生物制藥復(fù)習(xí)重點(diǎn)

【專業(yè)符號】

rhIFN重組人干擾素EPO促紅細(xì)胞生成素rhGH重組人生長激素

rhtPA重組人組織纖溶蛋白酶源激活劑INS胰島素HBV乙肝病毒

HBsAg乙型肝炎表面抗原IL白細(xì)胞介素CSF集落刺激因子SOD

超氧化物歧化酶PEG聚乙二醇

Ag抗原Ab抗體SCF超臨界流體RCF相對離心力HPLC高效液

相色譜

SDSSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法HIC疏水作用層析IEF等點(diǎn)聚

焦電泳

PCR聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)

G-CSF粒細(xì)胞集落刺激因子LacZB-半乳糖昔酶

IPTG異丙基-B-D-硫代叱喃半乳糖昔DTT二硫蘇糖醇CM短甲基

DEAE二乙氨基乙基MVL脂質(zhì)體多囊顆粒McAb單克隆抗體IFN

干擾素

CSF集落刺激因子HAMA人抗鼠抗體反應(yīng)GF生長因子【名詞解

釋】

1生物藥物：來源于生物體的，用于預(yù)防治療和診斷或用于調(diào)節(jié)機(jī)體

生理功能，促進(jìn)集體康復(fù)、保健物質(zhì)。

干細(xì)胞：是一類未分化的細(xì)胞或原始細(xì)胞，是具有自我復(fù)制能力的多

潛能細(xì)胞。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：將外源基因?qū)氩溉閯?dòng)物的受精卵和胚胎中,

使導(dǎo)入基因與受精卵染色體整合，并將外源基因穩(wěn)定的傳給自帶，使子代

表現(xiàn)外源基因的性狀。基因治療：在基因水平上治療疾病的方法，其手

段包括，基因置換，基因修正，基因修飾，基因失活，引入新基因等。反

義藥物（信息藥物）：是根據(jù)堿基互補(bǔ)原理，用人工合成或生物體內(nèi)合成

的載有特殊生物信息的藥物分子和特殊核酸酶。生物技術(shù)：利用生物有

機(jī)體和其部分組成成分，形成新的技術(shù)手段來發(fā)展新產(chǎn)品和新工藝的一種

技術(shù)體系。

細(xì)胞工程：通過細(xì)胞融合入，核質(zhì)轉(zhuǎn)移，染色體或基因移植以及組織

和細(xì)胞培養(yǎng)等方法，重組細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物，以獲得人們所需的特定的

細(xì)胞，細(xì)胞產(chǎn)品和新物種的生物工程技術(shù)。

酶工程：指通過化學(xué)方法，酶學(xué)方法和DNA重組技術(shù)改善自然酶的形

成，結(jié)果和性質(zhì)，提高酶的催化效率，降低成本并在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)化中

應(yīng)用。

微生物工程：又稱發(fā)酵工程，是一門利用微生物的生長和代謝活動(dòng)來

生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的工程技術(shù)，是生物工程的重要組成部分。

2生化藥物：從生物體分離純化制得的生化基本物質(zhì)，以及用化學(xué)合

成，微生物合成或現(xiàn)代生物技術(shù)制得的一類藥物。生物技術(shù)藥物：利用

生物體或其組成部分發(fā)展產(chǎn)品的技術(shù)體主要是DNA重組技術(shù)研制的藥物。

基因工程藥物：利用重組DNA技術(shù)，將該基因?qū)肟梢源罅慨a(chǎn)生的受

體細(xì)胞中不斷繁殖或表達(dá)，并能進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)的基因或蛋白質(zhì)。

生物制品：引用普通的或以基因工程，細(xì)胞工程，蛋白質(zhì)工程，發(fā)酵

工程等生物技術(shù)獲得的微生物，細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源組織和液體等生物

材料制備，用于疾病預(yù)防，治療和診斷的藥品。

疫苗：一切通過注射或黏膜途徑接種，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對特定致

病原的特異性抗體或細(xì)胞免疫，從而使機(jī)體獲得保護(hù)或消滅該致病原的生

物制品。

3親和層析：利用生物分子與配基之間所具有的專一而又可逆的親和

力

紙層析法：紙纖維上吸附的水為固定相，有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，當(dāng)流動(dòng)

相流經(jīng)固定相，樣品中各組分電荷，親和力等差異，各組分分配不同，以

不同速度前進(jìn)而分離。

超臨界流體萃取技術(shù)：supercritical

fluid,scf利用超臨界流體，即其溫度和壓力略超過或靠近臨界溫度（Tc）

和臨界壓力（pc）,介于氣體和液體之間的流體為萃取劑，從固體或液體

中萃取出某種高沸點(diǎn)或熱敏性成分。

4基因工程:是指在分子水平上按照人們的設(shè)計(jì)方案將DNA片段插入

載體DNA分子，從而實(shí)現(xiàn)DNA分子體外重組，產(chǎn)生新的自然界從未有過

的重組DNA,然后再將之引入特定的宿主細(xì)胞，進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)，使宿主

細(xì)胞獲得新的遺傳性狀的技術(shù)。

蛋白質(zhì)工程：基因工程的基礎(chǔ)上，結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)，計(jì)算機(jī)輔助設(shè)

計(jì)和蛋白質(zhì)化學(xué)等多學(xué)科的基礎(chǔ)知識通過對基因的人工定向改造等手段，

對蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾，改造和拼接以生產(chǎn)出能滿足人類需要的新型蛋白質(zhì)的

技術(shù)。

重組DNA技術(shù)：在體外將兩個(gè)或多個(gè)不同的DNA片段全部或部分構(gòu)

建成一個(gè)DNA分子的方法。

限制性內(nèi)切酶：一類能識別并切割雙鏈DNA分子中特異核昔酸序列的

DNA水解酶。

聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：指在四種脫氧核昔三磷酸存在下，以寡聚糖核昔

酸為引物，以單鏈DNA為模板，經(jīng)DNA聚合酶催化，合成DNA互補(bǔ)鏈達(dá)

到基因擴(kuò)增目的的過程。

原位雜交：直接用探針與菌落或組織細(xì)胞中核酸雜交，未改變核酸位

置。

插入失活：抗四環(huán)素基因上插入一個(gè)外源基因后，導(dǎo)致抗四環(huán)素基因

失活，變成只對氨葦青霉素有抗性。

5初生氨基酸：微生物通過固氮作用，硝酸還原自然界吸收氨使酮酸

氨基化成相應(yīng)的氨基酸，或微生物通過轉(zhuǎn)氨酶作用，將一種氨基酸的氨基

轉(zhuǎn)移到另一種酮酸上，生成的新氨基酸。

固定化酶：借助物化方法，將酶限制或定位于特定空間仍具有催化活

性。

次生氨基酸：在微生物作用下，以初生氨基酸為前體轉(zhuǎn)化成的其他氨

基酸。

吸附法：通過載體表面和酶分子表面的次級鍵相互作用。物理吸附：

通過氫鍵，疏水鍵和哈電子力等將酶固定于不溶性載體。

共價(jià)結(jié)合法：借助共價(jià)鍵將酶的活性非必需側(cè)臉集團(tuán)和載體的功能基

因進(jìn)行偶聯(lián)。交聯(lián)法：利用雙功能或多功能試劑CHO一戊二醛CHO在酶

分子間，或酶分子與載體間。交聯(lián)以共價(jià)鍵。

包埋法：將酶或細(xì)胞定位于凝膠網(wǎng)絡(luò)或微膠囊內(nèi)技術(shù)。

脂質(zhì)體：是具有脂雙層結(jié)構(gòu)和一定包裹空間的微球體。

抗體藥物：抗體是有機(jī)體在抗原性物質(zhì)的刺激下所產(chǎn)生的一種免疫球

蛋白，能與細(xì)菌，病毒或毒素等異源性物質(zhì)結(jié)合而發(fā)揮預(yù)防，治療疾病作

用。

細(xì)胞因子：多種細(xì)胞所分泌的能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化、調(diào)節(jié)免疫功能、

參與炎癥發(fā)生和創(chuàng)傷愈合等小分子多肽。

多肽類藥物：機(jī)體特定腺體合成并釋放的一種物質(zhì)，通過與遠(yuǎn)程敏感

細(xì)胞表面的手提相互作用而使靶細(xì)胞發(fā)生變化。

基因工程技術(shù)：利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對編碼抗體的基因按

不用需要進(jìn)行加工改造和重新裝配，經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體

分子，第二代單克隆抗體。

單克隆抗體：由一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的細(xì)胞株（或克隆系）產(chǎn)生的抗一種

抗原決定簇的抗體。

單克隆抗體技術(shù)：體外能無線增殖的骨髓瘤細(xì)胞和能分泌抗體的小鼠

肝臟B淋巴細(xì)胞融合，制備雜種細(xì)胞，再通過篩選和克隆化培養(yǎng)生產(chǎn)某種

預(yù)定性質(zhì)的單克隆抗體，又可在體外無限增值。

質(zhì)粒：獨(dú)立于染色體外能夠進(jìn)行自我復(fù)制的雙鏈DNA分子。

【填空題】疫苗分類

1傳統(tǒng)性疫苗:a滅火疫苗b減毒疫苗2新型疫苗:a重組疫苗b核酸疫

苗

3治療（預(yù)防）性疫苗:a重組幽門螺桿菌疫苗Hp；b乙肝（HBV）治

療性疫苗；C針對自身免疫性疾病治療性疫苗；d心血管病疫苗；e腫瘤疫

苗；f糖尿病疫苗抗體藥物結(jié)構(gòu)分類

1診斷性抗體：單克隆抗體和多抗2鼠源和兔源3治療性抗體：人源

性或人源化抗體

抗體藥物按結(jié)構(gòu)分5類

1鼠或兔源抗體：用于各種診斷試劑，0KT-3,美國FDA批準(zhǔn)的第一單

抗，抗CD3,用于治療和預(yù)防急性腎移植排斥反應(yīng)。

2嵌合抗體：人源序列2/3,鼠源1/33人源化抗體：人源序列90%,

鼠源序列10%

4全人源抗體：噬菌體展示技術(shù)Humira,轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)Vectibix5抗

體片段：Fab、scFv.、dsFv、Diabody>Minibody

生物技術(shù)的基本內(nèi)容

a基因工程b細(xì)胞工程c酶工程d微生物工程：發(fā)酵工程

酶與細(xì)胞的固定化方法

酶：a可溶一一間歇；b固定化一一間歇（吸附、包埋）；連續(xù)（交聯(lián)、

共價(jià)鍵結(jié)合）

基因藥物種類

1基因治療2反義核酸藥物3小干擾RNA生物制品分類

1疫苗2抗毒素及免疫血清3血液制品4細(xì)胞因子及重組DNA產(chǎn)

品5診斷制品

生物藥物分類

按化學(xué)本質(zhì)和化學(xué)特性分類

1氨基酸類藥物及其衍生物：a單一氨基酸制劑b復(fù)方氨基酸制劑2

多肽和蛋白質(zhì)類藥物：a多肽b蛋白質(zhì)類藥物c細(xì)胞生長因子

3酶類藥物：a助消化的酶類b消炎酶c心血管疾病的治療酶d抗

腫瘤類e其他酶類f輔酶類藥物

4核酸及其降解物和衍生物：a核酸類b多聚核昔酸c核昔、核昔酸

及其衍生物5多糖類藥物6維生素與輔酶

7脂類藥物：a磷脂類b多價(jià)不飽和脂肪酸和前列腺素c膽酸類d固

醇類f葉琳類按原料來源分類：人體組織來源、動(dòng)物組織來源、微生物

來源、植物來源、海洋生物來源

按功能用途分類：治療藥物、預(yù)防藥物、診斷藥物、其他生物醫(yī)藥用

品、常用提取方法：1.酸、堿、鹽水溶液提取方法2有機(jī)溶劑提取3表

面活性劑提取方法與反膠束萃取法4雙水相萃取法5超臨界萃取法

測定蛋白質(zhì)的濃度方法：凱氏定氮法、紫外吸收法、分光光度法、考

馬斯亮蘭法蛋白質(zhì)純度的方法：色譜純、電泳純、結(jié)晶純

層析分離方法：吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠層析、親

和層析、疏水作用層析

空間結(jié)構(gòu)分析方法

二級結(jié)構(gòu)的比例：圓二色譜法

三維結(jié)構(gòu)：aX射線晶體衍射法-蛋白質(zhì)晶體b核磁共振c電子顯微鏡

按分子大小分離方法：有超濾法、透析法（膜分離法）、凝膠過濾法、

超速離心機(jī)法

按所帶電荷差異分離方法：電泳、離子交換層析、等點(diǎn)聚焦

親和層析方法：免疫親和層析、生物親和層析、金屬螯合親和層析、

染料親和層析、凝集素親和層析

重組DNA技術(shù)必備的四個(gè)工具：工具酶、載體、目的基因（靶基因）、

宿主細(xì)胞主要工具酶：限制性內(nèi)切酶、T4DNA連接酶、大腸桿菌DNA聚

合酶I、反轉(zhuǎn)錄酶質(zhì)粒三種構(gòu)型：cccDNA、LDNA、OCDNAPCR技術(shù)反應(yīng)

周期三個(gè)步驟：高溫變性、低溫退火、適溫延伸

PCR技術(shù)的應(yīng)用：遺傳性疾病的基因診斷、傳染病的診斷（肝炎病毒）、

癌基因監(jiān)測、法醫(yī)學(xué)（親子鑒定）上的應(yīng)用、DNA測序、基因克隆、引入

基因點(diǎn)突變，基因融合等

DNA重組體篩選和鑒定方法：抗生素抗性基因分析法、X-gal顯色反應(yīng)

篩選重組體、質(zhì)粒小量快速提取加酶切鑒定20種蛋白質(zhì)氨基酸和分類

根據(jù)R基側(cè)鏈的極性：a非極性AAb極性AA

最大吸收波長：Trp最大吸收波長為279nm,phe259nm,tyr278

a-氨基參加的反應(yīng):與亞硝酸反應(yīng)（脯氨酸除外）、與?；噭┓磻?yīng)、

煌基化反應(yīng)、Edman反應(yīng)、脫氨基反應(yīng)、

a-氨基和a-殿基共同參加的反應(yīng)和作用：荀三酮反應(yīng)、成肽反應(yīng)、

發(fā)酵法的基本過程：培養(yǎng)基與滅菌一菌種一菌種一滅菌接種發(fā)酵一產(chǎn)

品提取及分離純化

氨基酸分析主要方法：紙層析法、薄層層析法、高效液相層析法（HPLC）、

質(zhì)譜（MS）

氨基酸分離方法：溶解度法、特殊試劑沉淀法、吸附法、離子交換法、

等電點(diǎn)沉淀法

氨基酸的生產(chǎn)方法和特點(diǎn)：蛋白質(zhì)水解法、化學(xué)合成法、發(fā)酵法、酶

法

固定化方法：a載體結(jié)合法：共價(jià)結(jié)合法、離子結(jié)合法、物理吸附法

b交聯(lián)法c包埋法：格子型、散膠囊型多肽抗生素的作用：抗菌活性，免

疫活性，抗氧化作用，結(jié)合礦物質(zhì)，殺蟲、抗病毒作用

多肽藥物的種類：1、多肽激素：促皮質(zhì)激素、胃泌素、胸腺素2、多

肽類細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子：表皮生長因子、轉(zhuǎn)移因子等3、其他生化藥物：

蜂毒、蛇毒、各種水解物

與蛋白質(zhì)分離純化相關(guān)的理化特性：分子大小，分子形狀，帶點(diǎn)特性，

溶解特性，與配體特異性結(jié)合不同，吸附性質(zhì)，變性和復(fù)性

蛋白質(zhì)的粗分級方法：硫酸鏤分級沉淀，有機(jī)溶劑分級沉淀，超速離

心，等電點(diǎn)沉淀，透析、超過濾，蛋白質(zhì)結(jié)晶

蛋白質(zhì)溶液的濃縮方法：鹽析濃縮，有機(jī)溶劑沉淀濃縮，葡聚糖凝膠

濃縮，聚乙二醇透析濃縮，超濾濃縮，真空減壓濃縮與薄膜濃縮

【簡答題】

生物制藥分類方法？能舉二例。（填空題）生物制品的概念（名解）、

特點(diǎn)、分類（填空）。

1其質(zhì)量控制和質(zhì)量檢定是采用生物學(xué)分析方法，其效價(jià)或生物活性

檢定有其變異性

2生物制品原材料、中間品、成品、運(yùn)輸、貯存、甚至使用保持在“冷

鏈”系統(tǒng)中3特別是預(yù)防制品使用對象不是病人，而是健康人群

4生物制品的質(zhì)量控制實(shí)行生產(chǎn)全過程監(jiān)控。

離子交換色譜的操作步驟1離子交換劑預(yù)處理

2離子交換劑轉(zhuǎn)型（陽離子交換劑用NaOH處理，可轉(zhuǎn)為Na+型，用

HCI處理，則轉(zhuǎn)為H+型；陰離子交換劑用NaOH處理轉(zhuǎn)為0H-型，用HCI

處理轉(zhuǎn)為CI-型等）3裝柱

4溶劑或緩沖液平衡5上柱（加樣）

6洗脫和收集（洗脫液中應(yīng)含有離子，樣品離子交換，交換劑親和力）

7再生（再次轉(zhuǎn)型）分離純化原理

1根據(jù)分子形狀與分子大小2根據(jù)電荷差異

3根據(jù)分子極性與溶解度大小4根據(jù)吸附特性

5根據(jù)生物配基特性基因工程的基本過程

1目的基因（靶基因）的制備

2能自我復(fù)制并具有選擇幾號的載體的選擇與制備

3目的基因與載體的鏈接

4將重組DNA分子轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，并在其中進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增5

重組子的篩選與鑒定6表達(dá)產(chǎn)物的鑒定

7工程菌（細(xì)胞）的大規(guī)模培養(yǎng)8表達(dá)產(chǎn)物的分離與純化II型限制

酶的基本特性

1識別位點(diǎn)為4~8核昔酸序列2識別位點(diǎn)即為切割位點(diǎn)

3位點(diǎn)上核昔酸順序通常呈雙重旋轉(zhuǎn)對稱結(jié)構(gòu)，即呈回文結(jié)構(gòu)。理

想質(zhì)粒載體具備的條件

1其分子結(jié)構(gòu)中帶有多克隆位點(diǎn)（MCS）,多個(gè)單一限制酶切位點(diǎn)

2構(gòu)建后的重組質(zhì)粒必須易于轉(zhuǎn)化3帶有一個(gè)以上強(qiáng)選擇性標(biāo)記

4分子量較小，屬松弛型復(fù)制控制（拷貝數(shù)多，可大10~200個(gè)拷貝

受宿主細(xì)胞的控制不嚴(yán)），便于操作5宿主范圍小，無感染性

6具有復(fù)制起始點(diǎn)（origin,ori）表達(dá)載體具備的條件1一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)

子Lac（乳糖啟動(dòng)子）或Trp（色氨酸啟動(dòng)子）、及其兩側(cè)的調(diào)控序列2有

SD序列且該序列與起始密碼ATG之間要有合適的距離

3在克隆基因與啟動(dòng)之間有正確的閱讀框架

4外源基因下游有轉(zhuǎn)錄終止子等目的基因獲得的常用方法1基因

分離的物理方法2基因的化學(xué)合成

3聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）4CDNA文庫的建立（逆轉(zhuǎn)錄法）5基

因組文庫法

6鳥槍法，又成散彈法

AA在醫(yī)藥中的應(yīng)用：構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本組成單位；蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值是

氨基酸作用的反映（八必須）；氨基酸制劑：改善營養(yǎng)狀況促進(jìn)康復(fù)（精

氨酸組氨酸外界補(bǔ)充）；治療消化道疾?。汗劝彼岣拾彼峒捌溲苌?；治

療肝病：精氨酸鹽酸鹽、谷氨酸鈉、蛋氨酸、瓜氨酸；治療腦及神經(jīng)系統(tǒng)

疾病；腫瘤治療；高氨血癥、肝機(jī)能障礙：精氨酸；低鉀癥心臟病、肝病、

糖尿?。禾於彼幔欢d發(fā)癥：半胱氨酸；降壓，心絞痛：組氨酸

固定化酶概念與特性：借助理化方法，將酶限制或定位與特定空間，

仍具有催化活性，此即為固定化酶，又叫固著酶;優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性提高，半衰

期延長；酶與底物易于分開，可長期反復(fù)使用；產(chǎn)品易純化，質(zhì)量高；可

連續(xù)生產(chǎn)，自動(dòng)控制；酶利用率高；“三廢”少；缺點(diǎn)：要進(jìn)行固定化載

體和固定化條件的選擇；活力有損失；酶需經(jīng)純化制備；投資大，成本高;

對操作管理人員要求高。

發(fā)酵法的基本過程：培養(yǎng)基與滅菌；接種及發(fā)酵罐培養(yǎng)控制；取樣及

分離純化。技術(shù)關(guān)鍵是選擇合適工業(yè)化的高產(chǎn)氨基酸新菌種及其優(yōu)化發(fā)酵

條件。

固定化生產(chǎn)L-Asp:菌種培養(yǎng)（天冬氨酸酶）；E-coli的固定（菌體明膠

戊二醛凝固洗滌）；轉(zhuǎn)化反應(yīng)（延胡索酸鏤轉(zhuǎn)化液）；產(chǎn)品純化與精致（過

濾PH2.8結(jié)晶稀氨水溶解活性炭脫色真空干燥）

多肽及蛋白質(zhì)類藥物的制備過程：原材料的獲取