎng)一統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目。據(jù)圖回答問題：

格齊后的平板

⑴過濾待測水樣用到的濾杯、濾膜和濾瓶首先需要進(jìn)行消毒滅菌處理，保證實(shí)驗(yàn)不受其它

微生物干擾c與過濾有關(guān)的操作都要在________________旁講行C

⑵將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的操作。

從物理狀態(tài)角度分析，EMB培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基，制備培養(yǎng)基時(shí)需要采用

_____________法滅菌。

⑶某生物興趣小組的某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定無菌操作下將10ml待測水樣加入

到90ml無菌水中，稀釋后的100ml菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為124,

黑色菌落數(shù)平均為31,則推測1升待測水樣中的大腸桿菌數(shù)目為個(gè)。

⑷該同學(xué)進(jìn)一步思考，利用濾膜法也可能用于測定待測水樣中其他微生物的數(shù)目。他取了

兩份水樣，一份待測水樣來自變酸的果酒，從中檢測到兩種微生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)

別是________________。另一份來自某公園的觀賞湖，若要通過測量藍(lán)細(xì)菌的數(shù)目來研究水

華，培養(yǎng)基配方中則必需添加(水、無機(jī)鹽、碳源、氮源)。

【答案】(1)酒精燈火焰

(2)接種固體高壓蒸汽滅菌

(3)3100

(4)有無核膜為界限的(成形的)細(xì)胞核水、無機(jī)鹽、氮源

【分析】培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)；

根據(jù)物理性質(zhì)分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。

在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物

質(zhì)和氧氣的要求。

(1)與過濾有關(guān)的操作都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，這是因?yàn)榫凭珶艋鹧媾源嬖跓o菌區(qū)域，

能夠減少雜菌污染。

(2)將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的接種操作。從物

理性質(zhì)角度分析，EMB培養(yǎng)基能夠讓微生物在培養(yǎng)基上形成菌落，屬于固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)

基通常采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。

(3)某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測定，無菌操作下將10mL待測水樣加入到90mL無菌

水中，即稀釋了10倍，稀釋后的100ml菌液通過濾膜法測得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均

為124,黑色菌落數(shù)平均為31,黑色菌落為大腸桿菌，則推測1升待測水樣中的大腸耳菌

數(shù)目為31-100x10x1000=3100個(gè)。

（4）變酸的果酒里含有酵母菌和醋酸桿菌，酵母菌屬于真核生物中的真菌，醋酸桿菌屬于

原核生物，它們在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是有無核膜為界限的（成形的）細(xì)胞核。若要通過測量

藍(lán)細(xì)菌的數(shù)目來研究水華，結(jié)合藍(lán)細(xì)菌是自養(yǎng)型微生物，能夠利用光合作用合成自身所需的

有機(jī)物，碳源來自空氣中為二氧化碳，故培養(yǎng)基配方中則必需添加水、無機(jī)鹽、氮源。

16.在我國，樂果是一種廣泛使用的有機(jī)磷農(nóng)藥，對樂果污染的土壤進(jìn)行微生物修復(fù)一直

是科學(xué)家研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)要從土壤中篩選能有效降解樂果的微生物，回答下列問題：

⑴用于篩選的樣品應(yīng)來自_____________的土壤。

⑵微生物馴化是指在培養(yǎng)過程中，逐步加入某種物質(zhì)，讓其逐漸適應(yīng)，得到對此種物質(zhì)耐

受或者能降解此種物質(zhì)的微生物的過程。該實(shí)驗(yàn)中，所用馴化培養(yǎng)基含有蛋白陳10.0g、

氯化鈉1.0g、磷酸二氫鉀1.0g、水1L、葡萄糖1.0g,其中的蛋白陳可提供

等營養(yǎng)要素，氯化鈉和磷酸二氫鉀除提供無機(jī)鹽外，在培養(yǎng)基中還分別具有的作

用，馴化時(shí)，培養(yǎng)液逐步加大濃度的物質(zhì)為O

⑶將馴化后的微生物進(jìn)行平板劃線純種分離時(shí)，不需要進(jìn)行一定倍數(shù)的梯度稀釋，原因是

從分離得到的單一菌落中挑取菌種，接種于牛肉膏斜面培

養(yǎng)基中適宜溫度下培養(yǎng)48小時(shí)后，可在__________C。冰箱中臨時(shí)保藏。

⑷從不同斜面培養(yǎng)基中取菌株進(jìn)行活化后制成菌懸液，接種于以樂果原液為碳源的培養(yǎng)液

中，適宜溫度振蕩培養(yǎng)22小時(shí)后，通過測定培養(yǎng)瓶中__________一可篩選出分解樂果能力

較強(qiáng)的微生物。

⑸若要探究某菌株對樂果的降解能力與樂果濃度的關(guān)系實(shí)驗(yàn)的設(shè)il思路為

【答案】（1）常年施用樂果

（2）碳源、氮源（和維生素）調(diào)節(jié)滲透壓、充當(dāng)緩沖物質(zhì)樂果

（3）通過在平板上連續(xù)劃線，可將聚集的菌種逐步稀釋分散，分離獲得單菌落4

⑷樂果的剩余量

⑸在不同濃度的樂果溶液中，接種相同量的該菌株，一定時(shí)間后測定樂果的剩余量（并計(jì)

算樂果的降解率）

【分析】各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、

特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。牛肉膏在培養(yǎng)基中的作用是為微生物生長提供碳源、氮源、

生長因子等。

【詳解】（1）本題是要從土壤中篩選能有效降解樂果的微生物，因此在樂果污染的土壤中

該微生物數(shù)量較多，所以用于篩選的樣品應(yīng)來自常年施用樂果的土壤中。

（2）蛋白豚是含C和N的有機(jī)物，可為微生物生長提供碳源、氮源（和維生素）。氯化鈉

和磷酸二氫鉀除提供無機(jī)鹽外，在培養(yǎng)基中還分別具有調(diào)節(jié)滲透壓、充當(dāng)緩沖物質(zhì)的作用，

馴化時(shí)，培養(yǎng)液逐步加大濃度的物質(zhì)為樂果，目的是篩選能有效降解樂果的微生物。

(3)平板劃線法是通過在平板上連續(xù)劃線，可將聚集的菌種逐步稀釋分散，分離獲得單菌

落，因此不需要梯度稀釋「臨時(shí)保藏需要將挑取的菌種接種于牛肉膏斜面培養(yǎng)基中適宜溫度

下培養(yǎng)48小時(shí)后，并在4C。冰箱中臨時(shí)保藏。

(4)單位時(shí)間內(nèi)剩余的樂果量越少，說明篩選出的微生物分解樂果的能力越強(qiáng)，因此通過

測定培養(yǎng)瓶中樂果的剩余量，可篩選出分解樂果能力較強(qiáng)的微生物。

(5)若要探究某菌株對樂果的降解能力與樂果濃度的關(guān)系，則自變量為樂果的濃度，因變

量為樂果的剩余量，其余無關(guān)變量應(yīng)相同且適宜，因此實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路為：在不同濃度的樂

果溶液中，接種相同量的該菌株，一定時(shí)間后測定樂果的剩余量(并計(jì)算樂果的降解率)。

17.每家每天都會產(chǎn)生一定數(shù)量的廚余垃圾，這類垃圾富含有機(jī)物，極易腐爛變質(zhì)°某廠

家對研制的微生物處理機(jī)進(jìn)行宣傳時(shí)稱幾小時(shí)能降解10公斤爛菜葉、腥臭的爛魚蝦等。研

發(fā)微生物處理機(jī)的過程中，研究人員需從廚余垃圾中分離純化出高效分解垃圾的微生物。回

答下列問題：

⑴分離純化分解菌的過程中需用到固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，對配制的培養(yǎng)基常采用

法滅菌；檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可采用的方法是_O

⑵分離分解菌時(shí)，需先將廚余垃圾樣品提取液進(jìn)行梯度稀釋，原因是______；測定培養(yǎng)液中

分解菌的數(shù)量時(shí)，需做三個(gè)重復(fù)試驗(yàn)，目的是_______O

⑶若整個(gè)分離過程中沒有受到雜菌污染，但培養(yǎng)基上出現(xiàn)了多種特征的菌落,這說明O

統(tǒng)"平板"L的菌落數(shù)時(shí)，一般在固定的時(shí)間選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為統(tǒng)II結(jié)果，這樣

做的目的是______O

⑷長期保存高效分解菌菌種時(shí)，可采用法。

【答案】(1)高壓蒸汽滅菌將未接種的培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察是

否有菌落產(chǎn)生

(2)菌液中細(xì)菌濃度較大，直接涂布培養(yǎng)很難分離獲得單菌落減小實(shí)驗(yàn)誤差

(3)多種微生物都能分解廚余垃圾(或分解菌不止一種)防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致

遺漏菌落

⑷甘油管藏

【分析】1、菌種的保存：①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏法；②對于需要長時(shí)

間保存的菌種，可以采用甘油管藏法。

2、滅菌方法：①灼燒滅的適用于接種工具；②干熱滅菌適用于玻璃器皿、金屬用具；③高

壓蒸汽滅菌使用于培養(yǎng)基及容器。

⑴滅菌方法包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌，其中對培養(yǎng)基及容器需用高壓蒸汽

滅菌c要判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可采用的方法是將滅菌后的培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察

是否出現(xiàn)菌落，若出現(xiàn)，說明滅菌不徹底。

⑵分離分解菌時(shí)若不進(jìn)行稀釋，菌液中細(xì)菌濃度會較大難以獲得單菌落。則在測定培養(yǎng)

液中分解菌的數(shù)量時(shí)，需至少做三個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，起相互對照的作用，其目的是排除偶然因素

產(chǎn)生的誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

⑶若在整個(gè)分離過程中無雜菌污染，培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌落特征，則最可能的原因是分解

菌的種類較多，形成不同的菌落，而多種微生物都能分解廚余垃圾。每隔段時(shí)間統(tǒng)計(jì)一次,

選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣做的目的是防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致菌落遺

漏0

⑷甘油管藏法適用于長期保存的菌種。利用液體培養(yǎng)基在零下20C。條件下將培養(yǎng)的菌液與

等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存。

18.自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中N?的細(xì)菌，將玉米種子用自身固氨菌拌種后播

種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量?？蒲腥藛T進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮

能力測定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如下圖。請回答：

擴(kuò)

大

培

養(yǎng)

固

氮

能

力

鑒

定

⑤

⑴步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)?填“表層”或“深層”)土壤；步驟②需充分振蕩

20min,主要目的是。

⑵步驟③將土壤懸浮液稀釋了倍，步驟④所用的接種工具是__________O

⑶下表為兩種培養(yǎng)基的配方，步驟④應(yīng)選其中的培養(yǎng)基，并加入瓊脂后進(jìn)行高

壓蒸汽滅菌、倒平板。純化培養(yǎng)時(shí)，需同時(shí)進(jìn)