定，并經監(jiān)管各方征求了意見。在ICH進程第四階段，最終指導委員會批準進入第二階指導委員會批準進入第四階段，并推薦給ICH三方監(jiān)管iICH三方協(xié)調指導原則 2.指導原則 1本指導原則的目的在于提供（1）關于鑒別具有潛在免疫毒性的化合物的非臨床試驗方法的建議和（2）關于免疫毒性試驗證據權重決策方法的指導。本指導原則中免疫毒性是指非預期的人用藥物對免疫系統(tǒng)潛在不良影響的評價應包含在規(guī)范的藥物開發(fā)中。免疫系統(tǒng)毒性包括多種不良反應，這些不良反應包括對免疫應答的抑制或增強。免疫應答抑制能夠導致宿主對病原體或腫瘤細胞的抵抗力下降。免疫應答增強能夠放大自身免疫性疾病或超敏反應。藥物或藥物-蛋白加合物也可能被機體識別為異物從而激發(fā)抗藥反應，后續(xù)的藥物暴露能夠導致超敏（過敏性）反應。過去，大量科學研究、方法開發(fā)和驗證性工作致力于評價候選化合物潛在的免疫抑制或接觸致敏作用。目前尚無標準的試驗方法用于檢測由人用藥物引起的呼吸系統(tǒng)或全身性的變應原性（抗原性）或藥物特異性的自身免疫反應；也尚無任何地區(qū)要求檢測上述終點。皮膚過敏性試驗方法無區(qū)域性分歧。對于以調節(jié)免疫功能（如抑制器官移植排斥反應）為治療目的的22）對于不以影響免疫功能為治療目的的藥物，其免疫毒性可能是因為引起免疫細胞的壞死或凋亡，或藥物與靶組織和非靶用于治療癌癥的抗細胞增殖藥物是一類可以引起非預期免疫抑制的藥物。在這類情形下，非臨床研究中發(fā)現的毒性反應可以更加直觀地預測此類藥物的人體免疫毒性。也就是說，此類藥物的風險評價可能不需要通過特定的試驗來確定免疫毒性，因為此類藥物的靶組織通常為快速分裂的細胞，如骨髓來源的免疫系統(tǒng)祖細胞。因此，此類藥物對免疫功能的不良影響可以通過其藥理學活性進行預測，通常在非臨床研究中能夠被準確地評價。對于其它類型的不以抑制免疫反應為治療目的的化合物，放大的藥效學作用和非靶作用之間的差異相對模糊。例如，有些抗炎癥化合物對某些固有免疫功能有影響，但并不一定影響適應性免疫反應。本指導原則旨在為人用藥物的免疫毒性非臨床試驗提供建議。其內容僅限于非預期的免疫抑制和免疫增強，不包括過敏反應或本指導原則適用于擬用于人的新藥，以及已上市藥品申請新適應癥或者基于當前說明書申請產品變更,該變更可能引起未知和相關的免疫毒性。另外，本指導原則可能也適用于在臨床試驗期3間或上市后使用過程中觀察到免疫毒性癥狀的藥物。本指導原則現有的關于致敏和超敏反應的指導原則依然有效，不受本文件的影響。本指導原則不涉及對每一項免疫毒性試驗的具體指導，1）對于所有新的人用藥物，均應評價其是否具有潛在的免2）研究方法包括常規(guī)毒性研究（STS）以及適當的附加免疫毒性研究。應通過對相關因素（見2.1部分）的證據權重分析來下文將按照流程圖（圖1）中推薦的免疫毒性評價決策過程提示需進行附加免疫毒性研究的考慮因素包括：（1）常規(guī)毒性研究結果2）藥物的藥理性質3）目標用藥人群；（4）與已知免疫調節(jié)劑的結構相似性5）藥物的體內處置；潛在免疫毒性的初步評價信息來自常規(guī)毒性研究，嚙齒類和非嚙齒類動物的早期短周期和更長周期重復給藥試驗的研究結果4均應考慮。應進行評價的指標和組織病理學報告的詳細信息見附應通過評價常規(guī)毒性研究數據來發(fā)現藥物潛在免疫毒性指征。1）血液學變化，如白細胞減少/增多、粒細胞減少/增多或淋2）免疫器官重量和/或組織學改變（如胸腺、脾臟、淋巴結）；3）血清球蛋白水平的改變，在缺少如對肝臟或腎臟影響等4）感染發(fā)生率升高；5）腫瘤發(fā)生率的升高，在缺少如遺傳毒性、激素作用或肝上述指標的改變能夠反映出免疫系統(tǒng)受到抑制或作用增強。免疫抑制通常表現為免疫指標數值的降低，而免疫增強通常表現為免疫指標數值的提高。但這些關系并不是絕對的，某些情況下與評價其它器官系統(tǒng)的毒性風險類似，對免疫毒性的評價應5可能繼發(fā)于其它影響因素（如應激，見附錄1.4部分）的改如果受試物的藥理性質提示其可能影響免疫功能（如抗炎藥物應考慮進行附加的免疫毒性研究。在采用證據權重法決策是否需要進行附加的免疫毒性研究時，從非臨床藥理學研究中獲得的關于化合物對免疫系統(tǒng)的影響信息可作為如果大部分目標用藥人群因疾病狀態(tài)或因同步治療而處于免與已知免疫抑制劑結構類似的化合物應考慮進行附加的免疫6當臨床研究結果提示藥物對患者有免疫毒性作用時，應進行2.2證據權重分析應基于上述所有考慮因素獲得的信息進行證據權重分析，以確定是否存在免疫毒性方面的擔憂。當上述單一因素具有足夠的證據強度時，應進行附加的免疫毒性研究。當兩個或多個因素提示有潛在免疫毒性時，即使單一因素證據并不充分，也同樣有必要進行附加研究。如果未進行附加免疫毒性研究，申請人應闡述當確實存在擔憂時，應進行附加的免疫毒性研究以驗證化合物潛在的免疫毒性。這些研究也有助于確定受影響的細胞類型、影響的可逆性和作用機制。此類信息也有助于進一步了解藥物的如果證據權重分析提示有必要進行附加的免疫毒性研究，有多種試驗方法可供選擇。如果常規(guī)毒性研究提示存在免疫毒性，應根據觀察到的免疫學改變的性質和化合物類別相關的擔憂決定采用何種適用的附加免疫毒性試驗方法。推薦進行免疫功能研究，7如T細胞依賴性抗體反應試驗（T-celldependentantibodyresponse,TDAR）。如果常規(guī)毒性研究中受影響的細胞類型不確定是否參與了TDAR，對此類特定受影響細胞類型可能需要進行功能測定試驗（見附錄）。當靶細胞不明確時，推薦進行免疫功另外，白細胞的免疫表型檢測（非功能性試驗）可用于鑒別對藥物誘導的免疫毒性進行評估時，普遍接受的試驗設計是究中使用非嚙齒類動物。如果在常規(guī)毒性研究中發(fā)現對免疫系統(tǒng)的不良影響，在附加的免疫毒性研究中，動物種屬、品系、劑量、給藥期限和給藥途徑應盡可能與常規(guī)毒性研究一致。研究通常應使用兩種性別的動物（非人靈長類動物除外），使用單一性別的動物時應有合理依據。高劑量應高于未見不良反應劑量（no應對附加的免疫毒性研究結果進行評價，以確定是否有足夠1.附加研究可能顯示未發(fā)現免疫毒性風險，無需進行進一步82.附加研究可能顯示存在免疫毒性風險，但無法提供充足的4.與臨床研究相關的免疫毒性試驗的時間完成。適當時可以為臨床試驗提供用于檢測免疫系統(tǒng)的指標。附加的免疫毒性研究的時間安排取決于受試物作用的性質以及如果附加的免疫毒性試驗出現陽性結果而需要開展的臨床試驗類型。如果目標用藥人群是免疫功能低下的患者，免疫毒性研究可以在EvaluationofBiotechnology-DerivedPharmaceuticals”2.ICHHarmonisedTripart“PharmacovigilancePlanning”9證據權重分析證據權重分析支持進行附加的免疫毒性研是（3.0）進行附加的免疫毒性研究否否是否（3.4Pt2）考慮進行進一步的免疫毒性研究為發(fā)現免疫毒性指征，在常規(guī)毒性試驗中需評價下表中所列的指標。這些指標（除血液學和臨床生化外）以及獲取樣本和評價組織切片的方法詳見專業(yè)毒性病理學會的相關文胸腺、脾臟、引流淋巴結和至少一個額外的淋巴結、骨髓2、Peyer,s結3、支氣管相關的淋巴1當出現無法解釋的球蛋白水平變化時，需檢測免疫球蛋白。2無法解釋的外周血細胞變化或組織病理學發(fā)現可能提示對骨髓細胞進行評價。3僅限于經口給藥。4僅限于吸入劑或鼻腔給藥。推薦將白細胞總數和絕對白細胞分類計數用于免疫毒性評價。當評價球蛋白水平的變化時，應考慮到其它因素的影響（如肝毒性、腎毒性）。血清球蛋白水平的變化可提示血清免疫球蛋白水平發(fā)生變化。雖然血清免疫球蛋白并不是免疫抑制的敏感指標，但在特定情況下，免疫球蛋白水平檢測剖檢時應評價所有淋巴組織的大體病理學改變。但嚙齒臟和胸腺的重量。為盡量減少犬和猴脾臟重量的誤差，動物解剖時應放血完全。胸腺隨著年齡的增長而萎縮會對獲得準脾臟和胸腺的組織病理學改變應被視為系統(tǒng)免疫毒性的指征。應對引流淋巴組織或接觸給藥部位（暴露于最高濃度藥物）的淋巴組織進行檢查。經口給藥時這些淋巴組織包括Peyer’s結和腸系膜淋巴結；吸入給藥時包括支氣管相關淋巴組織（BALT）；吸入或鼻腔給藥（如果可能）時包括鼻相關淋巴組織（NALT）；經皮、肌肉、皮內、鞘內或皮下包括鄰近部位的引流淋巴結。申請人應根據經驗自行選擇應進行檢查的特定淋巴結和額外的淋巴結。對于靜脈給藥的藥在記錄淋巴組織的改變和報告給藥相關的改變時，推薦在常規(guī)毒性研究中，最大耐受劑量或接近最大耐受劑量能夠導致與應激相關的免疫系統(tǒng)的改變（如放大的藥效學作用）。這些對免疫系統(tǒng)的作用可能由皮質酮或皮質醇釋放增加或其它介質引起。通常觀察到的應激相關的免疫學改變包括外周血中性粒細胞增加、淋巴細胞減少，胸腺重量減輕，胸腺皮質細胞減少和相關的組織病理學改變，以及脾臟、淋巴結的細胞構成的改變。此外，還可能觀察到腎上腺重量增加和/或腎上腺皮質增生的組織學證據。伴有臨床癥狀（如體重減輕和活動減少）的胸腺重量減輕通常可歸因于應激所致。上述指標的單獨改變并不能充分證明出現應激相關的免疫毒性。有充分證據說明出現的免疫學改變與應激相關時，才可一般而言，應選擇已廣泛使用且已證明對已知免疫抑制劑有足夠的敏感性和特異性的免疫毒性試驗方法。然而某些情況下，所選擇的試驗方法可能尚未完成充分驗證和/或尚未被廣泛使用。在這些情況下，需要提供使用該方法的科學性和機制性方面的依據，如果有可能，試驗中需設置合適的陽在不同實驗室進行的每項免疫毒性試驗，其結果都可能存在差異。在大部分情況下，這些變化并不影響該試驗方法對免疫毒性的評價能力。然而，為了保證試驗操作的正確和熟練，試驗中應對一些常規(guī)的方法學驗證參數進行考察。這些參數包括批內和批間精密度、不同技術人員操作之間的精密度、檢測限、定量線性范圍和樣品的穩(wěn)定性。另外，還應確認試驗方法對已知免疫抑制劑的敏感性。建議每個實驗室在檢測受試物的同時設立陽性對照或定期對陽性對照進行檢測，以證明試驗操作的準確性（靈長類動物試驗除外）。對于免疫表型分析，如果試驗方法經過了適當的驗證，可能沒TDAR試驗應采用公認的T細胞依賴性抗原，如可以引起（KLH）。應證明所選擇的試驗評價指標對于所選擇的試驗和動物種屬是最適合的。免疫用抗原不應與未獲得驗證的佐劑一同使用。鋁佐劑僅被接受用于非人靈長類動物試驗。TDAR反應具有動物品系依賴性，在小鼠表現得更為明顯。在遠交系大鼠中，即使同一組的動物也可能存在較大差異。近交系大鼠可用于提供充分的暴露量數據以便與常規(guī)毒性試驗中采用的品系進行橋細胞反應相比，該方法的優(yōu)點之一在于試驗中能夠連續(xù)采集樣品。在猴試驗中，由于動物間抗體響應動力學存在高度變異，連續(xù)采集血樣非常重要。對于這些試驗，數據可采用不捕獲抗原的制備非常重要。整體固定的紅細胞或細胞膜制品免疫表型分析指采用抗體進行白細胞亞型的鑒定和/或白細胞亞型的計數。免疫表型試驗通常采用流式細胞術或免疫流式細胞術用于特定細胞群計數時不屬于功能性檢測。然而，流式細胞術可用來測定淋巴細胞的抗原特異性免疫應答。外周血細胞流式分析數據能夠與臨床試驗中外周血白細胞分析數據進行橋接。推薦采用淋巴細胞亞型的絕對數量和與流式細胞術相比，免疫組化的優(yōu)點之一在于，如果常規(guī)毒性試驗中發(fā)現免疫毒性指征，可對相關組織進行回顧性分析。另外，能夠觀察到淋巴組織中某一特定區(qū)域的細胞類型的改變。某些動物種屬中的一些淋巴細胞標志物對甲醛固定敏感，只能在采用特定固定劑或速凍固定的組織中檢測到。當采用免疫表型研究表征或鑒別特定白細胞群的改變時，應根據觀察到的變化選擇待評價免疫器官和/或外周血。免疫表型研究易于結合常規(guī)重復給藥毒性研究進行，在給藥期和如果免疫表型分析顯示自然殺傷（NK）細胞數量發(fā)生變化，或常規(guī)毒性試驗發(fā)現病毒感染率升高，或基于其它一些用已經給予受試物的動物組織（如脾臟）或血樣進行離體試驗。將制備的效應細胞與51Cr標記的靶細胞共同培養(yǎng)。如果經過充分驗證，也可以使用非放射性標記的新試驗方法。對于每一個試驗，應考察不同的效應細胞/靶細胞比，以獲得足2.5宿主抵抗力研究宿主抵抗力研究是在對小鼠或大鼠給予不同劑量的受試物后，再用不同濃度的病原體（細菌、真菌、病毒、寄生蟲）或腫瘤細胞進行攻擊。通過比較溶媒對照組和受試物組的病原體感染情況或腫瘤負荷情況，判斷受試物是否能改變宿主的抵抗力。已經建立了多種病原體模型用于評