黃粉蟲對(duì)幼刺參生長、消化和免疫力的影響

刺參是中國海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)資源的重要海珍品，目前隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不

斷增大，浮現(xiàn)了成參免疫力下降、幼參生長慢和成活率低等一些問

題，嚴(yán)峻制約了刺參養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)展。而黃粉蟲幼蟲粉不僅蛋白質(zhì)含量

高，而且脂肪和各種微量元素也很豐盛，尤其是含有甲殼素和自然抗

菌肽等物質(zhì)對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和豬鏈球菌等具有較強(qiáng)的抑

制作用，且黃粉蟲具有飼養(yǎng)投資小、食性雜、抗病力強(qiáng)、生長周期短

和隨時(shí)隨地即可養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn)，有效地彌補(bǔ)了魚粉的缺乏。因此將黃粉

蟲粉作為新型的具有免疫增加效果的飼料添加劑對(duì)從根本上提升刺

參免疫力、降低生產(chǎn)成本、削減病害和經(jīng)濟(jì)損失及增進(jìn)刺參養(yǎng)殖業(yè)可

持續(xù)進(jìn)展具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

據(jù)討論，在畜禽飼料中添加一定量的黃粉蟲粉能顯著提升動(dòng)物的生

產(chǎn)性能及健康水平，而將黃粉蟲粉作為飼料添加劑或魚粉的替代物應(yīng)

用于刺參養(yǎng)殖的飼喂效果目前罕有報(bào)道，尤其是黃粉蟲粉對(duì)刺參免疫

酶與消化酶活性的影響尚未見討論。實(shí)驗(yàn)試試在幼刺參飼料中用黃粉

蟲粉替代魚粉，利用觀測(cè)淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、酸性

磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)與溶菌酶

(LSZ)的活性等評(píng)價(jià)指標(biāo)，初步討論黃粉蟲粉對(duì)幼刺參生長性能、消化

功能與免疫機(jī)能的影響，旨在為黃粉蟲粉在刺參健康生態(tài)養(yǎng)殖中的合

理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

參考行情：海參市場(chǎng)行情

一、材料與辦法

1、飼料的制作

用馬尾藻、鼠尾藻、海泥、豆粕、小麥粉、谷物調(diào)和魚油、優(yōu)質(zhì)魚

粉及刺參專用復(fù)合多維制成粗蛋白含量為18.60%的勻稱粉末狀基

礎(chǔ)飼料，全部飼料原料均利用80任務(wù)準(zhǔn)篩。在等氮的基礎(chǔ)上將黃粉

蟲粉以20%、40%、60%和80%的比例代替基礎(chǔ)飼料中的魚粉，

制成4種實(shí)驗(yàn)飼料。黃粉蟲幼蟲購自錦州市花鳥魚蟲市場(chǎng)，于700

烘干研粉備用。5種實(shí)驗(yàn)飼料配方見表1。

2、飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)用幼刺參取白遼寧省錦州市金域刺參良種場(chǎng)，將225頭質(zhì)量（平

均體質(zhì)量為2.62g）和大小相像的健康幼參隨機(jī)勻稱放人15個(gè)（實(shí)驗(yàn)飼

料即為5種處理，每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)）塑料收拾箱中

（50cmX40cmX30cm）,每箱養(yǎng)15頭參，每箱放12L水。

實(shí)驗(yàn)在遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖試驗(yàn)室舉行，實(shí)驗(yàn)期為

30天，2022年3月11日-4月9日。

養(yǎng)殖刺參所用海水為渤海錦州灣自然海水，經(jīng)沉淀后使用。刺參培

養(yǎng)采納自然水溫，養(yǎng)殖期間溫度從12回逐漸升高到15團(tuán)。刺參養(yǎng)殖室

為東西向，半透亮窗簾外掛聚乙烯遮陽網(wǎng)，天天下午13:30吸

底1次，換水量為總水量的1/2,天天24小時(shí)充氣，每10天徹底清

底處理。天天吸底后1次過量投喂飼料，投飼量為體質(zhì)量的2.5%,

粉狀飼料入水后攪勻。海水鹽度為28%。?31%。，PH8.0-8.4,溶解氧

為6.6?7.5mg/L,NH4+<0.2mg/Lo

黃粉蟲養(yǎng)殖學(xué)問：黃粉蟲養(yǎng)殖

3、實(shí)驗(yàn)測(cè)定指標(biāo)

①生長指標(biāo)

實(shí)驗(yàn)期間，每10大測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組刺參體質(zhì)量，同時(shí)記錄生活狀態(tài)

和存活個(gè)體數(shù)，在實(shí)驗(yàn)的前1天與最后1天各停食1天后將每個(gè)水槽

中刺參所有稱質(zhì)量，稱量時(shí)將刺參過濾到篩絹網(wǎng)中并在于濾紙上停歇

30S,測(cè)其質(zhì)量，分析天平感量為0.01g。計(jì)算特別生長率（SGR）：

式中：M0為放養(yǎng)時(shí)刺參的頭數(shù)，MT為結(jié)束時(shí)刺參的頭數(shù)。

②刺參消化酶的測(cè)定

（1）粗酶液提取

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從每處理組的3個(gè)水槽中選擇健康、活力強(qiáng)且個(gè)頭大

的9?10頭幼刺參裝人密封袋內(nèi)，放入-70團(tuán)冰柜中冷凍備用。測(cè)定刺

參消化酣活性時(shí)將刺參在冰水中解凍，沿刺參腹部用剪刀剪開，在冰

盤上取出完整的消化道，剔除呼吸樹和腸系膜上的脂肪組織并清除腸

內(nèi)糞便（注重：要保留刺參腸道內(nèi)的淡粉色分泌物），用濾紙吸f腸表

晰

的水分，把多頭刺參的腸道合并為一個(gè)樣本，稱質(zhì)量后，置于玻璃

勻漿器中，并加入0-4團(tuán)預(yù)冷的腸道組織10倍質(zhì)量的0.02mol/LPH7.5

磷酸緩沖液，在冰浴中充分勻漿后，將勻漿液髓于高速冷凍離心機(jī)中

（0?4團(tuán)，12000r/min）離心20min,所得上清液即為粗酶液，將其置于

冰水中儲(chǔ)藏，24小時(shí)內(nèi)測(cè)定完畢。

（2）消化酶活性的測(cè)定

蛋白酶活性測(cè)定采納福林一酚法測(cè)定，在37團(tuán)每分鐘水解酪素產(chǎn)生

lRg酪氨酸為1個(gè)酶活力單位;淀粉酶活性采納淀粉一碘比色法測(cè)定,

在370,30min內(nèi)，700mL酶液中的淀粉酶能徹低水解淀粉10mg時(shí)

稱為1個(gè)淀粉酶活力單位；纖維素能活性采納3,5-二硝基水楊酸法

測(cè)定，以40團(tuán)下刺參腸道纖維素醐每分鐘催化纖維素生成lmg葡萄糖

作為1個(gè)酉每活力單位；采納聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法測(cè)定刺參脂

肪酶活性，脂肪酶活力以在PH7.5和400條件下，脂肪酶水解脂肪何

分鐘產(chǎn)生Rmol肪酸的酶量定為1個(gè)活性單位。全部消化酶活力均用

比活力（U/g蛋白質(zhì)，即所用的粗酶液中每克酶蛋白活力的國際單位）

表示，酶蛋白含量的測(cè)定采納南京建成生物工程討論所考馬斯亮藍(lán)蛋

白測(cè)定試劑盒舉行。

③刺參免疫指標(biāo)測(cè)定

（1）刺參組織勻漿上清液的制備

飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，從每處理的3個(gè)水槽中選擇健康且活力強(qiáng)的5?

6頭刺參裝入密封袋內(nèi)放入-70回冰柜中冷凍備用。測(cè)定刺參免疫酶活

性時(shí)將刺參在冰水中解凍，用濾紙吸干其表面水分后稱質(zhì)量，用剪刀

將囪冏刺參剪碎，置于玻璃勻漿器中，并加入。?4團(tuán)預(yù)冷的刺參組織

1倍質(zhì)量的氯化鈉注射液，在冰浴中充分勻漿后，將勻漿液置于高速

冷凍離心機(jī)中（0-4固12000r/min）離心20min,所得上清液置于冰水中，

用其來測(cè)定刺參的ACP、AKP、T-SOD和LSZ活性,24小時(shí)內(nèi)測(cè)定完

畢。

（2）免疫酶活性的測(cè)定

LSZ、ACP、AKP和T-SOD的測(cè)定試劑盒購自南京建成生物工程討

論所。

LSZ活力的測(cè)定：采納自身對(duì)比法舉行測(cè)定，刺參組織勻漿上清液

取樣量為0.2mL,在可見分光光度計(jì)530nm處，測(cè)反應(yīng)樣品的透光率,

醐活力計(jì)算公式為：

LSZ含量（U/mL）=｛（測(cè)定管透光度uT-測(cè)定管透光度UT。）/（標(biāo)準(zhǔn)管透

光度ST2-標(biāo)準(zhǔn)管透光度STn）｝X標(biāo)準(zhǔn)管質(zhì)量濃度（80U/mL）X樣本測(cè)試前

稀釋倍數(shù)（2倍）

T-SOD活力的測(cè)定：刺參組織勻漿上清液取樣量為10,組織勻漿

中T-SOD活力定義為每毫克組織蛋白在1mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)

50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的超氧化物歧化酶（SOD）量為一個(gè)SOD活力單位（u）,計(jì)

算公式：

T-SOD活力（U/mg蛋白）=［（對(duì)比管吸光度一測(cè)定管吸光度）/對(duì)比管

吸光度岡反應(yīng)液總體積/取樣量）/（待測(cè)樣本蛋白質(zhì)量濃度x50%）ACP

與AKP活力徹低根據(jù)試劑盒說明書組織勻漿中ACP與AKP的測(cè)定辦

法舉行測(cè)定與計(jì)算。

刺參組織勻漿上清液中蛋白質(zhì)量濃度的測(cè)定：采納南京建成生物工

程討論所考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒舉行測(cè)定。取刺參組織勻漿上清

液IOnL,加入氯化鈉注射液40HL（此時(shí)稀釋5倍），即為稀釋10倍的

刺參組織勻漿待測(cè)樣品（注：在制備上清液時(shí)已稀釋2倍）。

蛋白質(zhì)量濃度計(jì)算公式：蛋白質(zhì)量濃度（g/L）=｛（測(cè)定管0D值一空白

管0D值）/（標(biāo)準(zhǔn)管0D值?空白管0D值）｝x標(biāo)準(zhǔn)管質(zhì)量濃度（0.563g/L）x

組織樣品稀釋倍數(shù)（10倍）。

4、數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析舉行單因

素方差分析，并用Duncan氏新復(fù)極差法（SSR法）比較各組間平均值的

差異顯著性。

二、結(jié)果與分析

1、添加黃粉蟲粉對(duì)刺參生長和成活的影響從表2可見：經(jīng)過30天

的飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，黃粉蟲粉各實(shí)驗(yàn)組刺參的SGR均顯著高于對(duì)比組，20%

組、40%組、60%組和80%組的幼參SGR分離比對(duì)比組高25.76%、

56.99%、111.30%和186.72%；隨著黃粉蟲粉替代量的遞增，刺參的

SGR和SR都逐漸上升,且黃粉蟲粉替代魚粉各組間的SGR差異顯著；

各實(shí)驗(yàn)組幼參的SR變化在67.74%-95.56%,20%黃粉蟲替代組、40%

黃粉蟲替代組、60%黃粉蟲替代組及對(duì)比組的SR彼此差異均不顯著,

而80%黃粉蟲替代組的刺參sR顯著高于前4組。

2、黃粉蟲粉替代魚粉對(duì)刺參消化酶活性的影響

從表3可見：隨著黃粉蟲粉替代魚粉量的增強(qiáng)，幼參的4種消化酶

活性展現(xiàn)嚴(yán)格的遞增趨勢(shì)；并且全部黃粉蟲粉替代魚粉實(shí)驗(yàn)組的纖維

素酶和脂肪酶活性均顯著高于對(duì)比組；在蛋白酶活性這個(gè)指標(biāo)中，惟

獨(dú)80%組顯著高于對(duì)比組，在淀粉酶活性這個(gè)指標(biāo)中，也僅有60%

組與80%組顯著高于對(duì)比組，且80%組的淀粉能與蛋白酶活性極顯

著高于60%組，而二者的纖維素酶與脂肪酶活性差異并不顯著。

3、黃粉蟲粉替代魚粉對(duì)刺參相關(guān)免疫酶活性的影響

從表4可見：刺參4種免疫酶的活性也與黃粉蟲粉替代魚粉量呈止

相關(guān)關(guān)系。與對(duì)比組相比，20%組4種免疫酶活性均顯著低于對(duì)比組，

而其他黃粉蟲替代魚粉組的AKP和T-SOD活性及80%組的ACP活性

均極顯著地高于對(duì)比組;60%組與80%組的LSZ活性顯著高于對(duì)比組、

20%組和40%組。值得注重的是，黃粉蟲替代魚粉各組的ACP、AKP

和T-SOD活性彼此間均差異顯著，而80%組與其他3組的差異極為

顯著。

三、研究

黃粉蟲成熟幼蟲含粗蛋白47.7%?54.25%,粗脂肪23.3%?

37.64%,并含有豐盛的限制性氨基酸，蛋白質(zhì)養(yǎng)分價(jià)值較高，必須

氨基酸指數(shù)和必須氨基酸賴氨酸、蛋氨酸及蘇氨酸的化學(xué)評(píng)分均高于

豆粕和膨化大豆，蘇氨酸的化學(xué)評(píng)分高于蠅蛆粉和蠶蛹而臨近魚粉,

超過了聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)提出的必須氨基酸

占氨基酸總量的40%的標(biāo)準(zhǔn)。并且黃粉蟲幼蟲脂肪酸質(zhì)量和微量元

素含量均優(yōu)于魚粉，無機(jī)元素Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu及維生素A

和維生素E含量均高于其他肉類和魚蝦類中的含量。所以黃粉蟲幼蟲

在多種動(dòng)物的飼養(yǎng)中均取得了較好的效果。討論中，用20%、40%、

60%和80%黃粉蟲粉替代魚粉均能顯著提升幼刺參的SGR和SR,并

且隨著黃粉蟲替代魚粉量的遞增，與對(duì)比組的差異越來越顯著；刺參

消化酶的活性同樣與黃粉蟲替代魚粉的量成正相關(guān)，80%黃粉蟲替代

魚粉組的各種消化酶活性極顯著高于對(duì)比組。這可能是因?yàn)辄S粉蟲氣

味鮮美且濃郁，具有很強(qiáng)的誘食功能，能刺激幼參消化液的分泌，尤

其是極大地增進(jìn)了纖維素酶與脂肪酶活性的提升，從而增強(qiáng)了刺參的

采食量，提升了幼參的生長速度。

刺參屬于無脊椎動(dòng)物，它的免疫系統(tǒng)是非特異性的，無論是在刺參

的體壁防備還是體內(nèi)免疫中，LSZ、ACP、AKP及SOD都發(fā)揮著重要的

生理作用，作為刺參的4種主要的機(jī)體免疫因子，LSZ、ACP、AKP及

SOD的活性變化可作為評(píng)價(jià)刺參免疫機(jī)能狀態(tài)的重要指標(biāo)。以往的討

論發(fā)覺，黃粉蟲幼蟲體內(nèi)存在的抗腫瘤細(xì)抱K562的抗菌肽對(duì)K562

細(xì)胞的增殖抑制作用顯然優(yōu)于羥基胭；黃粉蟲抗菌肽Te。necin純化

蛋白對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌、痢疾志賀氏菌和真

菌均有抑制作用，尤其是對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用最強(qiáng)；黃粉蟲

幼蟲血淋巴抗菌肽對(duì)豬致病性大腸桿菌和豬鏈球菌具有較強(qiáng)的抑菌

活性；而且黃粉蟲蛋白具有增強(qiáng)小鼠免疫器官質(zhì)量、增加小鼠細(xì)胞免

疫、激發(fā)和增加單核巨噬細(xì)胞功能